牛细小病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立检测牛细小病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,本研究通过提取牛细小病毒（ATCC VR-767）核酸,扩增NS1基因片段（大小约为171 bp）,将NS1基因片段克隆到pMD19-T载体中,并将重组质粒p MD19-T-NS1/DH5α作为标准样品,用于建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。研究结果显示,扩增基因片段长约171 bp,符合目的基因大小,经鉴定所构建的重组质粒正确。用该质粒测得SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的最低检测量为53.3 copies/uL。用该方法检测牛细小病毒、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒和猪细小病毒,结果显示,只有牛细小病毒可以被检测到,而其他病毒均未被检出,表明该方法具有良好的特异性。重复性试验结果表明,批内和批间重复变异系数均小于1%,表明该方法具有良好的重复性。结果表明,本研究建立的基于NS1基因的牛细小病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性,可用于牛细小病毒感染的检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒株及细胞株
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 引物设计
•   1.4 标准品的制备
•   1.5 荧光定量PCR反应条件
•   1.6 建立标准曲线
•   1.7 敏感性试验
•   1.8 特异性试验
•   1.9 重复性试验
• 2 结果
•   2.1 NS1基因的扩增
•   2.2 标准曲线的建立
•   2.3 敏感性试验
•   2.4 特异性试验
•   2.5 重复性试验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李振雪,赵飞鹏,于晓丽,姜艳平,崔文,李一经,唐丽杰,徐义刚,王丽,乔薪瑗

关键词: 牛细小病毒,基因,实时荧光定量

来源: 中国兽医科学 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 东北农业大学动物医学学院,黑龙江省重点实验室动物疾病防控技术与制剂创制实验室

基金: “十三五”国家重点研发计划项目（2016YFD0500904）

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0147

页码: 1136-1142

总页数: 7

文件大小: 1790K

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