犬副流感病毒的分离鉴定与生物学特性研究

论文摘要

犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus,CPIV）是引起犬窝咳的主要原因,在1967年从患呼吸道疾病的犬中首次被分离到,病犬的主要临床表现为咳嗽、流鼻涕等呼吸系统疾病症状。目前犬副流感病毒呈世界分布,对养犬业带来了巨大的经济损失,因此分离当下犬副流感病毒的流行株有利于了解病毒的流行情况,对于该病的防控也有很大的帮助。本研究工作主要分三部分进行:1、本试验建立了一种快速检测犬副流感病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬腺病毒Ⅱ型的多重PCR方法。对其特异性和敏感性进行检测,结果表明良好。对采集的30份犬病料样品进行检测,CPIV阳性率0%（0/30）、CDV阳性率63.33%（19/30）、CPV阳性率33.33%（10/30）、CAV-2阳性率6.66%（2/30）,证明建立的PCR方法可以用于临床诊断。2、本试验采集了咳嗽、流鼻涕等呼吸性系统疾病症状的病犬肺脏组织,用建立的多重PCR方法检测,其中单纯感染CPIV的肺脏组织制备成样品,接种非洲绿猴肾细胞（Vero）上进行分离培养。运用RT-PCR方法、病毒的电镜观察和血凝试验进行病毒的鉴定。结果RT-PCR试验显示有534bp特异性目的片段;病毒的电镜观察其超微结构呈圆形、直径在80-200nm之间、有囊膜等,与金昌德报道的一致;病毒能够凝集1%猪和鸡红细胞,与副流感病毒特性一致;克隆CPIV NP基因的ORF序列,并与GenBank上的副流感病毒进行同源性比较,高达97%以上,确定所分离的病毒为犬副流感病毒,并命名为CPIV-BJ01。3、本试验对CPIV-BJ01第八代和第九代进行了一步生长曲线的测定,结果显示在12-48h病毒迅速增殖,细胞培养液中病毒滴度急剧上升,60h之后趋于稳定。对病毒进行了热敏性试验、紫外照射试验和全长序列分析。结果显示病毒对热敏感、长时间的紫外照射会杀死病毒、全长序列分析其与PIV5 1168-1（登录号:KC237064.1）和PIV5 ZJQ-221（登录号:KX100034.1）同源性高达99%,且在同一个分支,亲缘关系较近。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一篇 文献综述
•   1.1 犬副流感病毒的病原学特征
•   1.2 犬副流感病毒的分子生物学特征
•   1.3 犬副流感病毒基因结构及蛋白功能
•   1.4 犬副流感病毒的理化和生物学特性
•   1.5 犬副流感病的临床症状和病理变化
•   1.6 犬副流感病毒诊断方法
•   1.7 犬副流感病的防治
• 第二篇 研究内容
•   第一章 多重PCR方法的建立与应用
•     1.1 材料
•     1.2 方法
•     1.3 结果
•     1.4 讨论
•     1.5 小结
•   第二章 犬副流感病毒的分离与鉴定
•     2.1 材料
•     2.2 方法
•     2.3 结果
•     2.4 讨论
•     2.5 小结
•   第三章 犬副流感病毒的生物学特性研究
•     3.1 材料
•     3.2 方法
•     3.3 结果
•     3.4 讨论
•     3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 作者简介
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 刘畅

导师: 崔尚金

关键词: 多重,犬副流感病毒,分离鉴定,生物学特性

来源: 吉林农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学

分类号: S852.65

DOI: 10.27163/d.cnki.gjlnu.2019.000491

总页数: 53

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