湖北省恩施州中心血站湖北恩施445000
【摘要】目的：分析对Rh阴性血液采用深低温保存对其质量的影响。方法：用ACD抗凝剂作抗凝处理，对除去添加剂全血离心或Rh阴性红细胞悬浊液或血浆浓缩红细胞置于4℃条件下保存，时间为6天，用浓度为40%的甘油对红细胞进行处理，置于零下80℃条件下保存，如果有临床需要则对红细胞用37℃水进行解冻处理，并分别用NaCl羟乙基淀粉溶液（9%）、NaCl羟乙基淀粉溶液（0.9%）、NaCl（0.9%）各洗涤1次。对于红细胞悬浮，通过生理盐水羟乙基淀粉溶液进行处理。结果：32袋去除甘油后的解冻红细胞回收率平均为（81.2±18.4）%，残留甘油量平均值为5.35g/L，游离血红蛋白平均值为（0.62±0.15）g/L，体外溶血试验结果显示血红蛋白增加率为25.20%。结论：对Rh阴性血液采用深低温保存在解冻之后，去除甘油质量，红细胞各指标均符合国家要求标准，在临床输用上也取得良好效果，具备显著临床价值。
【关键词】深低温；保存；Rh阴性血液；质量
Rh阴性血液又被称为熊猫血，其与ABO血型一样，与人类输血之间存在着密切联系[1]。当血液中有D血型物质时即为Rh阳性，予以Rh（+）表示，如果血液中D血型物质缺乏则Rh阴性，予以Rh（-）表示，由于种族差异Rh阴性血液分布也有所不同，白种人占比较高[2]。为及时向输血治疗提供所需血液，我血站特采用深低温的方式对Rh阴性血液进行保存，取得了良好的临床输用效果，报告如下。
1资料与方法
1.1设备与仪器
ABX全自动血细胞计数仪；J-6B离心机；零下80℃冰箱；723型分光光度计；无菌间百级净化台。
1.2操作方法
通过慢速冷冻法对冰冻红细胞进行制备，将冷冻保护剂加入于离心除去血浆悬浮红细胞或Rh阴性全血或加入添加剂后生成的浓缩红细胞中，在红细胞完全甘油化后将其置于零下80℃的冰箱中保存，如果涉及到临床用血，则可将红细胞取出，并置于37℃水中进行解冻处理，可通过以下方法进行：①分别用NaCl羟乙基淀粉溶液（9%）、NaCl羟乙基淀粉溶液（0.9%）、NaCl（0.9%）各洗涤1次。②将甘油化之后的红细胞放置在温度为37℃的水中解冻，同时将30mlNaCl溶液（12%）注入血袋中，注入时间控制在1分钟左右，将溶液与红细胞混合均匀，静置10分钟，再将500mlNaCl（0.9%）加入其中进行洗涤，洗涤次数为3次，最后用NaCl羟乙基淀粉溶液（0.9%）对红细胞进行悬浮处理。
1.3质量检测方法
对解冻的红细胞，将甘油质量去除后，其上清液游离血红蛋白含量用邻-甲苯胺法进行检测，并开展体外溶血试验。对血红蛋白含量、红细胞含量用细胞计数仪进行检测。对甘油残余量用碘酸纳法进行测定。
1.4统计学方法
本次研究中涉及到的数据处理采用SPSS19.0软件进行，涉及的计量资料均通过（±s）予以表示，t检验，计算值P＜0.05时表明数据差异在统计学层面中存在意义。
2结果
2.1光镜观察结果分析
本中心血站通过深低温保存下Rh阴性血液保存了19-367天，用光镜对洗涤后的红细胞进行观察，发现其表面形状为双向凹状，且细胞膜均处于完整状态，未出现团聚情况。在洗涤3次之后，残余甘油量平均值为（7.14±0.62）g/L，经洗涤4次之后，残余甘油量平均值为（3.62±0.52）g/L，质量标准值要求不超过10g/L，可见其与质量标准相符合。
2.2体外溶血实验结果分析
将深低温条件下保存的Rh阴性血液放置在室温下，30分钟后其上清液游离血红蛋白含量平均值为（0.62±0.15）g/L；再将其放置在37℃条件下，30分钟之后其上清液游离血红蛋白含量平均值为（0.82±0.20）g/L，体外溶血试验结果显示血红蛋白增加率为（25.20±2.32）%，质量标准值要求该指标不超过50%，可见其与质量标准相符合。
2.3红细胞上清液游离血红蛋白含量与回收率
洗涤前，两种方法的血红蛋白含量无显著差异，洗涤后方法1的血红蛋白含量明显少于方法2，利用第二种方法32袋去除甘油后的解冻红细胞回收率平均为（81.2±18.4）%。详见表1：
表1红细胞上清液游离血红蛋白含量与回收率
3讨论
Rh阴性血液在我国属于比较稀有的一种血型，而在白种人中该血型占比相对较高。近些年伴随国家间的往来增加，对此血型的需求也随之增加，稀有血型的供应在临床救治工作中显得尤为重要，所以成立了稀有血型专用冷冻库，通过深低温的方式对Rh阴性血液进行保存，在零下80℃条件下红细胞可保存超过3年，使Rh阴性血液无法长时间保存的问题得到有效解决，为临床紧急救治工作提供了支持[3-4]。
本站对临床中应用的Rh阴性血液解冻并将甘油成分去除之后进行质量检测，计算体外红细胞回收率、残余甘油质量、上清液游离血红蛋白含量等指标，经过体外溶血试验结果表明其血红蛋白含量明显增加，其增加率与国家要求质量标准相符合。在质量检测方面，发现采集后的血液在6小时之内进行深低温保存，可取得良好洗涤效果。另外，红细胞解冻之后需要在24小时之内完成输用[5]。
结语：
对Rh阴性血液采用深低温保存在解冻之后，去除甘油质量，红细胞各指标均符合国家要求标准，在临床输用上也取得良好效果，具备显著临床价值。
【参考文献】
[1]董宁.深低温保存RhD(-)血的开展及临床应用[J].心理医生,2015,01(13):232-232.
[2]徐景海,张杰,孔巍.RH阴性血的临床应用与管理[J].中国现代药物应用,2014,02(24):219-220.
[3]韩艳秋.Rh阴性血型患者输血相关问题探讨[J].国际输血及血液学杂志,2016,39(05):369-373.
[4]李翠,刘丽丽,张玉婷,等.RhD阴性血源管理探讨[J].医药前沿,2014,01(22):368-368.
[5]杨振宇,李正发,付凌梅.深低温冷冻保存血小板的研究进展[J].临床输血与检验,2016,02(01):82-85.