丹东蒲公英TaMYC1基因克隆及表达分析

论文摘要

MYC转录因子参与植物次生代谢的生物合成,然而丹东蒲公英中MYC转录因子的研究尚未见报道。本试验从丹东蒲公英（Taraxacum aungue Kitag.）中克隆获得一个MYC转录因子,并对其进行研究,试验结果如下:1.从丹东蒲公英中克隆获得TaMYC1基因,其ORF长度是1566 bp,编码了521个氨基酸。TaMYC1基因翻译成的氨基酸序列中含有bHLH转录因子家族的碱性-螺旋-环螺旋（bHLH）和螺旋-环-螺旋（HLH）这2个典型的保守结构域;进一步构建系统发育树发现TaMYC1与非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）中GMYC1基因同源性最高;组织特异性分析结果显示TaMYC1基因相对表达量在叶中最高。2.构建pGEX4T-1-TaMYC1原核表达载体,并对诱导的蛋白提取和纯化,成功获得纯化后的GST-TaMYC1融合蛋白,其大小为85 kDa左右。3.qRT-PCR检测结果显示:用MeJA处理后,TaMYC1基因相对表达量在1 h提高到4.3倍,在3 h时达到4.7倍;6-24 h之间呈逐渐下降趋势;用NaCl处理后,1 h时TaMYC1基因相对表达量上升到19.3倍,在3 h达到42.7倍,之后呈下降趋势;用SA处理后,TaMYC1基因相对表达量在1 h提高到5.3倍,在3 h时达到6.7倍;该结果显示TaMYC1转录因子参与MeJA响应途径,同时也响应SA激素和盐胁迫信号。4.构建过表达载体pRI101-TaMYC1,利用农杆菌介导进行遗传转化研究,获得该转基因的愈伤组织,qRT-PCR检测结果显示,转基因愈伤组织中TaMYC1基因相对表达量提高到4.7倍。5.克隆获得TaMYC1的启动子部分片段,长度为679 bp;对其进行分析确定该启动子上具有MYB结合位点、G-box等顺式作用元件元件。构建了pGADT7-TaMYC1和pAbAi-pro TaMYC1载体,酵母单杂交确定TaMYC1与pAbAi-proTaMYC1结合。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
•   1.1 蒲公英活性成分研究
•   1.2 蒲公英药理作用研究
•   1.3 植物次生代谢产物研究
•   1.4 影响植物活性成分的因素
•     1.4.1 生物诱导子研究进展
•     1.4.2 非生物诱导子研究进展
•   1.5 bHLH转录因子研究
•   1.6 基因启动子研究
•   1.7 研究目的和意义及试验技术路线
• 2 材料与方法
•   2.1 试验材料及仪器
•     2.1.1 植物材料
•     2.1.2 菌株及载体
•     2.1.3 主要试剂
•     2.1.4 主要仪器
•     2.1.5 试验中需配制的溶液
•   2.2 试验方法
•     2.2.1 目的基因的扩增
•     2.2.2 TaMYC1 基因的生物信息学分析
•     2.2.3 不同处理下丹东蒲公英的TaMYC1 基因的表达分析
•     2.2.4 丹东蒲公英TaMYC1 过表达功能分析
•     2.2.5 丹东蒲公英TaMYC1 原核表达
•     2.2.6 丹东蒲公英TaMYC1 基因启动子克隆与分析
•     2.2.7 pro-TaMYC1与AD-TaMYC1 酵母单杂交分析
• 3.结果与分析
•   3.1 丹东蒲公英TaMYC1 基因克隆
•   3.2 丹东蒲公英TaMYC1 蛋白分子结构分析
•     3.2.1 TaMYC1 蛋白质一级结构分析
•     3.2.2 TaMYC1 蛋白质二级结构预测
•     3.2.3 TaMYC1 蛋白质三级结构预测
•     3.2.4 TaMYC1 蛋白质跨膜结构域预测
•   3.3 TaMYC1 基因同源性蛋白序列比对及系统进化树构建
•     3.3.1 不同物种MYC1 基因氨基酸序列分析
•     3.3.2 同源序列进化树构建
•   3.4 丹东蒲公英TaMYC1 组织特异性分析
•   3.5 丹东蒲公英在不同处理下的实时定量表达分析
•     3.5.1 在茉莉酸甲酯（MeJA）处理下TaMYC1 基因实时定量分析
•     3.5.2 在氯化钠胁迫下丹东蒲公英TaMYC1 实时定量分析
•     3.5.3 在水杨酸处理下下丹东蒲公英TaMYC1 实时定量分析
•   3.6 pRI101-TaMYC1 过表达载体构建
•   3.7 丹东蒲公英TaMYC1 遗传转化
•     3.7.1 农杆菌介导转化丹东蒲公英
•     3.7.2 转基因愈伤组织鉴定
•     3.7.3 转基因愈伤组织qRT-PCR分析
•     3.7.4 转基因愈伤组织花青素含量测定
•   3.8 原核表达载体构建
•   3.9 TaMYC1 蛋白诱导与纯化
•   3.10 启动子克隆与分析
•     3.10.1 启动子克隆
•     3.10.2 启动子分析
•     3.10.3 酵母单杂交结果
• 4 讨论
•   4.1 关于MYC转录因子与植物生物及非生物胁迫应答的关系
•   4.2 关于MYC转录因子结构与其功能的关系
•   4.3 MYC1 转录因子在植物中的作用
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 姚李祥

导师: 宁伟

关键词: 丹东蒲公英,转录因子,表达,启动子

来源: 沈阳农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,生物学,农作物

单位: 沈阳农业大学

分类号: Q943.2;S567.239

DOI: 10.27327/d.cnki.gshnu.2019.000261

总页数: 61

文件大小: 2811K

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