楚雄医药高等专科学校云南楚雄675000
摘要：肠出血大肠杆菌O157：H7作为一种新型病原菌，这是当前世界上食源性疾病的重要诱因，由其所引发的各种感染问题，严重威胁着人类的生命健康，并且还会引发各种并发症。那么在这样的背景下，从分子生物学的角度出发，对肠出血大肠杆菌O157：H7进行相应的检测调查，能够为肠出血大肠杆菌O157：H7疾病的预防和诊断提供有效的支撑杆。因此本文就对肠出血大肠杆菌O157：H7的分子生物学检测方法研究进展进行有效的分析和探究。
关键词：肠出血大肠杆菌O157：H7；分子生物学；检测方法
肠出血大肠杆菌O157：H7对于人体的致病力相对较强，一般每克感染载体含菌在10个以上，就能够引发感染。因此在当前的流行病学调查研究中，能否快速、灵敏的检测肠出血大肠杆菌O157：H7就显得十分重要，那么在目前我国分子生物学技术快速发展的背景下，相关人员可以从分子生物学的角度出发，探究肠出血大肠杆菌O157：H7的快速、准确检测方法。
一、限制性片段长度多态性
限制性片段长度多态性能够直接根据某个基因的限制性内切酶的酶切点之间，所发生的碱基替换、重排、插入和缺失等，致使产生新的限制性酶切点。那么新的切点出现，就可以缩短限制性片段的长度，而就切点的丢失，就能够让限制性片段的长度加长。再通过基因的PCR扩增，还有限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳分离，在经过溴化乙锭染色之后，能够直接在紫外线下进行观察，并比较不同个体DNA水平的多态性[1]。RFLP作为目前最常用的细菌亚分类方式之一，其也能够被有效应用在肠出血大肠杆菌O157：H7的差异分析当中。相关人员直接用PCR-RFLP对从人体分离出来的大肠杆菌stx1基因变化情况进行了分析，结果发现只应用PCR技术，还无法解释相同病原菌编码相同疾病，所引发的感染却出现不同症状的现象，而RFLP方法则为大肠杆菌O157致病机理的研究，提供一个有效的研究方法和途径。
二、聚合酶链反应技术
目前聚合酶链反应技术就是一个最常用的肠出血大肠杆菌O157：H7致病基因的检测方式，其已经从原本的单一PCR逐渐发展成为多种的PCR，甚至还有实时定量的PCR[2]。通过利用多重PCR方式扩增eae、ehxA、saa、stx1和stx2基因，发现检测的ETEC中有几种或者全部都是致病基因。随着目前实时定量PCR技术的快速发展，其也被有效应用到肠出血大肠杆菌O157：H7检测过程中了，并且也证明了实时定量PCR也是一种快速检测EHEC的方式。并且其对于重复结果为阴性的试验过程较为快速，所以这就导致这种方法能够应用于大量怀疑含有肠出血大肠杆菌O157：H7的样品中，比如可以直接在临床微生物分辨分析中进行应用。
三、随机片段长度多态性
随机片段长度多态性技术有效融合了RELP和PAPD这两个技术的优势和特点，能够直接利用两种或者两种以上的酶切割DNA，从而形成不同的酶切位点的限制性酶切片段。并在其所得的酶切片段上加上双链人工接头，以此作为PCR扩增的模板，通常对于PCR的引物，AFLP就作了修饰，其通过将引物和酶切片段识别序列有效结合起来[3]。核心序列和人工接头进行互补，从而进行选择性的扩增，那么DNA片段在经过两种或者两种以上的酶，进行同时切割，那么如何其遗传特性发生了改变，酶切片段数目和长短发展就会发生变化，从而实现其多态性。相关人员通过对O157进行FAFLP分析，FAFLP相对于当前的分子生物学分类方法，其在理论上也更加先进，整个操作也更加标准化，这和PEGE方法相比较而言，能够得到更加详细的数据，并且扩增片段能够精确到±1bp。
四、脉冲场凝胶电泳
脉冲场凝胶电泳技术也长被应用在基因组DNA分析过程中，这也是当前分子流行病学调查过程中，最为常用的技术和方法，也被成功的应用在微生物遗传性分析当中了。脉冲场凝胶电泳技术适用于检测，较为罕见的限制性内切酶产生数量较少，常规的电泳是无法将其分开的，但可以用一个不断变化的脉冲电场将其分开。目前人们也已经完成了PFGE标准化流程制定了，并且也已经在多次不同的肠出血大肠杆菌O157：H7感染爆发中进行应用了[4]。有相关人员已经从113只当中，分离了4株肠出血大肠杆菌O157：H7，并从83份腹泻患者的粪便中分离出了10株大肠杆菌O157:H7，并对从两处不同的地方，所分离到的大肠杆菌O157：H7进行基因组DNAPEGF分析，发现了这10株大肠杆菌O157：H7的PEGF检查结果一致，那么这就表示了它们都有共同的起源。
五、随机扩增多态性
随机扩增多态性DNA是直接建立在PCR基础上的，能够直接通过一系列有10个碱基的单链随机引物，并对基因组的DNA进行PCR扩增，通过这样的方式，检测其多态性。通常在实际分析过程中，其所用的引物数相对较大，虽对每一个引物来说，检测基因组的DNA多态性区域有限，但利用一系列引物，就可以直接让检测区域覆盖整个基因组[5]。所以说，RAPD能够直接对整个基因组DNA进行多态性检测，这也导致该项技术逐渐被用于肠出血大肠杆菌O157：H7的多态性检测当中。在以当前PCR技术为基础上，来检测DNA多态型的各种方式当中，RAPD有着更加简单、方便、快速等多种优势。其在肠出血大肠杆菌O157：H7检测中，能够建立一个高效区分不同亚组群的方式，尽管其相较于PFGE来说，区分能力可能相对较弱，但其有着简单、快速的优势。更关键的是，RAPD对DNA的要求不高，在实际应用过程中，只要少量的模板，就能够用于扩增反应。
结语：
总而言之，在肠出血大肠杆菌O157：H7检测过程中，有效应用分子生物学方法，能够有效应对肠出血大肠杆菌O157：H7多态性的特征，为相关调查是否存在潜在爆发流行提供一个有力的支撑作用，从而更好的应用在食品工业检测中。
参考文献：
[1]高计会.一起仔猪致病性大肠杆菌和沙门氏杆菌混合感染的诊断[J].黑龙江畜牧兽医,2018(12):144-146.
[2]赵堉文,王海霞,别松涛,邵茜,王春华,王东恒,李正.基于DNA电化学生物传感技术的甘草提取液中大肠杆菌快检方法研究[J].中国中药杂志,2018,43(06):1209-1214.
[3]王永刚,杨光瑞,马雪青,王鸣刚,冷非凡,王帆,马建忠,陈吉祥.内生真菌链格孢菌醋酸乙酯提取物对大肠杆菌抑菌机制的研究[J].中草药,2018,49(02):374-381.
[4]张雪寒,张碧成,栾晓婷,汪伟,周俊明,何孔旺.遗传标志性基因Z0372PCR检测肠出血大肠杆菌O157:H7[J].西南农业学报,2015,28(01):409-413.
[5]赵惠敏.抗产毒大肠杆菌(ETEC)和肠出血大肠杆菌(EHEC)感染的最新进展(第一部分)[J].疾病监测,2000(03):116-118.