陈炎（安徽医科大学第一附属医院妇产科安徽合肥230022）
【中图分类号】R730.5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）20-0017-02
【摘要】目的探讨上皮性卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性检测的临床意义。方法采用流式细胞仪测定上皮性卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性，以良性卵巢上皮性肿瘤及正常人作对照分析。结果上皮性卵巢癌患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+比值较良性肿瘤组、正常对照组均明显下降(P<0.05)，而CD8+细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与上皮性卵巢癌临床病理分期有关，分期越晚，CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+细胞比值越低，CD8+细胞水平越高；Ⅰ、Ⅱ期上皮性癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异(P<0.05)。结论检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于上皮性卵巢癌患者的检测及免疫状态监测。
【关键词】卵巢癌T淋巴细胞亚群NK细胞
DetectionofTLymphocyteSubsetandNKCellinPeripheralBloodofPatientswithEpitheliaOvarianCarcinoma
【Abstract】ObjectiveTostudyontheexpressionandclinicalsignificanceofTlymphocytesubsetandNKcellactivityinthepatientswithepithelialovariancarcinoma.MethodsFlowcytometrywasusedtodetectthemarksofTlymphocytesubsetsandNKcellsinbloodsamplesfrompatientswithepithelialovariancarcinoma.Dataobtainedfromthebenignepithelialovariantumorandthehealthpeoplewereusedascontrol.ResultsLowersCD3+,CD4+Tcells,NKcellsandCD4+/CD8+ratioweredetectedinbloodsamplesfromcarcinomagroupthanthatfromthebenigntumorandthehealthcontrol(P<0.05).CD8+Tlymphocytewerereverse.Thischangewasrelatedtothepathologicalstage.Theimmunefunctionoflymphocytesinperipheralbloodofthepatientswithepithelialovariancarcinomawaslow,andevenworseinthelowergradeofpathologicalstage.ConclusionItisvaluableforestimatingthefunctionofcellimmunebydetectingTlymphocytesubsetandNKcell.
【Keywords】OvarianCarcinomaTlymphocytesubsetsNKcells
卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，而死亡率居首位。卵巢癌早期不易发现，大部分恶性肿瘤患者就诊时已错过了治疗的最佳时间。因此，如何及时发现恶性肿瘤，争取早期治疗是提高疗效，延长生存期的关键因素之一[1]。而上皮性卵巢癌占卵巢恶性肿瘤的90％。本实验旨在通过检测上皮性卵巢癌患者外周血中T细胞亚群及NK细胞的改变，对其临床意义进行探讨。
1材料与方法
1.1研究对象2005年9月至2007年2月住院手术治疗的原发的上皮性卵巢癌肿瘤患者为检测对象，均经病理证实。其中恶性肿瘤34例，年龄20～80岁，根据平均（48.03±11.43）岁。FIGO分期，其中Ⅰ期7例；Ⅱ期9例；Ⅲ期12例；Ⅳ期6例。良性肿瘤组30例：年龄18～75岁，平均年龄（45.23±11.32）岁，正常对照组30例，为本院健康体检者，年龄20～58岁，平均年龄（44.38±13.58）岁，所有受检对象均无免疫系统疾病或使用过免疫抑制剂。
1.2试剂和仪器单克隆抗体抗CD3FITC、抗CD4PE、抗CD8PE及CD16+56PE，均由BectonDickinson公司生产，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56+分别代表总T、TH、TS、NK细胞。红细胞裂解液由BD公司生产。FACSCan流式细胞仪为BectonDickinson公司产品。
1.3检测方法取肝素抗凝的新鲜外周血100μl，加入上述单抗20μl，混匀，室温避光20min染色；加入1.5ml红细胞裂解液，混匀后室温避光放置10min，破坏红细胞；1500r/min离心5min，弃上清；每管加入2ml0.1%叠氮钠的磷酸盐缓冲液混匀，1000r/min离心5min，弃上清；加PBS1ml，混匀，2h内上机检测。采用FACSCan型流式细胞仪CellQuest软件获取与分析数据。以FSCH/SSCH设定淋巴细胞门，IgG/FITC/IgG2aPE确定FL1和FL2的非特异性结合水平，同时调节FSC、SSC电压，FSC阈值，FL1-FL2%、FL2-FL1%荧光补偿。每管获取1万个细胞。
1.4统计学处理数据以x-±s表示，用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。
2结果
与良性肿瘤组及正常对照组相比较，卵巢癌患者CD3＋细胞、CD4＋细胞、CD4＋/CD8＋比值及NK细胞数量均显著降低(P<0.05)，而CD8＋细胞则显著升高（P<0.05），尤其是Ⅳ期患者差异更加显著（P<0.01）、Ⅰ期～Ⅳ期卵巢癌患者，CD3＋细胞、CD4＋细胞、CD4＋/CD8＋细胞比值以及NK细胞数量逐渐下降，CD8＋细胞水平逐渐升高，其中Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌患者之间以及Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者之间比较无显著差异（P>0.05），但Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌CD3＋细胞、CD4＋细胞、CD4＋/CD8＋细胞比值及NK细胞数较Ⅰ、Ⅱ期显著下降（P<0.05），而CD8＋细胞水平显著升高（P<0.05），见表1。
表1卵巢癌患者及对照组外周血T细胞亚群及NK细胞数量(％，x-±s)
3讨论
现代免疫学表明，机体免疫系统存在着极为复杂的调节机制，特别是在细胞免疫中，各种细胞亚群及其产物相互作用，相互调节，维持正常的免疫应答能力。癌细胞在体内的生长、扩散，直接受到宿主免疫力的制约[1]。近年研究显示，T细胞亚群，NK细胞在抗肿瘤免疫中起着非常重要的作用。CD4细胞可辅助诱导其他免疫细胞如杀伤性T细胞、B细胞、NK细胞及巨噬细胞，共同发挥抗肿瘤作用[2]。CD8则抑制上述细胞功能，此外尚有细胞毒作用。正常情况下，CD4与CD8所代表的两大类最主要的T细胞亚群处于一种动态平衡状态[3]，共同承担起维持机体正常免疫功能的作用。
本实验结果显示，卵巢癌组CD4、CD4/CD8比值明显低于良性及对照组，临床Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅰ～Ⅱ期与对照组及良性组亦有明显差异。以上结果与文献报道结果一致[4]。这可能是由于肿瘤细胞分泌的多种免疫抑制因子所造成的。由于这种免疫抑制是肿瘤源性的，因此表现为患者的免疫状态与病情呈显著的负相关。
研究表明[5]，NK细胞是在抗肿瘤早期发挥作用的效应细胞，无需预先接触抗原，无mru限制性，不依赖抗体或补体即可直接杀伤mruⅠ类分子表达低下或缺如的肿瘤细胞，是抗肿瘤的第一道防线。有研究表明，卵巢癌患者外周血NK细胞水平较正常人群低下[6,7]。本实验结果亦然，卵巢癌患者外周血中NK细胞水平较良性肿瘤组及正常对照组明显降低，且Ⅲ～Ⅳ期患者较Ⅰ～Ⅱ期患者亦有明显差异，说明NK细胞活性与病情进展亦有密切关系。
通过本实验提示：（1）CD4/CD8比值在卵巢癌较早期即明显降低，是检测恶性肿瘤较灵敏指标。（2）联合检测CD4/CD8比值及NK细胞活性，对于诊断、判断病情进展有重要意义。（3）卵巢恶性肿瘤患者的细胞免疫功能低下，随病情进展免疫功能进一步削弱。
参考文献
[1]郎江明主编.临床免疫诊断学.广州：广东科技出版社，2003：365－368.
[2]田赓，张炜阳等.CD4+CD25+调节性T细胞在上皮性卵巢癌患者外周血中的表达及临床意义.中国妇幼保健，2007，22(11):1499-1501.
[3]HernbergmM，MuhonenT，PyrbonenS.CantheCD4+/CD8+ratiopredrettheoutcomeofinterferon-alphatherapyforrealcellcarcinoma.AnnOnwl，1997，8（1）：71－77.
[4]刘艳，朱美琪.可溶性IL-2R、IL-6及T细胞亚群测定在卵巢良性肿瘤诊断中的作用.实用肿瘤杂志，2001，16（1）42—44.
[5]ZwirnerNW,FuertesMB,GirartMV,DomaicaCI,etal.Cytokine-drivenregulationofNKcellfunctionsintumorimmunity:roleoftheMICA-NKG2Dsystem.CytokineGrowthFactorRev.2007Feb-Apr，18(1-2):159-70.
[6]朱丽荣，郭燕燕，曹泽毅.卵巢癌患者外周血中NK细胞和IL－2活性变化及其临床意义.癌症，1999，18（Z1）.
[7]CarlstenM;BjorkstromNK;NorellH.DNAXaccessorymolecule-1mediatedrecognitionoffreshlyisolatedovariancarcinomabyrestingnaturalkillercells.CancerRes，2007,Feb1，67(3):1317-25.