异叶天南星苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与蛋白结构分析

论文摘要

以异叶天南星（Arisaema heterophyllum Blume）为材料,采用逆转录PCR（RT-PCR）法扩增其苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase,PAL）基因Ah PAL,获得该基因的开放读码框（ORF）,并通过系统的生物信息学软件分析Ah PAL的结构和理化性质。结果显示,Ah PAL的ORF全长为2184 bp,编码727个氨基酸;Ah PAL与郁金香（Tulipa fosteriana W. Irving） PAL的亲缘关系最近,序列相似性达88%。空间结构模型分析结果显示,Ah PAL为同型四聚体,每个单体由3个结构域组成,其中MIO结构域含有PAL酶家族的保守序列和Ala-Ser-Gly三肽活性中心,是Ah PAL酶活性的决定性结构域。利用荧光定量PCR方法检测3个Ah PAL Unigene在根、块茎和叶中的表达情况,发现它们在根中表达量均最高,而在叶和块茎中表达较低。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 高通量测序
•   1.3 引物设计
•   1.4 DNA合成和PCR扩增
•   1.5 重组质粒p MD19-T-AhPAL的构建和测序
•   1.6 生物信息学分析
•   1.7 实时荧光定量PCR
• 2 结果与分析
•   2.1 Ah PAL基因克隆和鉴定分析
•     2.1.1 总RNA提取、Ah PAL克隆和重组质粒鉴定
•     2.1.2 Ah PAL测序结果分析
•   2.2 Ah PAL生物信息学分析
•     2.2.1 Ah PAL蛋白的理化特性分析和结构域预测
•     2.2.2 Ah PAL蛋白二级结构、三级结构分析
•   2.3 Ah PAL的同源性及系统进化关系分析
•   2.4 Ah PAL基因在不同组织中的表达分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 施圆圆,张声祥,赵德蕊,王晨凯,马克龙,吴家文

关键词: 异叶天南星,苯丙氨酸解氨酶,基因克隆,生物信息学分析

来源: 植物科学学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农作物

单位: 安徽中医药大学研究生院,安徽中医药大学科研实验中心新安医学教育部重点实验室,安徽中医药大学中西医结合临床学院,安徽省中医药科学院,安徽道地中药材品质提升协同创新中心

基金: 名贵中药资源可持续利用能力建设项目(2060302),安徽高校自然科学研究重大项目(KJ2018ZD028),安徽省自然科学基金项目(1608085MH177),安徽省留学人员科技活动启动项目(20151x024),国家级大学生创新创业训练项目(201810369050),国家自然科学基金(81373598)~~

分类号: Q943.2;S567.239

页码: 221-229

总页数: 9

文件大小: 563K

下载量: 213