抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

论文摘要

目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒p GEX-5X-1-CD4和pET30a（+）-CD4分别转化感受态E. coli BL21和BL21（DE3）,经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204 800、1∶204 800、1∶3 200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5. 5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒、菌株及细胞
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 实验动物
•   1.4树鼩CD4重组蛋白的表达及纯化
•   1.5 树鼩CD4杂交瘤细胞株的制备及筛选
•   1.6 树鼩CD4单克隆抗体腹水的制备及效价测定
•   1.7 树鼩CD4单克隆抗体纯化
•   1.8 树鼩CD4单克隆抗体的标记
•   1.9 树鼩CD4单克隆抗体的特异性鉴定
•     1.9.1 Western blot鉴定
•     1.9.2 FACS鉴定
•   1.1 0 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 树鼩CD4重组蛋白表达及纯化
•   2.2 抗树鼩CD4阳性杂交瘤细胞株的筛选
•   2.3树鼩CD4单克隆抗体腹水的效价
•   2.4 树鼩CD4单克隆抗体纯化
•   2.5 树鼩CD4单克隆抗体的特异性鉴定
•     2.5.1 Western blot鉴定
•     2.5.2 FACS鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴忠香,张雪梅,徐婧雯,宋杰,李慧,朱文兵,蒋曦,李卫宇,董少忠

关键词: 树鼩,单克隆抗体,生物学特性

来源: 中国生物制品学杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

基金: 中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目(2016-I2M-1-019)

分类号: R392

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002832

页码: 1097-1101+1107

总页数: 6

文件大小: 320K

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