肺炎克雷伯杆菌表达吡咯喹啉醌依赖性聚乙烯醇脱氢酶

论文摘要

聚乙烯醇脱氢酶（PVADH）是降解聚乙烯醇（PVA）的关键酶,大肠杆菌或毕赤酵母生产PVADH需额外添加辅酶吡咯喹啉醌（PQQ）才具活性。为了降低添加PQQ的成本,在PQQ天然生产菌肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae）中表达全酶PQQ-PVADH。首先通过外源基因密码子优化实现PVADH的高效表达,PVADH酶活达到45 U/mL;进而通过辅酶再生提高PQQ产量,双质粒重组菌Kp（pvadh+pqq）的PVADH酶活达到68 U/mL;最后经发酵优化,PVADH酶活达到81 U/mL,为PQQ-PVADH的生产提供了另一种选择方案。

论文目录

• 引 言
• 1 实验部分
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与载体
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 重组菌构建
•     1.2.2 摇瓶发酵及优化
•     1.2.3 PVADH粗酶液制备和优化
•     1.2.4 PVADH酶活性检测
• 2 结果与讨论
•   2.1 pvadh密码子的优化及其在K. pneumoniae中的异源表达
•   2.2 PVADH粗酶液制备及酶活测定结果
•   2.3 辅酶PQQ的再生
•   2.4 发酵优化提高酶活
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 弥志伟,孙忠义,赵鹏,田平芳

关键词: 聚乙烯醇脱氢酶,肺炎克雷伯杆菌,吡咯喹啉醌,辅酶再生

来源: 北京化工大学学报(自然科学版) 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 北京化工大学生命科学与技术学院

基金: 国家自然科学基金(21476011),国家高新技术研究开发计划(“863”计划)(2015AA021003),国家基础研究计划(“973”计划)(2012CB725200)

分类号: TQ925

DOI: 10.13543/j.bhxbzr.2019.05.007

页码: 46-52

总页数: 7

文件大小: 5601K

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