猪硒蛋白W的原核表达及IgY多克隆抗体制备

论文摘要

试验旨在优化硒蛋白W（selenoprotein W,SelW）的原核表达系统,并评估SelW的免疫原性和基于IgY抗体检测猪体内SelW的可行性。将获得的猪SelW基因序列密码子进行优化、合成并连接至pET-32a（+）表达载体中,构建原核表达重组质粒pET32a（+）-SelW,转化E.coli BL21（DE3）宿主菌中,进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定重组猪SelW的表达情况,并免疫产蛋鸡制备抗SelW的IgY多克隆抗体,通过间接ELISA检测IgY抗体滴度,采用Western blotting检测IgY识别抗原的特异性。SDS-PAGE结果显示,SelW基因在原核细胞中成功表达,得到了大小约为33 ku的重组蛋白,IPTG最佳诱导浓度及时间分别为0.5 mmol/L和6 h;可溶性分析结果显示,重组蛋白SelW主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测结果显示,免疫后45 d的IgY多克隆抗体的效价可达1∶51 200。Western blotting检测结果显示,重组蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IgY抗体与SelW的亲和力较高。本试验成功构建并优化了SelW蛋白的原核表达系统,提高了SelW蛋白的表达量,获得了具有良好免疫原性的SelW蛋白,制备的IgY抗体能特异性识别猪肌肉组织中的SelW,可用于检测猪组织中SelW的表达、预防硒中毒和缺硒性疾病的监测等,为进一步探究SelW的生物学功能奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 试验动物、细胞及载体
•     1.1.2 主要试剂及仪器
•   1.2 序列分析及合成
•   1.3 pET32a （+） -SelW重组载体的构建
•   1.4 SelW重组蛋白的诱导表达与鉴定
•   1.5 动物免疫及IgY抗体的分离与鉴定
•   1.6 间接ELISA检测IgY抗体滴度
•   1.7 IgY抗体特异性检测
• 2 结 果
•   2.1 重组质粒pET32a （+） -SelW的构建与鉴定
•   2.2 SelW蛋白的表达
•   2.3 IgY抗体效价及其特异性
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周继萍,曹瑞敏,米克热木·沙依布扎提,蒋志惠,张小莺

关键词: 硒蛋白,原核表达,多克隆抗体

来源: 中国畜牧兽医 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 新疆农业大学动物医学学院,安阳工学院现代生物技术研究所河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室,西北农林科技大学动物医学院

基金: 乌鲁木齐市科技计划项目(P16130001),陕西省国际科技合作项目(2017KW-ZD-10),河南省高校科技创新人才支持计划(18HASTIT035),河南省高等学校重点科研项目应用研究计划(19B180001),安阳工学院博士启动金(BSJ2017002)

分类号: Q78

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.06.028

页码: 1801-1807

总页数: 7

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