导读:本文包含了哺乳动物双杂交论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:哺乳动物,蛋白,复合物,乙酰,受体,雌激素,胰腺。
哺乳动物双杂交论文文献综述
水小溪,刘晨,郑智慧,路新华,张华[1]（2010）在《基于哺乳动物双杂交技术靶向HIV-1 gp41的新抗HIV进入抑制剂药物高通量筛选模型的建立》一文中研究指出gp41是HIV-1表面的包膜糖蛋白(Env)成分,介导了病毒膜和宿主细胞膜间的融合,在HIV-1的侵染过程中起关键作用。gp41中的N末端重复序列(NHR)和C末端重复序列(CHR)通过相互作用形成关键的核心叁聚体发夹状结构,从而介导HIV膜和宿主细胞膜的融合过程。抑制gp41中的NHR和CHR的核心叁聚体形成已经成为抗HIV药物的新靶点。本研究利用哺乳动物双杂交技术检测蛋白之间相互作用的原理,建立新的靶向HIV-1gp41抗HIV药物高通量筛选模型。将PCR扩增的gp41NHR和CHR基因片段分别连接至哺乳动物双杂交的pACT和pBIND载体上构建表达载体pACT-NHR和pBIND-CHR,用脂质体与已经构建好的报告质粒pGl3-GAL4进行共转染动物细胞。通过检测荧光素酶基因的表达水平定量评价化合物对NHR和CHR的相互作用的拮抗活性。经过多种条件的优化,使得筛选模型的信号本底比达10,Z’因子大于0.5。阳性对照化合物XTT在本模型中可以浓度依赖地降低荧光素酶的表达,其IC50为13.54μg/mL(20.1μM),证明该模型具有很好的灵敏度和稳定性,可以用于大量药物筛选。本研究建立的全新靶向gp41的抗HIV小分子药物筛选模型,为发现和研究新一代的抗HIV药物研究打下坚实的基础。(本文来源于《2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集》期刊2010-11-01）
巩雪俐,张丽,张建龙,张锦前[2]（2010）在《哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用》一文中研究指出目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组差别均有统计学意义(P<0.05)。结论LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内存在相互作用关系,且单独转染后没有自身激活作用。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2010年02期）
小溪,刘晨,郑智慧,路新华,张华[3]（2009）在《基于哺乳动物双杂交技术靶向HIV-1gp41的新抗HIV进入抑制剂药物高通量筛选模型的建立》一文中研究指出gp41是HIV-1表面的包膜糖蛋白(Env)成分,介导了病毒膜和宿主细胞膜间的融合,在HIV-1的侵染过程中起关键作用。gp41中的N末端重复序列(NHR)和C末端重复序列(CHR)通过相互作用形成关键的核心叁聚体发夹状结构,从而介导HIV膜和宿主细胞膜的融合过程。抑制gp41中的NHR和CHR的核心叁聚体形成已经成为抗HIV药物的新靶点。本研究利用哺乳动物双杂交技术检测蛋白之间相互作用的原理,建立新的靶向HIV-1gp41抗HIV药物高通量筛选模型。将PCR扩增的gp41NHR和CHR基因片段分别连接至哺乳动物双杂交的pACT和pBIND载体上构建表达载体pACT-NHR和pBIND-CHR,用脂质体与已经构建好的报告质粒pGl3-GAL4进行共转染动物细胞。通过检测荧光素酶基因的表达水平定量评价化合物对NHR和CHR的相互作用的拮抗活性。经过多种条件的优化,使得筛选模型的信号本底比达10,Z’因子大于0.5。阳性对照化合物XTT在本模型中可以浓度依赖地降低荧光素酶的表达,其IC50为13.54μg/mL(20.1μM),证明该模型具有很好的灵敏度和稳定性,可以用于大量药物筛选。本研究建立的全新靶向gp41的抗HIV小分子药物筛选模型,为发现和研究新一代的抗HIV药物研究打下坚实的基础。(本文来源于《2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集》期刊2009-11-21）
王艳乐[4]（2007）在《哺乳动物双杂交分析Sp1与p300的相互作用》一文中研究指出“双杂交”或称“相互作用诱钓”,是一种以在基因水平上重建转录因子功能为基础,利用杂交基因对报告基因的激活来检测蛋白-蛋白间相互作用的一种体内分析方法。它不仅能确定已知蛋白质之间是否存在相互作用,还能鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白。哺乳动物双杂交系统是酵母双杂交系统改进后在哺乳动物细胞中的应用。p16INK4a是细胞周期的抑制因子,可以与CDK4/CDK6结合从而抑制其与cyclinD结合,使细胞周期停滞于G1期。p16INK4a的突变会引发多种肿瘤的发生。p16INK4a基因的启动子上存在着Sp1的经典结合位点GC盒,已有研究表明,Sp1能与p16INK4a启动子结合并调控其表达。同时,p16INK4a的表达也受组蛋白乙酰化的调控。在本文中,我们证实组蛋白乙酰转移酶p300与Sp1能够协同增强p16INK4a启动子荧光素酶报告基因的活性,在mRNA及蛋白水平上也能协同上调p16INK4a的表达。哺乳动物双杂交结果显示, Sp1与p300之间的相互作用主要发生在Sp1的N端和p300的Q区之间。(本文来源于《东北师范大学》期刊2007-05-01）
王小娟,王海彬,于静娟,杨俊兴,黄志伟[5]（2006）在《利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体的作用》一文中研究指出目的:利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体(ERs)活性的影响。方法:通过MTT法检测仙灵骨葆对Hela细胞活力的影响,并构建含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD及含有报告基因Lusferase的质粒pFR-Luci,将二者与内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,形成Gal4DBD-ERa和ERb LBD细胞杂交报告系统。以染料木苷为阳性对照验证本杂交系统,并利用本系统考察仙灵骨葆对ERs活性的影响。结果:仙灵骨葆在25～2 500 ng·mL-1浓度范围内可以促进HeLa细胞的增殖。10μmol．L-1染料木苷可以显着提高Gal4DBD-ERα和ERβLBD细胞杂交报告系统中ERa和ERb的活性,证明本系统构建成功。仙灵骨葆对ERa具有浓度依赖性的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERa的相对荧光活性是DMSO对照组的18倍;仙灵骨葆对ERb也具有一定的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERb的相对荧光活性是DMSO对照组的4倍。结论:本研究成功构建了含有雌激素受体配体结合域的细胞杂交系统,仙灵骨葆对该系统的ERs具有激活作用。(本文来源于《中国新药杂志》期刊2006年23期）
张帆[6]（2006）在《哺乳动物细胞双杂交系统分析HIV-1 Vif-Cul5-SCF复合物及复合物小肽抑制剂的筛选》一文中研究指出HIV-1 Vif蛋白是HIV-1病毒在体内进行复制和保持病原性所必需的,它的存在可以使病毒粒子的感染力提高10-1000倍。研究表明宿主细胞中存在一种抗病毒因子CEM15/APOBEC3G,可以调节宿主细胞的抗HIV-1活性,而这种抗病毒活性能被HIV-1 Vif所抑制。最新的研究发现Vif能与Cul 5、Rbx I、Elongin C、ElonginB等蛋白相作用,并且为其抗APOBEC3G功能所依赖。因此对于Vif抑制APOBEC3G的作用机制提出一个假设:Vif通过形成Cullin5-based SCF-like complex这样一个E3复合物,以泛素蛋白酶途径下调细胞内APOBEC3G的分子水平,使之无法有效的包装入子代病毒,从而保持了病毒的感染性。我们的实验利用哺乳动物细胞双杂交方法,对Vif-Cullin5-based E3复合物组分间的直接相互作用进行了检测,期望能确定它们的作用关系,进一步证实和完善这个作用模型。结果显示,我们测得较强的Vif与Elongin B的相互作用,而预期应测得的Vif与Elongin C的相互作用则很微弱;这与已知的文献报道不同,但与我们在进行的另一个Vif晶体研究试验结果一致。结果还表明受体蛋白Vif与泛素化靶蛋白CEM15是直接结合的,不需要通过其它连接蛋白的参与。我们还用噬菌体展示肽库对Vif蛋白进行了配体筛选实验,找到了保守序列,为Vif蛋白的小肽抑制剂的研究提供新的靶点。(本文来源于《吉林大学》期刊2006-05-01）
周莉,马立新[7]（2005）在《可诱导的哺乳动物双杂交系统》一文中研究指出传统的哺乳动物双杂交系统对一些中等或弱蛋白质相互作用的检测能力很弱,提高双杂交系统的敏感性已成为目前哺乳动物双杂交系统急需解决的问题。我们在双杂交系统中的DNA结合结构域融合蛋白表达单元以及激活结构域的融合蛋白表达单元分别置于12拷贝的蛋白ZFHD1结合位点和白介II基本启动子的下游,同时在载体上引入响应雷帕霉素的基因诱导系统。雷帕霉素是一种小分子免疫抑制剂,一方面它可以以高亲和性与胞质蛋白FKBP结合,另一方面也能和脂激酶同源类似物(本文来源于《中国蛋白质组学第叁届学术大会论文摘要》期刊2005-07-01）
哺乳动物双杂交论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组差别均有统计学意义(P<0.05)。结论LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内存在相互作用关系,且单独转染后没有自身激活作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
哺乳动物双杂交论文参考文献
[1].水小溪,刘晨,郑智慧,路新华,张华.基于哺乳动物双杂交技术靶向HIV-1gp41的新抗HIV进入抑制剂药物高通量筛选模型的建立[C].2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集.2010
[2].巩雪俐,张丽,张建龙,张锦前.哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用[J].新疆医科大学学报.2010
[3].小溪,刘晨,郑智慧,路新华,张华.基于哺乳动物双杂交技术靶向HIV-1gp41的新抗HIV进入抑制剂药物高通量筛选模型的建立[C].2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集.2009
[4].王艳乐.哺乳动物双杂交分析Sp1与p300的相互作用[D].东北师范大学.2007
[5].王小娟,王海彬,于静娟,杨俊兴,黄志伟.利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体的作用[J].中国新药杂志.2006
[6].张帆.哺乳动物细胞双杂交系统分析HIV-1Vif-Cul5-SCF复合物及复合物小肽抑制剂的筛选[D].吉林大学.2006
[7].周莉,马立新.可诱导的哺乳动物双杂交系统[C].中国蛋白质组学第叁届学术大会论文摘要.2005
论文知识图
