禽腺病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

禽腺病毒4型（FAdV-4）是心包积水综合征的重要病原。本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段。根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体（hexon）基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化。建立了禽腺病毒4型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法。该方法与其他禽病病毒均无交叉反应。表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒、试剂及药品
•   1.2 引物合成
•   1.3 病毒基因组的提取
•   1.4 标准品的制备
•   1.5 荧光定量检测方法的建立
•     1.5.1 荧光定量PCR反应体系的优化与标准曲线的建立
•     1.5.2 特异性试验
•     1.5.3 敏感性试验
•     1.5.4 重复性试验
•   1.6 临床应用
• 2 结果与分析
•   2.1 荧光定量PCR反应体系优化与标准曲线建立
•   2.2 荧光定量PCR检测方法的特异性
•   2.3 荧光定量PCR检测方法的敏感性
•   2.4 重复性试验
•   2.5 临床应用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 宋玲玲,于可响,王友令,马秀丽,袁小远,刘涛,鞠艳,亓丽红,艾武

关键词: 禽腺病毒,血清型,实时荧光定量,检测

来源: 畜牧与兽医 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东省农业科学院家禽研究所

基金: 山东省重点研发计划项目(2016GNC110009),国家重点研发计划(2016YFD0500800),国家自然科学基金(31502093),山东省自然科学基金青年科学家研究奖励基金(BS2015SW007)

分类号: S852.65

页码: 118-122

总页数: 5

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