人巨细胞病毒US31蛋白特异性抗体的制备及鉴定

论文摘要

目的:探讨人巨细胞病毒（HCMV）US31蛋白及其多克隆抗体的制备及鉴定方法。方法:HCMV US31基因经原核密码子优化后进行全基因合成,克隆至pET21a（+）原核表达载体,构建pET21a（+）/HCMV US31重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导目的蛋白表达,Ni-NTA亲和层析法纯化US31蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA、Western blot及免疫荧光方法检测抗体效价和特异性。结果:在大肠杆菌中诱导出高表达的HCMV US31融合蛋白,经Ni-NTA亲和纯化后获得高纯度的目的蛋白;免疫新西兰兔诱导产生特异性的IgG抗体,效价为1:49 600;经ELISA、Western blot以及免疫荧光均证实制备的特异性抗体可识别细胞中表达的US31蛋白。结论:成功制备了HCMV US31蛋白及特异性抗体,为进一步研究US31蛋白的生物学功能奠定了基础。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1试剂和酶类:
•     1.1.2质粒和菌株:
•     1.1.3实验动物:
•   1.2 方法
•     1.2.1 HCMV US31
•     1.2.2 HCMV US31
•     1.2.3 HCMV US31
•     1.2.4 HCMV US31
•     1.2.5 HCMV US31
•     1.2.6 Western blot
• 2 结果
•   2.1 pET21a （+） /HCMV-US31重组质粒构建
•   2.2 HCMV US31蛋白原核表达和鉴定
•   2.3 HCMV US31特异性抗体的效价分析
•   2.4 HCMV US31多克隆抗体的鉴定
• 3讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈碧,谢尚丹,项超丽,施昕妤,郭刚强,欧阳敬中,沈贤

关键词: 人巨细胞病毒,蛋白,多克隆抗体

来源: 温州医科大学学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 温州医科大学第二临床医学院,温州市人民医院肿瘤外科,温州医科大学基础医学院

基金: 国家自然科学基金资助项目(31670922,81672707),温州市科技计划项目(Y20180480)

分类号: R392

页码: 547-551

总页数: 5

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