覃宇奇1覃冠平2(1广西壮族自治区河池市医改办547000)(2河池市人民医院547000)
【摘要】目的研究Kaiso和P120ctn表达与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学技术检测80例鼻咽癌、20例正常鼻咽粘膜上皮标本中Kaiso和P120ctn的表达情况。结果Kaiso和P120ctn表达在鼻咽癌组织与在正常鼻咽粘膜上皮差异有统计学意义，P<0.05。Kaiso和P120ctn的表达与鼻咽癌病理分期、分化程度及淋巴结转移密切相关，P<0.05。结论Kaiso与P120ctn的表达情况与鼻咽癌浸润、转移有关，可作为判断鼻咽癌生物学特征和预后的重要指标。
【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）02-0184-02
近年来，关于肿瘤的生长、浸润、转移分子机理的研究越来越深入。P120-连环蛋白（P120ctn）被认为是一种与癌细胞浸润、转移有关的链蛋白，它可以与E-cadherin结合，形成E-cadherin/catenin复合体（cadherincatenincomplex,CCC），参与细胞粘附、生长、增殖等过程[1]。而且，p120ctn也是小GTP酶的重要调节因子，它可以在细胞浆中通过调节小GTP酶的活性状态来调控细胞骨架的装配，它在细胞粘附以及肿瘤侵袭和转移方面的作用已经受到人们的广泛重视。随着研究的深入，尤其是核转录因子Kaiso的发现，人们发现p120ctn还可以作为一种信号分子穿梭于核/浆之间，通过影响核转录因子Kaiso来调控基因的表达。目前，有关Kaiso与P120ctn在鼻咽癌组织中表达研究尚未见报道。我们应用免疫组化方法了解Kaiso、P120ctn在鼻咽癌中的表达以及与临床病理特征的关系，以进一步探讨鼻咽癌的发生、发展、浸润、转移机制，希望能更好地为患者诊断、治疗、判定预后提供依据。
1材料和方法
1.1临床资料
收集2008-2011年河池市人民医院病理科存档的鼻咽癌活检标本80例和正常鼻咽粘膜上皮标本20例。鼻咽癌患者中，男46例，女34例；年龄25～76岁，中位年龄45岁；按WHO国际组织分类标准：角化性鳞状细胞癌11例，分化型非角化性癌38例，未分化型非角化性癌31例；按国际抗癌联盟（UICC）临床TNM分期：I-II期42例，III-IV期38例;伴颈部淋巴结转移者32例。所有鼻咽癌患者活检前均未接受过放化疗及其它针对肿瘤的治疗。标本经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，HE常规染色后明确诊断。
1.2试剂与方法
鼠抗人Kaiso单克隆抗体及P120ctn单克隆抗体,浓缩型(购自SantaCruz公司);二步法MaxVision检测试剂盒(福建迈新生物技术公司)。
免疫组化二步法染色步骤：切片常规脱蜡、水化；柠檬酸盐缓冲液高压抗原修复；3%过氧化氢溶液室温下孵育15min阻断内源性过氧化物酶活性；滴加一抗Kaiso、P120ctn，4℃孵育过夜；滴加MaxVision检测试剂盒中的试剂A(增强剂)和试剂B（酶标羊抗鼠聚合物），各室温下孵育20min；滴加DAB溶液显棕黄色；苏木素复染；脱水、透明、封片。PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性片作阳性对照。
1.3结果判定
参照Gamallo等[2]免疫组化评分方法，在高倍视野下，①按肿瘤细胞显色的比例评分，＜25%为0分，25%-50%为1分，51%-75%为2分，＞75%为3分;②按肿瘤细胞着色强度评分:淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。采用染色强度评分与染色范围评分之和进行结果判断：0分为（-）；2分为（+）；3-4分为（++）；5-6分为（+++）。P120ctn为膜表达，膜（+++）为正常表达，膜（+）～（++）为表达减弱，膜（-）为表达缺失。无论膜表达情况如何，只要≥10%瘤细胞胞浆或核出现棕褐色颗粒则为异位表达。膜表达减弱、缺失和异位表达统一定义为异常表达。Kaiso为浆/核表达，当Kaiso核阳性信号≧5%时定为核阳性表达。
1.4统计学处理
所得数据使用spss13.0统计学软件处理，P<0.05为有显著性差异。
2结果
2.1免疫组化染色
正常鼻咽粘膜上皮中，P120ctn均有19例（95%）在细胞膜上强烈表达。但在鼻咽癌组织中膜表达下调，主要表现为浆表达，异常表达率为68.75%（55/80），其中6例伴有胞核的异位表达。Kaiso在正常鼻咽粘膜上皮细胞中存在微弱的浆表达，但按照阳性标准为阴性表达。鼻咽癌组织中Kaiso浆阳性表达为63.75%（51/80）,明显高于正常鼻咽粘膜上皮Kaiso的表达，P＜0.05。
2.2鼻咽癌组织中Kaiso/P120ctn表达与临床病理特征间的关系
Kaiso和P120ctn的表达与鼻咽癌的病理分型显著相关（分别为P=0.002和P=0.019），分化差的肿瘤细胞中异常表达率高；与TNM分期亦显著相关（分别为P=0.007和P=0.001），临床分期越晚，Kaiso和P120ctn异常表达就越明显；鼻咽癌Kaiso和P120ctn异常表达者有较易出现颈部淋巴结转移的倾向（分别为P=0.008和P=0.014）。
3讨论
转录因子Kaiso是POZ/ZF超家族转录因子,直接连接于p120ctn的Arm重复区域,并作为p120ctn的一个连接转录因子主要在核周的区域大量表达。P120ctn在细胞核内与转录因子Kaiso连接，可以和核内转录抑制因子kaiso结合，并且是其唯一的结合蛋白。磷酸化的p120ctn可以脱离复合体而游离到细胞核或细胞质中，阻断Kaiso介导的转录抑制功能而引起肿瘤的发生。Kaiso的失常调控可能在缺失cadherin的转移细胞中存在多向性作用,P120ctn与Kaiso的相互作用介导了肿瘤相关活动。
本研究探讨了Kaiso和P120ctn的蛋白表达与鼻咽癌临床病理特征间的关系。我们发现Kaiso和P120ctn表达与鼻咽癌分化程度、TNM分期、颈部淋巴结转移呈显著相关，鼻咽癌分化越差、恶性程度越高、临床分期越晚，Kaiso和P120ctn异常表达就越明显；鼻咽癌Kaiso和P120ctn异常表达者有较容易出现颈部淋巴结转移的倾向。检测Kaiso和P120ctn蛋白的表达有望成为鼻咽癌早期诊断和判断预后的分子指标。但p120ctn和Kaiso之间的相互作用和致瘤机制相对复杂，因此其在肿瘤的形成、进展以及转移中的作用尚需进一步研究。
参考文献
[1]欧海玲,覃宇周，张锡流，等.P120ctn在鼻咽癌中的表达及其与细胞凋亡的关系[J].实用医学杂志,2009,25(22):3749-3752.
[2]GamalloC,PalaciosJ,SuarezA,etal.CorrelationofE-cadherinexpressionwithdifferentiationgradeandhistologicaltypeinbreastcarcinoma[J].AmJPathol,1993,142(4):987-993.