牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

论文摘要

以牛支原体p80基因为靶基因,设计特异性引物与探针,优化反应体系,建立了牛支原体TaqMan探针实时荧光定量PCR（TaqMan real-time PCR）检测方法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性评估以及临床样本检测。结果显示,特异性试验中,牛支原体2个菌株Cq值均小于18,其余13个非牛支原体菌株Cq值均大于36;敏感性试验中,最低可检3.89拷贝/μL靶DNA,是普通PCR的104倍（普通PCR 3.89×104拷贝/μL）;重复性试验中,组内、组间重复的变异系数均小于1%;44份牛的临床样品利用TaqMan real time PCR检出6份阳性（阳性率为13.64%）,分离培养鉴定检出7份阳性,普通PCR检测全部阴性。本研究建立了一种敏感、特异、稳定的牛支原体TaqMan real time PCR检测方法,可用于牛支原体的快速诊断和核酸定量检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株
•   1.2 主要仪器和试剂
•   1.3 DNA的提取
•   1.4 引物与探针
•   1.5 重组质粒的构建
•   1.6 标准曲线的建立
•   1.7 特异性检测
•   1.8 敏感性检测
•   1.9 重复性试验
•   1.10 临床样品检测
• 2 结果
•   2.1 特异性试验
•   2.2 敏感性试验
•   2.3 标准曲线的建立
•   2.4 重复性试验分析
•   2.5 临床样品的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 翟肖辉,王方国,郝华芳,颜新敏,陈胜利,Hussam Askar Mohamad,朱建勋,储岳峰

关键词: 牛支原体,基因,探针,实时荧光定量,特异性,敏感性

来源: 畜牧与兽医 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃煤田地质局一三三队

基金: 2016国家重点研发计划(2016YFD0500907),甘肃省重点研发计划(17YF1NA070)

分类号: S852.62

页码: 105-109

总页数: 5

文件大小: 1070K

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