CXCR4基因慢病毒载体及其过表达骨髓间充质干细胞株的建立

论文摘要

目的构建表达大鼠CXCR4基因的慢病毒载体,建立CXCR4基因过表达骨髓间充质干细胞株。方法 PCR克隆CXCR4基因,将其连接到慢病毒表达载体PGMLV-6751上,转染293细胞,将构建的重组慢病毒载体与包装质粒混合物共转染293T细胞,收集病毒悬液,测定滴度,转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,以嘌呤霉素进行筛选,定量PCR和Western blot检测转染后细胞目的基因mRNA和蛋白的表达水平。结果成功构建了表达CXCR4基因的慢病毒载体,病毒滴度为2×108TU/mL,建立了CXCR4基因过表达的大鼠骨髓间充质干细胞株,经定量PCR和Western blot检测,过表达细胞株CXCR4基因的mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显升高（均P<0.05）。结论成功构建携带CXCR4基因的慢病毒载体及CXCR4基因过表达的骨髓间充质干细胞株。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 引物设计及合成
•   1.3 CXCR4 PCR扩增、酶切及载体质粒双酶切
•   1.4 重组慢病毒载体的构建、鉴定和纯化
•   1.5 重组慢病毒载体包装及滴度测定
•   1.6 CXCR4过表达细胞株的建立及鉴定
• 2 结果
•   2.1 重组慢病毒载体的构建和鉴定
•   2.2 重组慢病毒滴度测定
•   2.3 CXCR4过表达慢病毒载体转染骨髓间充质干细胞
•   2.4 Q-PCR检测重组慢病毒载体转染的BMSC中CXCR4 mRNA表达
•   2.5 Western blot检测重组慢病毒载体转染后BMSC的CXCR4蛋白质表达
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 修光辉,孙洁,尹云玉,周娟,陈献忠,凌斌

关键词: 慢病毒载体,骨髓间充质干细胞,大鼠

来源: 华中科技大学学报(医学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 昆明医科大学第四附属医院重症医学科

基金: 国家自然科学基金资助项目(No.81360289),云南省科技厅-昆明医科大学联合专项重点项目[No.2017FE468(-180)],面上项目(No.2012FB076),云南省高层次卫生计生技术人才培养项目(H-2017060),昆明医科大学研究生创新基金项目(No.2018S048)

分类号: Q78

页码: 177-182

总页数: 6

文件大小: 1884K

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