牛乳头瘤病毒2型L1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

论文摘要

试验旨在表达牛乳头瘤病毒（BPV）的L1衣壳蛋白,并制备其多克隆抗体。对疑似牛乳头状瘤的病料进行病理组织学检查,采用L1基因简并引物FAP59/FAP64进行扩增,然后设计特异性引物,将衣壳蛋白L1基因亚克隆至pET-30a（+）表达载体中,构建重组原核表达载体pET30a-BPV2-L1,在E.coli RosettaTM（DE3） pLysS宿主菌中表达重组蛋白rBPV2-L1,并以纯化的rBPV2-L1蛋白为免疫原制备兔抗BPV2-L1蛋白多克隆抗体,随后间接ELISA检测其效价,并进行间接免疫荧光试验分析。病理组织切片观察结果显示,病变部分表皮细胞增生、角质过度并出现细胞挖空等BPV感染的组织病变情况;序列分析确定BPV分离株的基因型为2型,L1基因编码区长1 494 bp,可编码一个含有497个氨基酸的衣壳蛋白,蛋白分子质量为55.5 ku;与各型BPV的L1氨基酸序列系统进化树分析结果显示,其与BPV2-SW01（GenBank登录号:KC878306.1）、BPV2（GenBank登录号:KX113620.1）处于同一遗传进化分支,且属于Delta属成员;诱导表达的rBPV2-L1蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;间接ELISA法检测多克隆抗体效价高达1∶163 840,间接免疫荧光分析表明,兔抗BPV2-L1多克隆抗体能与瞬时表达的BPV2-L1蛋白发生特异性反应。以上结果证实,本研究成功克隆、表达了BPV2 L1基因,且重组蛋白rBPV2-L1具有较好的免疫原性,所制备的BPV2-L1蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性,为进一步研究BPV2亚单位疫苗奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 样品、菌株及试验动物
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 病理组织学检查
•   1.3 目的基因扩增
•     1.3.1 引物设计与合成
•     1.3.2 病毒DNA提取
•     1.3.3 PCR扩增
•   1.4 序列分析
•   1.5 衣壳蛋白L1表达载体构建
•   1.6 重组蛋白的表达与纯化
•   1.7 兔抗BPV2-L1多克隆抗体的制备与鉴定
•   1.8 多克隆抗体与目标蛋白L1的间接免疫荧光分析
• 2 结 果
•   2.1 病理组织学检查
•   2.2 BPV目的基因扩增及进化分析
•   2.3 重组表达载体的构建
•   2.4 rBPV2-L1蛋白的表达及纯化
•   2.5 兔抗BPV2-L1多克隆抗体的鉴定
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杜继文,刘悦,宋志峰,鲁兆祥,徐玮程,李明珠,高明春,王君伟

关键词: 牛乳头瘤病毒,基因,原核表达,多克隆抗体

来源: 中国畜牧兽医 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 东北农业大学动物医学学院

基金: 现代农业产业技术体系专项资金(CARS-36)

分类号: S852.653

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.06.029

页码: 1808-1815

总页数: 8

文件大小: 2890K

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