（哈尔滨市第二医院检验科黑龙江哈尔滨150056）
【摘要】目的：探讨血浆α2-抗纤溶酶的测定方法及临床意义。方法：选取35例受检患者血浆α2-抗纤溶酶的测定方法及诊断价值。结果：肝癌、肝硬化、白血病、DIC病人的α2-AP活性较正常组显著减低;心肌梗塞、血栓性静脉炎的α2-AP活性显著增高。结论：α2-抗纤溶酶测定对各类出血性疾病的病因和病程、预后的判断都有一定的价值。
【关键词】血浆α2-抗纤溶酶；测定方法；临床意义
【中图分类号】R446.63【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）10-0053-01
α2-抗纤溶酶又称α2纤溶酶抑制物。α2-AP是多种纤溶酶抑制物中最重要的一种。由于电泳处于α2-球蛋白位置而得名。生理状态下，循环中α2-AP有两种形式，即功能活性型（可与PL结合）和失活型（非纤溶酶结合型），前者约占70％，其主要功能是通过抑制张阔性而对生理性纤溶起调节作用。
1.检测对象
1.1对像
受检患者35例，其中男13例，女22例，年龄16～72岁，平均45±3.5岁；肝硬化失代偿8例，肝癌8例，心肌梗塞患者4例，系统性红斑狼疮（SLE）1例，急性淋巴细胞性白血病(ALL)５例，急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)３例，慢性髓细胞白血病(CML)５例，弥散性血管内凝血（DIC）1例。
1.2方法
1.2.1标本：血浆α2-AP检测包括α2-AP活性及含量测定。血浆标本的制备：以109mmol/L枸橼酸钠为抗凝剂，于硅化玻璃或塑料试管内按抗凝剂与血液1：9的比例采集空腹静脉血，立即充分混匀。1000g离心10min，获得乏血小板血浆。此血浆20～25℃可保存4h，-20℃可保存1个月。
1.2.2α2-AP活性测定（发色底物法）：不同厂家提供的试剂盒具体操作略有不同，应严格按其说明书操作。分析步骤如下：在稀释的标准血浆或待测样本中加入过量的纤溶酶，37℃孵育，使血浆中α2-AP与纤溶酶充分结合形成复合物（PAP）[1]。加入发色底物，上步反应后剩余的纤溶酶水解发色底物释放出PAP而显色，共颜色深浅与α2-AP活性水平呈负相关。比色：405nm波长测定吸光度。根据不同浓度标准血浆α2-AP的含量和所测得的各吸光度绘制标准曲线。待测样本的吸光度值通过方程计算或查标准曲线即可得出其α2-AP的水平。
1.2.3α2-AP抗测定（ELISA法）：应严格按照说明书操作。将已标准品（稀释不同浓度）和待测标本加入抗α2-AP抗体包被的酶联反应板微孔中，37℃孵育，使其中的α2-AP与其抗体充分结合。洗涤数次。加入酶标记的相同抗体，37℃孵育，使之形成抗体-α2-AP-酶标抗体复合物。洗去未结合的酶标抗体。加入酶的底物，酶水解底物而显色。加入终止液终止反应。比色以450nm波长测定吸光度[2]。标准曲线以不同浓度标准品的α2-AP含量和各测得的吸光度绘制标准曲线。待测标本的吸光度值通过方程或查标准曲线即可得出其α2-AP抗含量。
2.结果
正常人（96.2±15.3），肝硬化失代偿（89.9±30.2），肝癌（62.8±22.1），ALL(74.5±18.2)，ANLL(78.9±26.9)，CML(78.2±18.3)，血栓性静脉炎(99.8±16.0)，DIC(31.9±6.8)。肝癌、肝硬化、白血病、DIC病人的α2-AP活性较正常组显著减低;心肌梗塞、血栓性静脉炎的α2-AP活性显著增高。
3.讨论
α2-AP由肝脏合成，系由452个氨基酸组成的单链糖蛋白，分子量70kD。α2-AP属丝氨酸蛋白酶抑制剂，是纤溶酶的主要抑制剂，循环中浓度约1μmol/L，比血浆中PAI-1浓度高约2500倍。少量α-AP来自血小板。其抗PL的作用是通过以下途径实现的①在激活的XIII因子（XIIIa）作用下与纤维蛋白发生交联，从而抑制LG、PL、t-PA等与纤维蛋白的结合，②迅速与已形成的PL以1：1比例形成不可逆的复合物，在灭活PL的同时自身裂解。α2-AP还能抑制激肽释放酶原（PK）以及凝血因子Xa、Ⅺa、Ⅻa等。因此，对纤溶系统的调节起重要作用。
α2-AP的检测分活性及抗原含量检测，某些病理情况下，含量及活性的增减呈不平行状态。目前检测α2-AP活性主要应用发色底物法，本法可手工操作或仪器分析，多数全／半自动凝血仪设有的比色通道，在405nm波长通过发色底物法检测血浆抗凝及纤溶成分（如PLG、α2-AP、AT-Ⅲ等）。而抗原测定则应用免疫学方法中较为灵敏、准确的ELISA法。
ELISA法检测α2-AP抗是利用兔抗人α2-AP抗体直接检测样本中α2-AP（抗原）的含量，特异性强、灵敏、稳定、方法简便，其工作范围为0.625～10ng/ml，检出限为1ng/ml，批内及批间变异系数分别为10％和2％[3]。发色底物法检测α2-AP活性是特异、灵敏、简便的方法，操作步骤少，特别是自动化凝血仪检测无需人工稀释样本、加试剂、比色，大大减少了分析前、分析中和分析后等各种人为造成的误差。仪器自动定标，标准曲线可长时间保存，样本用量少，是较为理想的检测方法。
α2-AP是纤溶酶PL的主要抑制物，循环中一旦有PL生成，二者导致以1：1比例形成不可逆的复合物（PAP或PIC）。因此PAP的出现直接反应了纤溶酶已经生成及纤溶活性增强，特别是继发性纤溶亢进时。由于PL的浆半寿期极短，测定比较困难，因此对于纤溶系统活性增强的判断既往主要是通过PLG和α2-AP的消耗性减少来进行推断，而AP检测则较PLG和α2-AP测定更为直接。PAP检测可采用PIA法和ELISA法，后者方法简便、灵敏，一般实验室均可开展，并有商品试剂盒供应。其原理为用抗α2-AP抗体包被酶联反应板，加入待测血浆和标准品，则其中的PAP（包括α2-AP）与固相抗α2-AP抗体结合，后加入酶标记的抗PLG抗体（酶标二抗）只特异地与PAP结合，最后加入底物显色，颜色的深浅与PAP含量呈正相关。
【参考文献】
[1]李建新，王红，杭勤，等.纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物检测方法的建立和初步临床应用[J].中华检验医学杂志，2004，27(6)：381-384.
[2]张玲，侯丽虹，刘秀娥，等.α_2-抗纤溶酶与静脉血栓栓塞症的研究[J].中国药物与临床，2011，11(4)：368-370.
[3]侯丽虹，刘秀娥，董春霞，等.抗凝和纤溶指标在静脉血栓栓塞症的诊断价值探讨[J].临床医药实践，2010，19(19)：723-727.