犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

论文摘要

宠物浅表皮肤真菌病主要由犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌感染引起。本研究根据3种真菌基因内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)区域的序列差异设计4条引物,通过优化多重PCR反应条件,建立了一种可同时快速检测这3种真菌的多重PCR,同时对其特异性、灵敏性、重复性进行分析。结果显示,建立的多重PCR方法对犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌基因组DNA均可扩增出特异性预期片段,条带大小分别为286、596、188 bp;最低检测限(灵敏性)分别为12.6、8.8、13.6pg/μL;被检测的6份人工模拟样品扩增结果准确。应用该多重PCR方法检测27份人临床皮屑样品和43份宠物犬、猫毛发样品,结果显示阳性检出率分别为74.07%(20/27)和83.72%(36/43);采用常规真菌分离培养法从阳性样品中获得10株致病性真菌,分离率为17.86%(10/56);两种检测方法的种属鉴定结果表明多重PCR法优于常规方法。本研究建立的多重PCR检测方法简便、特异、灵敏,可同时对宠物浅表真菌病原作出快速诊断与鉴别。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌种
•   1.2主要试剂与培养基
•   1.3 引物设计
•   1.4 真菌基因组DNA的提取
•   1.5 多重PCR反应体系的建立
•   1.6 特异性检测
•   1.7 灵敏性检测
•   1.8 重复性检测
•   1.9 人工模拟样品的检测
•   1.1 0 临床样品的收集与检测
•     1.1 0. 1 临床样品的收集
•     1.1 0. 2 临床样品的检测
• 2 结果
•   2.1 多重PCR反应条件的确定
•   2.2 多重PCR反应的特异性检测
•   2.3 多重PCR反应的灵敏性检测
•   2.4 多重PCR反应的重复性检验
•   2.5 人工模拟样品的检测
•   2.6 临床样品的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 钱晶,欧阳伟,王晶宇,姚凌云,吴世妍,王晓丽,潘群兴,夏兴霞,诸玉梅,刘军,刘国芳,王永山

关键词: 真菌病,犬小孢子菌,石膏样小孢子菌,须毛癣菌,多重

来源: 中国动物传染病学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程重点实验室,南京大学医学院附属鼓楼医院,江苏农林职业技术学院畜牧兽医学院

基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0501005),国家公益性行业(农业)科研专项(201303042),江苏省农业科技自主创新资金(CX(15)1065)

分类号: S852.66

页码: 42-48

总页数: 7

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