导读:本文包含了克隆扩增论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,人工免疫,脂肪,蛋白尿,分枝,磷脂,检测器。
克隆扩增论文文献综述
石敏,董琼,暨明[1]（2017）在《体外多克隆扩增培养Treg中敲低IRF4后的相关功能变化》一文中研究指出背景:调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)具有抑制针对非自身抗原的免疫应答的功能,可经体外扩增培养后用于临床移植免疫耐受诱导的细胞治疗,但rreg在体外诱导分化成熟过程中表型及其功能的变化的分子机制尚不清晰。目前已知干扰素调节因子4(interferon regulation factor,IRF4)作为干扰素调节因子的一种,通过影响淋巴细胞的分化及干扰素转录调控等参与(本文来源于《中国生理学会张锡钧基金第十四届全国青年优秀生理学学术论文综合摘要、中国生理学会第十二届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要》期刊2017-10-20）
徐玲,翁建宇,黄欣,陈少华,耿素霞[2]（2014）在《造血干细胞移植后伴微小残留病变T-ALL患者一例Vδ4及Vδ3克隆扩增模式报道与分析》一文中研究指出背景:TCR谱系多样性研究是监测异基因造血干细胞移植(HSCT)后血液肿瘤患免疫重建及特异性反应性T细胞克隆演变的重要方式。此前,本课题组对一例复发性T-ALL患者造血干细胞移植前及移植后TCRγ和TCRδ谱系的检测和动态分析发现了γδ+恶性肿瘤克隆的演变和反应性T细胞克隆的存在。该病例在经HSCT治疗后第100周时再次复发并伴随着Vδ5+T细胞(肿瘤克隆)的克隆增殖,经过2周的化疗后患者获得再次缓解。(本文来源于《第九届全国免疫学学术大会论文集》期刊2014-10-18）
姜宴[3]（2013）在《3T3-L1前脂肪细胞分化过程中有丝分裂克隆扩增调控机制的研究》一文中研究指出脂肪组织不仅参与机体能量贮存与代谢,而且还具有重要的内分泌功能。脂肪组织的过度增加是导致肥胖的重要原因。研究脂肪细胞分化的机制可为有效地控制肥胖和治疗相关并发症提供分子生物学理论基础。脂肪组织的增长包括脂肪细胞体积的增大和脂肪细胞数量的增多。3T3-L1细胞系常被用于体外前脂肪细胞分化成为脂肪细胞机制的研究。以往研究表明,体外培养3T3-L1前脂肪细胞至接触抑制后,给予混合诱导剂刺激,前脂肪细胞可重新进入细胞周期进行有丝分裂克隆扩增(mitotic clonal expansion, MCE),经过约两轮(每轮约28小时)细胞分裂增殖后进入终末分化阶段,表达脂肪细胞标志基因(C/EBPα PPARγ等)并形成成熟的脂肪细胞。然而,前脂肪细胞被诱导后再次进入细胞周期进行克隆扩增的具体调节机制仍不完全清楚。本课题关注于3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中最初28小时内变化调节机制的研究,主要包括以下叁个方面：一、3T3-L1前脂肪细胞分化早期蛋白质差异表达的动态变化iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation,同位素标记相对和绝对定量)技术是近年研发出的一种差异蛋白质组学技术,可用于同时比较4-8组样品所含蛋白质的种类和含量,尤其适用于低丰度蛋白质差异表达的动态变化研究。本课题利用iTRAQ-2DLC-MS/MS技术作为主要检测技术手段,对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化最初28小时内蛋白质水平发生的变化进行了全面的分析研究。在考察比较不同蛋白质纯化方法的回收率、重复性以及纯化效率的基础上,我们选用丙酮沉淀法对标记前的样本进行纯化,采用iTRAQ 8标技术对0、4、8、12、16、20、24和28小时八个检测点的蛋白质提取物分别进行标记,用AB SCIEX Triple TOFTM 5600质谱仪作为主要仪器分析检测,并用QSTAR XL质谱仪进行比对分析,确证定量结果的可信度,共定量得到了3152个非冗余蛋白。二、脂肪细胞分化MCE中转录调控网络与关键调控因子利用生物信息学技术对全部定量蛋白进行全局箱型图分析和全局主成分分析,结果表明0、12、16、20、24和28小时六个检测点主成分的分布相对集中,适合进行比较分析。结合FACS监测细胞所处细胞周期阶段的实验结果,即3T3-L1前脂肪细胞在诱导后约16小时开始实现G1/S期跨越进入S期并在诱导后20小时达到高峰,我们以20小时为差异蛋白表达最高或最低点,设计了先上升然后持平、先下降然后持平、先上升然后下降和先下降然后上升四种筛选差异蛋白的模式。经筛选,共有595个差异蛋白符合设定的模式。对符合模式蛋白和全部蛋白进行分子量(MW)和等电点(pI)的分析比较,结果表明符合模式的595个差异蛋白没有偏性,和全局3152个非冗余蛋白的理化性质相近,适合进行更深入的生物信息学分析及生物学功能验证。C/EBPβ是脂肪细胞分化过程中重要的转录因子,可转录激活C/EBPα、 PPARy这两种脂肪细胞终末分化的关键因子,且其表达和活化对前脂肪细胞MCE是必需的。之前本课题组已通过ChIP-on-chip技术寻找C/EBPβ在脂肪细胞分化早期所作用的靶基因,并采用基因表达谱芯片技术进行确证,获得了68个潜在的C/EBPβ调控3T3-L1前脂肪细胞MCE的靶基因。通过将本课题iTRAQ-2DLC-MS/MS分析结果与上述基因芯片检测数据相比较,我们从蛋白质水平与mRNA水平高通量检测结果进行相互验证并进一步筛选。最终,叁种高通量检测数据交汇得到17个蛋白,其中PKM2和RRP1B两个蛋白符合设定模式。使用IPA数据库对符合模式蛋白进行GO功能富集分析发现,模式蛋白比较显着的富集功能主要涉及胚胎发育、多种疾病(肝病、心血管病、恶性肿瘤等)、骨骼肌肉系统发育、心血管系统发育等,提示这些富集功能中的模式蛋白与生殖发育及一些异常的生理过程包括细胞死亡、异常增殖等有关。通路富集分析结果表明,模式蛋白在PI3K/AKT/mTOR及相关信号通路显着富集。根据GO功能富集分析、通路富集分析和C/EBPβ作用靶基因的蛋白质水平筛选结果,我们挑选出C/EBPβ、CDKN1B、PKM2、RRP1B、RUNX2和MCM3六个蛋白形成目标蛋白群,调用595个模式蛋白在IPA数据库中的分子关系构建转录调控网络。转录调控网络分析结果表明,目标蛋白群各蛋白之间及与PI3K/AKT/mTOR信号通路所涉及蛋白存在密切的连接关系。围绕目标蛋白群优化设计的亚网络图进一步提示,在3T3-L1前脂肪细胞终末分化过程中C/EBPβ、 PIN1和PKM2可能存在调控关系,且与PI3K-AKT信号通路相关,有待于进一步研究验证。叁、PKM2在3T3-L1前脂肪细胞分化MCE中的作用PKM2 (Pyruvate kinase M2)是一种糖酵解丙酮酸激酶同功酶。过去的研究证实PKM2在癌细胞中表达增加,是着名的Warburg效应中发挥关键作用的因素。在本课题中,PKM2被Triple TOFTM 5600和QSTAR XL两种质谱仪均检测出明显变化,在3T3-L1前脂肪细胞终末分化过程中符合持续升高的模式且变化显着,20小时含量是0小时的3.4倍。用Western Blott进行验证,结果一致。进一步进行RT-qPCR实验,结果表明在3T3-L1前脂肪细胞终末分化过程中PKM2的mRNA水平也明显上调。为了明确PKM2对3T3-L1前脂肪细胞完成MCE及终末分化的作用,我们采用RNA干扰技术抑制PKM2的表达,发现PKM2下调组的3T3-L1前脂肪细胞各时间点细胞数量和诱导20小时后进入S期的细胞比例明显低于对照组,且成脂能力明显下降。这一结果说明PKM2对于3T3-L1前脂肪细胞顺利完成MCE并进入脂肪细胞终末分化非常重要。ChIP-on-chip和基因表达谱芯片技术检测结果表明,PKM2是潜在的C/EBPβ作用的靶基因。为了进一步明确C/EBPβ对PKM2的表达是否具有调控作用,我们使用针对C/EBPβ的特异性siRNA (siC/EBPβ)来抑制C/EBPβ的表达,用RT-qPCR实验确定其干扰效果和对PKM2的mRNA表达水平的影响,并用Western Blot检测PKM2蛋白表达水平的变化。结果表明,当C/EBPβ表达下调时,3T3-L1前脂肪细胞的PKM2在mRNA水平及蛋白质水平均明显下调,且成脂能力明显下降。因此,在脂肪细胞分化过程中PKM2的表达水平受C/EBPβ调控,并与有丝分裂克隆扩增密切相关。(本文来源于《复旦大学》期刊2013-04-06）
李晓燕,白洁[4]（2012）在《阵发性睡眠性血红蛋白尿GPI阴性细胞免疫选择与克隆扩增分子机制的研究进展》一文中研究指出阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal noc-turnal hemoglobinuria,PNH)是一种后天获得性造血干细胞克隆性疾病。该病源于造血干细胞PIG-A基因突变引起糖肌醇磷脂(GPI)合成障碍,继而引起通过GPI锚连在细胞表面的多种膜蛋白的缺失,导致血管内溶血发作,全血细胞减少和血栓形成〔1〕。近(本文来源于《临床血液学杂志(输血与检验版)》期刊2012年03期）
郭亮,李希,黄家鑫,汤其群[5]（2011）在《脂肪细胞分化过程中转录因子C/EBPβ促进有丝分裂克隆扩增的机制研究》一文中研究指出目的:脂肪细胞的发育分化与肥胖的发生关系密切。研究脂肪细胞分化的分子机制对于人们有效控制肥胖具有重要意义。接触抑制的前脂肪细胞,在分化剂诱导下,首选经历两轮有丝分裂克隆扩增(Mitotic Clonal Expansion,MCE),然后进入脂肪细胞的终末分化。转录因子C/EBPβ对于(本文来源于《第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集》期刊2011-08-13）
晏其佳,俞海波,卢建红,喻正源,左埒莲[6]（2011）在《EB病毒潜伏感染基因组在上皮肿瘤细胞克隆扩增中的保留(英文)》一文中研究指出目的:探讨EBV感染的上皮细胞在克隆扩增过程中细胞中EBV基因组保留或丢失的实质。方法:使用EBV潜伏感染的上皮肿瘤细胞系293-EBV,其中的EBV基因组通过绿色荧光蛋白(green fluores-cent protein,GFP)示踪,经过多次传代使细胞的GFP表达强度有强弱差异,且部分细胞完全丢失EBV基因组,然后通过显微共聚焦连续观察细胞的生长。将细胞分散至极低密度,观察单个细胞形成克隆过程中细胞的分裂及GFP表达强度的变化。结果:细胞在生长过程中由于黏性和运动性而移动,但GFP阳性的细胞在未分裂时荧光强度不变。细胞形成的克隆其形状有紧凑型和松散型。EBV阳性的细胞在紧凑型生长时易保留EBV基因组。随着细胞数增加,EBV阳性细胞在松散型生长时GFP表达逐渐变弱;而GFP表达弱的细胞易完全失去EBV基因组。结论:EBV阳性上皮细胞具有保留EBV基因组进行克隆扩增的能力,EBV保留的实质是EBV基因组能随着细胞增殖而复制和传代,这与细胞密度有关,还可能受上皮细胞环境的影响。(本文来源于《中南大学学报(医学版)》期刊2011年07期）
张志惠,田玉玲,刘宇浩[7]（2010）在《基于克隆扩增策略的免疫算法》一文中研究指出借鉴动态克隆选择算法的运行机制并结合克隆选择机理,提出一种基于克隆扩增策略的免疫算法。该算法提出调整未成熟检测器的补入条件,对成熟检测器群体实施克隆扩增策略,并消除冗余的成熟检测器。算法设计了对成熟检测器群体进行有效性评估的方法,由检测器的有效性确定克隆规模。理论证明了该算法的收敛性。实验表明,与传统的动态克隆选择算法相比,该算法提高了检测率,有效抑制了误报率,改善了算法的适应性。(本文来源于《计算机应用研究》期刊2010年11期）
李扬秋,杜欣[8]（2010）在《T细胞克隆扩增与骨髓增生异常综合征》一文中研究指出骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性的克隆性造血干细胞异常疾病,病人常伴有免疫学异常。T细胞介导的造血前体细胞抑制而导致细胞减少与MDS的发生发展有一定相关性。本文总结了目前基于T细胞受体(TCR)谱系等分析所研究的MDS病人T细胞克隆扩增特点,论述的主要问题包括有:MDS病人自身免疫现象和T细胞介导造血抑制的相关性,MDS病人中T细胞克隆扩增特点,MDS病人T细胞谱系变化,MDS病人胸腺近期输出功能变化,免疫抑制治疗效果与MDS病人T细胞克隆的相关性,以及T细胞克隆分析的临床应用价值等。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2010年03期）
庄凌屹,孟相如,张立[9]（2009）在《免疫克隆扩增模式提取在网络故障诊断中的应用》一文中研究指出为了解决网络故障诊断中的模式识别问题,文中从生物免疫系统与网络故障诊断的相似性出发,提出一种基于免疫克隆扩增原理的网络故障诊断方法。该方法模拟生物免疫系统中的克隆、变异、抑制、记忆等特性,通过免疫训练网络故障样本提取网络故障模式,再用最近邻分类原则对故障样本分类。实验结果表明该方法能有效识别网络故障,并且对于未知模式的故障具有一定的泛化性。(本文来源于《通信技术》期刊2009年07期）
傅小强[10]（2007）在《结核杆菌ESAT-6基因的克隆扩增及其在耻垢分枝杆菌和毕赤酵母中表达》一文中研究指出目的构建结核杆菌ESAT-6基因穿梭质粒,在耻垢分枝杆菌中表达蛋白并对重组蛋白进行鉴定,同时利用电转化方法,将重组质粒转化到卡介苗中,为疫苗研究奠定实验基础;构建能在毕赤酵母表达系统中表达结核杆菌ESAT-6蛋白的重组质粒,并对其表达产物进行基本生物学特性鉴定,为新型结核病疫苗的研究开发提供研究依据。方法[1]从GenBank获得结核分枝杆菌ESAT-6基因DNA序列,根据该序列及ps3000表达载体的要求,设计和合成一对引物,利用PCR技术扩增ESAT-6基因,并插入pGEMT载体,进行PCR,双酶切及测序鉴定。[2]亚克隆法构建ps3000—ESAT-6大肠杆菌--分枝杆菌穿梭质粒,经电转化法导入到耻垢分枝杆菌和卡介苗中,Western blot鉴定其生物学活性。[3]设计和合成毕赤酵母表达引物并引入酶切位点,扩增ESAT-6基因,并插入pGEMT载体,进行PCR,双酶切及测序鉴定。[4]亚克隆法构建pPICZaA-- ESAT-6穿梭质粒,经化学转化法整合毕赤酵母GS115染色体中,PCR鉴定目的基因的整合,Zeocin抗性筛选多拷贝重组子并诱导表达,表达产物用Western-blot鉴定其表达。结果[1]成功扩增了结核分枝杆菌ESAT-6基因;正确构建穿梭质粒ps3000-ESAT-6,用pET表达系统ESAT-6纯化蛋白免疫小鼠的多抗血清通过Western blot证实了该重组耻垢杆菌中有表达并具有生物学活性。[2]从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因片段,成功构建重组表达质粒pPICZaA-ESAT-6,SDS-PAGE显示胞外并无表达,酵母细胞经裂解后ESAT-6基因翻译的蛋白加上载体的信号肽序列和c-myc表位一共18kDa左右在蛋白胶上相应位置有表达,并且能被结核病人血清抗体所识别。结论[1] ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达ESAT-6蛋白的重组BCG( Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。[2]利用毕赤酵母表达系统获得胞内表达的结核杆菌ESAT-6重组蛋白,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。(本文来源于《华中科技大学》期刊2007-05-01）
克隆扩增论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:TCR谱系多样性研究是监测异基因造血干细胞移植(HSCT)后血液肿瘤患免疫重建及特异性反应性T细胞克隆演变的重要方式。此前,本课题组对一例复发性T-ALL患者造血干细胞移植前及移植后TCRγ和TCRδ谱系的检测和动态分析发现了γδ+恶性肿瘤克隆的演变和反应性T细胞克隆的存在。该病例在经HSCT治疗后第100周时再次复发并伴随着Vδ5+T细胞(肿瘤克隆)的克隆增殖,经过2周的化疗后患者获得再次缓解。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆扩增论文参考文献
[1].石敏,董琼,暨明.体外多克隆扩增培养Treg中敲低IRF4后的相关功能变化[C].中国生理学会张锡钧基金第十四届全国青年优秀生理学学术论文综合摘要、中国生理学会第十二届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要.2017
[2].徐玲,翁建宇,黄欣,陈少华,耿素霞.造血干细胞移植后伴微小残留病变T-ALL患者一例Vδ4及Vδ3克隆扩增模式报道与分析[C].第九届全国免疫学学术大会论文集.2014
[3].姜宴.3T3-L1前脂肪细胞分化过程中有丝分裂克隆扩增调控机制的研究[D].复旦大学.2013
[4].李晓燕,白洁.阵发性睡眠性血红蛋白尿GPI阴性细胞免疫选择与克隆扩增分子机制的研究进展[J].临床血液学杂志(输血与检验版).2012
[5].郭亮,李希,黄家鑫,汤其群.脂肪细胞分化过程中转录因子C/EBPβ促进有丝分裂克隆扩增的机制研究[C].第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集.2011
[6].晏其佳,俞海波,卢建红,喻正源,左埒莲.EB病毒潜伏感染基因组在上皮肿瘤细胞克隆扩增中的保留(英文)[J].中南大学学报(医学版).2011
[7].张志惠,田玉玲,刘宇浩.基于克隆扩增策略的免疫算法[J].计算机应用研究.2010
[8].李扬秋,杜欣.T细胞克隆扩增与骨髓增生异常综合征[J].中国实验血液学杂志.2010
[9].庄凌屹,孟相如,张立.免疫克隆扩增模式提取在网络故障诊断中的应用[J].通信技术.2009
[10].傅小强.结核杆菌ESAT-6基因的克隆扩增及其在耻垢分枝杆菌和毕赤酵母中表达[D].华中科技大学.2007
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