一种检测慢病毒滴度的实时荧光定量PCR方法

论文摘要

目的:建立一种有效、灵敏、准确的慢病毒滴度的分子检测方法。方法:分别构建慢病毒调控元件WPRE和单拷贝基因白蛋白（Alb）基因的重组质粒,紫外吸收法测量后经数学换算得到相应的拷贝数,以梯度稀释质粒为模板,利用基于SYBR Green的荧光定量PCR制作标准曲线,最后将待测样品的Ct值代入标准曲线,根据相应公式计算慢病毒滴度。结果:WPRE元件和Alb基因质粒的标准曲线回归方程分别为y=-4.255x+46.047、y=-2.8735x+35.831,相关系数R2均大于0.99,扩增效率E均大于95%,且熔解曲线波峰单一。计算获得不同稀释比例待测病毒的滴度为（4.3±0.9）×106TU/mL。结论:基于SYBR Green的实时荧光定量PCR方法操作简便,能够准确测定慢病毒滴度。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 分子生物学常规操作
•   1.3 WPRE元件和Alb基因的质粒构建
•   1.4 计算标准品质粒的拷贝数
•   1.5 慢病毒的包装
•     1.5.1 质粒转染和慢病毒收集
•     1.5.2 慢病毒浓缩和纯化
•   1.6 慢病毒感染293T细胞
•   1.7 实时荧光定量PCR
•   1.8 慢病毒滴度计算方法
• 2 结果
•   2.1 标准品质粒的构建
•   2.2 标准曲线的建立
•   2.3 实时荧光定量PCR检测慢病毒整合拷贝数并计算慢病毒滴度
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张飞飞,孙文,耿琦,丁怡彤

关键词: 慢病毒滴度,实时荧光定量,白蛋白基因

来源: 生物技术通讯 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 徐州医科大学麻醉学院江苏省麻醉学重点实验室

基金: 江苏省高等学校自然科学研究(17KJD180006),徐州医科大学校级课题(2017KJ08)

分类号: Q78

页码: 523-527+588

总页数: 6

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