导读:本文包含了功能类成分论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:丹参,功能,基因,转录,成分,甘草,途径。
功能类成分论文文献综述
滕飞[1]（2019）在《黑果腺肋花楸原花青素类成分分析及功能食品的研制开发》一文中研究指出以黑果腺肋花楸鲜果中的原花青素为目标成分,对黑果腺肋花楸原花青素采用超声辅助提取法进行提取工艺研究。通过单因素实验以及正交实验对黑果腺肋花楸原花青素的提取进行工艺优化,提取工艺最佳条件为采用70%乙醇溶液为提取剂、料液比1:20、加入盐酸将溶液pH调至3、使用超声波辅助提取30 min,得到黑果腺肋花楸原花青素的含量为19.76 mg·g~(-1)。通过实验,筛选出最适合对黑果腺肋花楸原花青素进行分离纯化的大孔树脂为DM130大孔树脂。对动态吸附解吸条件进行了优化,确定了对黑果腺肋花楸原花青素最佳的纯化工艺参数:上药量为6 BV,原花青素提取溶液质量浓度为1 mg~·mL~(-1),洗脱液采用4 BV 30%的乙醇溶液,上样流速和解吸流速均为2 mL·min~(-1)。利用HPLC-LTQ orbitrap液质联用技术分析了黑果腺肋花楸原花青素成分,实验表明,黑果腺肋花楸原花青素纯化物中含有儿茶素、表儿茶素以及多种二聚体与叁聚体等低聚原花青素,还有少量绿原酸类化合物。随着黑果腺肋花楸提取物中原花青素浓度的增加(1~100μg·mL~(-1)),其总抗氧化能力(FRAP法)随之增大,对·DPPH活性抑制率也逐渐升高。在对小鼠肝脏脂质过氧化反应的抑制活性实验中,对小鼠肝脏内脂质过氧化抑制率随着原花青素浓度的增加而增大。同时叁种黑果腺肋花楸原花青素纯化物在同浓度的情况下,纯度越高对小鼠肝脏内脂质过氧化抑制活性能力越强。因为黑果腺肋花楸口感不好,实验采用片剂和胶囊两种剂型进行了功能性食品的开发。使用黑果腺肋花楸冻干果粉配以适当的辅料制成黑果腺肋花楸咀嚼片。通过吸湿性实验、颗粒流动性实验、颗粒水分测定以及口感矫正筛选出最佳咀嚼片生产工艺:按果粉:淀粉:甘露醇:微晶纤维素:微粉硅胶=7:1.5:0.5:0.5:0.5的比例混匀。加入0.4%阿斯巴甜作为矫味剂,混合均匀。以95%乙醇制得软材,过2号筛网制粒,60℃烘箱中干燥2小时,整粒。再加入润滑剂硬脂酸镁(1%)与颗粒混匀后,调节压片机上冲和下冲的压力压片,保证片重为0.5 g左右。还对黑果腺肋花楸原花青素纯化物进行加工,搭以合适的辅料,制备成软胶囊,方便使用与携带。通过颗粒流动性与颗粒水分测定,筛选出最佳生产工艺:原花青素纯化物:甘露醇:微晶纤维素为10:1:4。60℃下干燥2小时,加入润滑剂硬脂酸镁(1%),与颗粒混匀后,使用胶囊填充板进行填充保证每粒胶囊中含有颗粒0.2 g,约含原花青素107 mg。(本文来源于《长春师范大学》期刊2019-06-01）
郭丹丹[2]（2019）在《红花黄酮类成分生物合成途径关键基因的特征和功能研究》一文中研究指出红花(Carthamin tictorius L.)是一种具有活血通经,散瘀止痛之功效的传统药用植物,入药部位为其干燥管状花。现代药理研究表明,它具有抗血栓、抗氧化、抗炎、抗过敏等作用,其主要的药效成分为黄酮醇类化合物(如山萘酚及其苷类,槲皮素及其苷类)以及特异性查尔酮化合物(如羟基红花黄色素A、Carthamin等)。迄今为止,模式植物中黄酮的生物合成途径已有很多的研究,普遍认为,其源于苯丙氨酸途径,通过查尔酮合成酶这一桥梁启动黄酮类成分的生物合成。但是关于红花中黄酮的生物合成途径,尤其是特有的活性查尔酮成分生物合成途径研究仍鲜有报道。基于本课题组前期构建的红花花冠转录组数据库以及Y品系(黄色花,富含HSYA)和W品系(白色花,不含HSYA)时序性差异表达图谱,我们筛选出在Y品系特异性高表达的266个差异基因,其中包含了参与红花生物合成途径的重要结构基因:查尔酮合成酶基因CHS、查尔酮异构酶基因CHI、黄酮苷末端修饰酶UGT和转录调控因子MYB等多个基因。首先,借助RACE克隆技术拼接出差异基因(CtCHS1、Ct CHI1、UGT)和转录因子(CtMyb13)全长。氨基酸序列同源性比对和系统进化树分析显示CtCHS1与其他家族的查尔酮合成酶具有87%的氨基酸相似度,CtCHI1与来自Saussurea medusa的CHI有高达92%的氨基酸相似度,后者的过表达可以显着提高水母雪莲毛状根中的芹菜素含量。为了验证基因的体外功能,我们运用异源表达技术,分离纯化出基因编码蛋白酶CtCHS1和CtCHI1,并对酶体外活性进行底物筛选和催化参数检测。体外实验结果表明CtCHS1具有典型的CHS活性,即催化3个丙二酰辅酶A和1个香豆酰辅酶A生成柚皮素,CtCHI1可以催化2,,4,,4,6,-羟基查尔酮异构化为柚皮素,从而证明CtCHS1和CtCHI1均是具有活性的催化蛋白酶。为了分析基因在植物体内的定位特征,将构建的重组瞬时表达载体pMT39-CtCHS1和pMT39-CtCHI1通过农杆菌GV3101介导侵染拟南芥原生质体和烟草进行瞬时表达,亚细胞定位分析结果显示pMT39-CtCHS1定位在细胞质,pMT39-CtCHI1定位在细胞核。构建35S启动的真核重组载体并融合GFP标签,通过花粉管通道法转化红花Y品系,实现红花植株水平的基因工程操作和新基因在蛋白水平的检测。和空载组比较,在mRNA水平上,过表达CtCHS1可以激活上游基因PAL2,PAL3,4CL2,CHS4和CHS6的表达,同时抑制4CL1,4CL3,4CL5,CHI2和DFR1的表达。在代谢水平上,CtCHS1过表达可以促使醌式查尔酮化合物HSYA和Carthamin分别上调19.83%和29.48%,黄酮醇类化合物呈现出与之完全相反的趋势,均呈现不同程度的下调,槲皮素,槲皮素-3-O-葡萄糖苷下调高达50~60%,山萘酚和芦丁也分别下降14.41%和24.89%,山萘酚-3-O-β-D葡萄糖苷下调17.06%,D-Phenylalanine下调39.51%。由此推测,CtCHS1可能参与正向调节醌式查尔酮化合物分支的含量积累,并抑制黄酮醇类分支化合物的生成。利用叶盘转化法我们获得了CtCHI1过表达烟草植株,CtCHI1过表达促进了上游基因NtC4H和Nt4CL表达。HPLC结果显示花青素苷元下降高达64.55%,槲皮素苷元在下降高达70%,山萘酚苷元则显着增加10%~20%。由此可以看出CtCHI1的过表达在烟草中对代谢产物的积累起了分流作用。在转基因红花中,CtCHI1过表达可以促进上游基因CtPAL3,CtC4H1和CtCHS1分别增长3.88,2.12和3.03倍,抑制下游基因CtF3H和CtDFR2的表达。为了评价CtCHI1过表达对转基因红花代谢组的影响,我们对转基因组和未转基因组的红花进行了PCA和PLS-DA分析,通过PCA分析,我们发现转基因组和未转基因组代谢组主成分可以得到有效分离。另外,监督PLS-DA在负离子模式下能得到很好的响应,可以分离出788差异性代谢产物。对次生代谢物进行UPLC-QTOF/MS定量分析表明,CtCHI1过表达可以显着提高HSYA和山萘酚-3-O-芸香糖苷,二氢山萘酚和芦丁的含量。在红花转录组数据库中,共有27个糖基转移酶UGT基因全长,基于时序性表达图谱分析,我们筛选出在两个品系的生长发育过程中具有显着差异的CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25。系统进化树分析显示CtUGT3和CtUGT16归类到广泛参与植物体内代谢进程的UGT71亚家族中。Ct UGT25与PoUGT具有很高的序列相似度,隶属于UGT90亚家族,主要参与黄酮类化合物的糖基化修饰。将CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25与已经报道的10个黄酮糖基转移酶基因进行多序列比对,结果显示这叁个UGT基因与黄酮糖基转移酶基因具有很高的同源性。由此可以预见,CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25可能也具有参与红花体内黄酮类化合物的糖基化修饰功能。运用WOLF PSORT亚细胞定位预测,我们发现CtUGT3和CtUGT16可能主要位于细胞质,CtUGT25可能主要位于叶绿体。Signal P4.1 Server分析证实这叁个蛋白均没有信号肽。这些结果显示CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25可能不具有蛋白转运功能,主要在细胞质和叶绿体中发挥蛋白酶催化功能。通过MeJA诱导实验,我们构建了“基因-化合物”在红花两个不同品系中时序性表达相关网络,结果表明CtUGT3和CtUGT25在Y品系红花中主要诱导山萘酚-3-O-葡萄糖苷黄酮醇的积累,在W品系中促进槲皮素-3-O-葡萄糖苷黄酮醇的生成,CtUGT16则广泛参与两个红花品系中槲皮素-3-O-葡萄糖苷的正向调控。另外,我们首次对红花MYB家族进行了系统的生物信息学分析,从转录祖数据库中共筛选出21个R2R3-MYB,利用multiple em for motif elicitation(MEME)和Simple Modular Architecture Research Tool(SMART)分析R2R3-MYB中10个motif所在位置及功能,结果显示motif 3和motif 6是保守DNA结合域,其他motif多为未知功能结构域。通过基因芯片和化合物时序性表达相关性分析发现,R2R3-MYB转录因子MYB13,MYB14与HSYA和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的积累呈正相关关系(∣r∣≥0.7),且MYB13与MYB14序列高度相似,在进化上具有近源关系。为了研究MYB调控的分子机制,我们构建了红花花冠次级酵母文库,通过Y2H共转法筛选出了与MYB13互作的7个蛋白:CtSDGL,CtEPGL,CtPHOX1L,CtB2L,CtASC1,CtMPL1,CtMPL2。更深入的研究正在进行中。综上所述,过表达CtCHS1和CtCHI1可以正反馈调控上游基因PAL,CHS的表达,并促进红花中醌式查尔酮类化合物的积累;但抑制了下游基因表达。Ct UGT3,CtUGT16和CtUGT25广泛参与红花体内黄酮醇类化合物的糖基化修饰。R2R3-MYB转录因子MYB13可能正向调控HSYA和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的积累。本研究结果为阐明红花黄酮类成分的生物合成途径提供了重要科学依据。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-30）
刘薇,王阿娜,万德光,裴瑾[3]（2015）在《桑叶功能基因表达水平与多酚类成分积累的关联分析》一文中研究指出目的对不同生长发育阶段桑叶的功能基因表达水平与多酚类成分的动态积累进行关联分析,寻找桑叶质量差异的分子机制。方法 HPLC法测定四川省成都市温江区4月至11月期间桑叶中绿原酸、芦丁和紫云英苷的含有量,然后实时荧光定量PCR法测定pal、chs和f3h 3种功能基因的表达量,计算其水平与多酚类成分含有量之间的相关性。结果芦丁、紫云英苷和绿原酸的含有量在6月达到峰值,而且与pal和f3h基因表达水平相关性明显,但与chs基因表达水平相关性较低。结论桑叶多酚类成分积累受pal和f3h基因调控作用较明显,说明这两个基因及其表达可用于研究桑叶品质差异的分子机制。(本文来源于《中成药》期刊2015年08期）
孙敏慧,张媛媛,许少华,寇俊萍,余伯阳[4]（2014）在《皂苷类成分对血管内皮细胞功能的调节作用研究进展》一文中研究指出血管内皮细胞在维持血管生理稳态中发挥了重要的作用,其功能障碍是动脉粥样硬化、冠心病、脑卒中、肿瘤等多种重大疾病发生发展的病理基础,调节血管内皮细胞功能是防治上述疾病的主要途径之一。大量研究表明,皂苷类成分可通过改善血管内皮功能达到治疗疾病的目的。综述了近年来报道的皂苷类成分调节血管内皮功能的研究进展,旨在为皂苷类成分作用机制的阐明和相关重大疾病的防治提供一定参考。(本文来源于《药学进展》期刊2014年06期）
刘洋,张学兰,李慧芬,隋晓辉,占方玲[5]（2014）在《荷叶不同饮片黄酮和生物碱类成分对兔体外凝血功能影响的比较》一文中研究指出目的研究比较荷叶生、炭饮片总黄酮、总生物碱及4种化合物对兔体外凝血功能的影响。方法以正常新西兰大耳白兔为实验对象,观察荷叶生、炭饮片总黄酮、总生物碱及金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素、荷叶碱对家兔血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原(FIB)水平的影响。结果与空白对照组比较,荷叶生、炭饮片总黄酮及金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素均可显着缩短PT和APTT,而荷叶碱、生荷叶总生物碱均可明显延长APTT和PT,但各组对FIB均无明显影响;荷叶炭总黄酮与生荷叶总黄酮比较,APTT、PT显着缩短;槲皮素与金丝桃苷和异槲皮苷比较,APTT、PT也显着缩短。结论黄酮类成分为荷叶生、炭饮片止血活性成分,槲皮素的止血活性强于金丝桃苷和异槲皮苷,荷叶碱、生荷叶总生物碱具有抗凝血活性。为阐明荷叶炭止血炮制机理及制订荷叶饮片的质量标准,提供了科学依据。(本文来源于《中成药》期刊2014年04期）
彭燕,谭晓斌,贾晓斌[6]（2013）在《甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响》一文中研究指出目的研究甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,探讨甘草解毒的作用机制。方法采用流式细胞仪检测经甘草黄酮类成分处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Western blotting法检测甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-gp表达的影响。结果与对照组相比,甘草总黄酮5、10、50、100μg/mL作用Caco-2细胞1 h后,使细胞内罗丹明123的荧光强度分别减少61.1%、56.3%、49.2%、45.4%;甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、芹糖基甘草苷、芹糖基异甘草苷在相同质量浓度,使细胞内罗丹明123的荧光强度减少了19.3%~37.9%。与对照组相比,甘草总黄酮10~400μg/mL给药后72 h,使Caco-2细胞膜上P-gp的表达显着增加(P<0.01);甘草苷、异甘草苷、甘草素、芹糖基甘草苷5~400μmol/L,异甘草素、芹糖基异甘草苷10~400μmol/L对此也有显着作用(P<0.01)。结论甘草黄酮类成分增强Caco-2细胞P-gp的功能,上调P-gp的表达,促进细胞内有毒物质的外排,减少有毒物质在肠道的吸收,这可能是甘草配伍其他中药的解毒机制之一。(本文来源于《中草药》期刊2013年19期）
张顺仓[7]（2013）在《丹参酚酸类成分生源合成调控相关基因的克隆与功能研究》一文中研究指出丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是我国传统大宗药材之一，为唇形科鼠尾草属多年生草本植物丹参的根，主要用于心脑血管疾病的治疗，在我国和一些其他亚洲国家都有分布。丹参的有效成分分为水溶性的酚酸类成分和脂溶性的丹参酮类成分两大类，酚酸类成分包括丹参素、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B等，脂溶性成分包括丹参酮I、丹参酮IIA、隐丹参酮和二氢丹参酮I等。由于水溶性成分的特性更符合我国传统中药用水煎服的用药特点，近年来受到了越来越多的关注。本研究以丹参无菌苗和丹参毛状根为材料，对丹参酚酸类成分的生源合成调控机制进行了部分探讨，具体研究内容如下；1.利用同源克隆的方法从丹参中获得了4个R2R3MYB转录因子的核苷酸序列，分别命名为SmMYB39（GenBank accession No.：KC771280）、SmMYB29（GenBank accession No.：KC213792）、SmMYB87（GenBank accession No.：KC771280）和SmMYB36（GenBank accession No.：JX997333）。对其基因组DNA进行分析，发现SmMYB39包含2个外显子和1个内含子，SmMYB29不包含内含子，SmMYB87包含3个外显子和2个内含子，SmMYB36包含3个外显子和2个内含子。4条核苷酸序列分别包含了一个693bp、321bp、732bp和960bp的开放阅读框，分别编码230、106、243和319个氨基酸。在4条氨基酸序列的N端分别找到了2个MYB重复区，说明它们均为R2R3MYB蛋白。2.利用Genome Walking技术克隆得到了SmMYB36一段1137bp的启动子序列， PlantCARE分析表明，TATA-box位于转录起始位点上游30bp处，符合真核生物TATA-box的位置特点。该序列包含多个CAAT-box，散布于整条序列，另外还包含了多个光响应元件，如ACE、AE-box、AT1-motif、Box4、Box I、G-Box、GT1-motif、 I-box、MRE、as-2-box和chs-CMA2a等，说明光照对该基因的表达可能有重要的影响。3.利用实时定量RT-PCR技术检测了获得的4个R2R3MYB基因在开花期丹参根、茎、叶和花中的转录水平，结果表明4个目的基因在根、茎、叶和花4个器官中均有表达。SmMYB39在茎中的表达量最高，在花和叶中的表达次之，在根中的表达明显低于其它器官；SmMYB29也是在茎中的表达最高，在花中的表达次之，在根中的表达最低，其在叶中的表达虽然高于根，却明显低于在茎和花中的表达量；SmMYB87除在根中的表达稍低以外，在其他叁个器官中的表达量差别不大；SmMYB36在根中的表达最低，在叶和花中的表达量几乎相同。4.构建绿色荧光蛋白融合表达载体，利用基因枪轰击洋葱表皮细胞，培养后在激光共聚焦显微镜下观察目的蛋白的亚细胞定位情况。结果在转化pTF-486空载体的洋葱表皮细胞中，绿色荧光蛋白散布于整个细胞中。在转化pTF-486-SmMYB39和pTF-486-SmMYB29的洋葱表皮细胞中，只在细胞核部位观察到了绿色荧光蛋白的分布。而在转化pTF-486-SmMYB87和pTF-486-SmMYB36的洋葱表皮细胞中，细胞核和细胞膜部位均观察到了绿色荧光。说明SmMYB39和SmMYB29定位于细胞核，而SmMYB87和SmMYB36除定位于细胞核外，还可能定位于细胞膜。5.构建获得的R2R3MYB基因的过表达和RNAi沉默表达载体，利用根癌农杆菌介导的植物转化体系获得过表达和RNAi沉默植株，研究目的基因在丹参酚酸类成分合成积累中的作用。结果发现SmMYB39的过表达显着（P<0.05）抑制了丹参中酚酸类成分的积累，而RNAi沉默则显着（P<0.05）提高了基因转化株系中酚酸类成分的含量，说明SmMYB39可以作为负调控因子参与丹参中迷迭香酸等酚酸类成分的生源合成。进一步的研究表明，SmMYB39可以作为转录抑制子调控迷迭香酸生源合成途径上C4H和TAT基因的转录，进而影响C4H和TAT的酶活性。6.克隆得到了3条丹参CHS基因保守片段，分别命名为SmCHS1（GenBankaccession No.： KF255832）、 SmCHS2（GenBankaccession No.： KF255833）和SmCHS3（GenBankaccession No.：KF255834）。构建CHS RNAi沉默表达载体，利用发根农杆菌ATCC15834获得转基因毛状根，并在获得的毛状根中添加水杨酸诱导子，研究CHS RNAi沉默和诱导子添加协同作用对丹参毛状根中酚酸类成分合成积累的影响。结果表明，CHS基因功能的缺失严重影响了丹参毛状根中黄酮类成分的合成积累，使代谢流向迷迭香酸生源合成途径上转移。水杨酸诱导子同样提高了丹参毛状根中酚酸类成分的含量，但CHS RNAi沉默和水杨酸诱导子协同作用更加高效地促进了丹参毛状根中酚酸类成分的合成积累，协同处理组中迷迭香酸和丹酚酸B的含量分别达到了未加任何处理的野生型毛状根中的3.89倍和4.26倍。7.利用酚酸类成分合成积累的“促进剂”茉莉酸甲酯和“抑制剂”真菌（Sclerotium rolfsii Sacc）菌丝提取物处理丹参毛状根，研究迷迭香酸生源途径两条平行支路上的关键酶对诱导子的不同响应。结果发现酪氨酸支路上的TAT和HPPR与酚酸类成分合成积累的变化呈现了更好的一致性。说明酪氨酸支路上两个关键酶与迷迭香酸及其衍生物的合成积累有更直接的关联，而苯丙氨酸支路上的关键酶可能由于参与多种苯丙烷类代谢物的合成过程，与迷迭香酸等酚酸类成分生源合成的关联不如酪氨酸支路上两个酶紧密。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2013-10-01）
邸鹏[8]（2012）在《丹参酚酸类成分生源途径的探索及相关基因的克隆与功能研究》一文中研究指出丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是我国传统中药，具有活血化瘀、通经活络之功效。现代医学研究发现以迷迭香酸（RA）和丹酚酸B（SAB）为代表的水溶性酚酸类成分被认为是丹参发挥药效的活性物质基础的重要部分，逐渐受到研究人员的关注。但目前对于丹参水溶性酚酸类生源途径的研究还刚刚起步，尤其是丹参中标志性酚酸类成分丹酚酸B的代谢途径还未见相关报道。同时对于丹参中已有报道的另一标志性成分迷迭香酸的生源途径研究还不够全面，其下游的关键酶基因SmRAS、SmCYP98A14并未有相关研究。因此针对这些问题的研究对于丹参中酚酸类资源的开发利用具有重要意义。本研究利用13C同位素标记前体饲喂的方法，对丹参酚酸类化合物尤其是丹酚酸Ｂ的生源途径进行了探索，并利用动态监测的方法对已报道的迷迭香酸的生源途径进行了重新评价。同时，克隆得到了酚酸类生源途径上的3个重要基因SmRAS、SmCYP98A14、SmCPR，并对这3个基因的功能进行了研究。我们得到了如下结果：1、首次通过同位素标记提出了迷迭香酸到丹参酚酸B可能的生物合成过程，两分子迷迭香酸经过催化生成丹酚酸E，丹酚酸E环合生成丹酚酸B。这是首次对丹参酚酸B的生源途径进行探索，为解决丹参酚酸类化合物生物合成的这一重要问题提供了有价值的信息。2、利用同位素标记动态监测的方法对迷迭香酸生源途径进行了重新评估。结果显示，丹参中迷迭香酸生物合成的主要以咖啡酰CoA和4-羟基苯乳酸生成咖啡酰-4-羟基本乳酸，而后在SmCYP98A14的催化下生成迷迭香酸为主，而非之前报道的4-香豆酰CoA与4-羟基苯乳酸反应生成4-香豆酰-3-4-羟基苯乳酸，而后在SmCYP98A14的催化下生成迷迭香酸。这个结论改变了我们之前对迷迭香酸生物合成过程的认识，对重新认识迷迭香酸生物合成有重要价值。3、在以上研究基础上，首次将迷迭香酸与丹酚酸Ｂ的生物合成的过程联系到一起，描述了从苯丙氨酸和酪氨酸开始经迷迭香酸最终生成丹酚酸B的整个过程，极大拓展了丹参酚酸类化合物的生源途径，帮助人们重新认识酚酸类化合物的生物合成过程。4、克隆得到了丹参酚酸类生源途径上的关键酶基因SmRAS（Genbank accessionNo. ADA60182）包含1489bp碱基，其中包括1284bp的开放阅读框（ORF）编码428个氨基酸、SmCYP98A14（Genbank accession No. HQ316179）包含1714bp碱基，其中包括1527bp的开放阅读框（ORF）编码508个氨基酸、SmCPR（Genbank accessionNo. FR693803），包含2771bp碱基，其中包括2118bp的开放阅读框（ORF）编码705个氨基酸。5、考察了这叁个基因在不同组织器官中的表达水平及诱导表的水平，结果发现这叁个基因在根茎叶中均有表达，SmRAS在茎中表达最高、SmCYP98A14在根中表达最高、SmCPR在叶中表达最高。诱导表达研究表明，这叁个基因均能被甲基茉莉酸（MeJA）及脱落酸（ABA）诱导表达上调。6、通过RNAi干扰研究验证了SmRAS及SmCYP98A14基因在酚酸类生物合成过程中的功能。RNAi干扰SmRAS及SmCYP98A14能够明显降低丹参毛状中迷迭香酸和丹酚酸B的含量。RNAi-SmRAS效果最显着株系中迷迭香酸和丹酚酸B的含量均低于CK的20%，RNAi-SmCYP98A14效果最显着株系中迷迭香酸和丹酚酸B的含量为于CK的30%。对这两个基因的RNAi均导致酚酸类合成途径上其它基因表达明显下调，以上结果证明了SmRAS及SmCYP98A14在迷迭香酸和丹酚酸B生源途径上的重要性。本研究采用的探索生源途径的方法也为其它探索生源途径的研究提供借鉴。本研究通过对酚酸类生源途径的探索及途径上关键酶基因的克隆研究，拓展了人们对酚酸类化合物生物合成的认识，帮助人们更加系统深入的理解酚酸类的生物合成机制，从而推动了丹参中酚酸类成分代谢工程研究。(本文来源于《第二军医大学》期刊2012-06-01）
李贝宁,周晓丽,黄璐琦,王学勇,刘春生[9]（2011）在《不同产地丹参功能基因表达水平对丹参酮类成分积累的影响》一文中研究指出目的:研究不同产地丹参功能基因表达水平与有效成分积累之间的关系,为揭示丹参药材质量差异的分子机制奠定基础。方法:采用HPLC测定不同产地丹参中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量;采用自己建立的实时荧光定量PCR方法,测定3个功能基因SmAACT,SmCMK,SmIPPI的表达量,探讨功能基因表达水平与丹参酮类成分含量之间的相关性,分析丹参质量差异可能的分子机制。结果:道地产区河南、山西产丹参中有效成分含量及SmAACT与SmCMK的表达水平相关系数相对较高,相关性明显,北京栽培丹参的这种相关性则较低。结论:SmAACT,SmCMK基因表达水平与丹参酮类成分积累具有一定相关性,而SmIPPI基因表达则对成分积累影响不大,说明丹参酮类成分的积累受上游途径SmAACT,SmCMK基因调控作用明显,SmAACT,SmCMK基因及其表达可作为丹参植物质量差异分析的分子靶标之一。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2011年24期）
李兰英,彭蕴茹,姚楠,张利,吴娟[10]（2009）在《陈皮多甲氧基黄酮类成分对荷瘤小鼠免疫功能的影响》一文中研究指出目的:探讨陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:制造小鼠荷瘤模型,采用巨噬细胞吞噬功能测定,血清溶血素生成试验,PHA诱导淋巴细胞转化试验和IL-2、TNF-α定量分析,观察CM对荷瘤小鼠非特异免疫、体液免疫、细胞免疫以及细胞因子的影响。结果:CM中、高剂量可提高荷瘤小鼠巨噬细胞的吞噬率以及吞噬指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬功能并可提高荷瘤小鼠的血清溶血素水平,2组间作用无显着性差异;CM低、中、高剂量可提高荷瘤小鼠PHA诱导淋巴细胞的转化率,3个剂量组的作用有明显的量效关系;CM低、中、高剂量组均可提高荷瘤小鼠IL-2以及TNF-α生成水平。结论:CM通过对小鼠的非特异性及特异性免疫应答,提高荷瘤小鼠的免疫功能。(本文来源于《江苏中医药》期刊2009年05期）
功能类成分论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
红花(Carthamin tictorius L.)是一种具有活血通经,散瘀止痛之功效的传统药用植物,入药部位为其干燥管状花。现代药理研究表明,它具有抗血栓、抗氧化、抗炎、抗过敏等作用,其主要的药效成分为黄酮醇类化合物(如山萘酚及其苷类,槲皮素及其苷类)以及特异性查尔酮化合物(如羟基红花黄色素A、Carthamin等)。迄今为止,模式植物中黄酮的生物合成途径已有很多的研究,普遍认为,其源于苯丙氨酸途径,通过查尔酮合成酶这一桥梁启动黄酮类成分的生物合成。但是关于红花中黄酮的生物合成途径,尤其是特有的活性查尔酮成分生物合成途径研究仍鲜有报道。基于本课题组前期构建的红花花冠转录组数据库以及Y品系(黄色花,富含HSYA)和W品系(白色花,不含HSYA)时序性差异表达图谱,我们筛选出在Y品系特异性高表达的266个差异基因,其中包含了参与红花生物合成途径的重要结构基因:查尔酮合成酶基因CHS、查尔酮异构酶基因CHI、黄酮苷末端修饰酶UGT和转录调控因子MYB等多个基因。首先,借助RACE克隆技术拼接出差异基因(CtCHS1、Ct CHI1、UGT)和转录因子(CtMyb13)全长。氨基酸序列同源性比对和系统进化树分析显示CtCHS1与其他家族的查尔酮合成酶具有87%的氨基酸相似度,CtCHI1与来自Saussurea medusa的CHI有高达92%的氨基酸相似度,后者的过表达可以显着提高水母雪莲毛状根中的芹菜素含量。为了验证基因的体外功能,我们运用异源表达技术,分离纯化出基因编码蛋白酶CtCHS1和CtCHI1,并对酶体外活性进行底物筛选和催化参数检测。体外实验结果表明CtCHS1具有典型的CHS活性,即催化3个丙二酰辅酶A和1个香豆酰辅酶A生成柚皮素,CtCHI1可以催化2,,4,,4,6,-羟基查尔酮异构化为柚皮素,从而证明CtCHS1和CtCHI1均是具有活性的催化蛋白酶。为了分析基因在植物体内的定位特征,将构建的重组瞬时表达载体pMT39-CtCHS1和pMT39-CtCHI1通过农杆菌GV3101介导侵染拟南芥原生质体和烟草进行瞬时表达,亚细胞定位分析结果显示pMT39-CtCHS1定位在细胞质,pMT39-CtCHI1定位在细胞核。构建35S启动的真核重组载体并融合GFP标签,通过花粉管通道法转化红花Y品系,实现红花植株水平的基因工程操作和新基因在蛋白水平的检测。和空载组比较,在mRNA水平上,过表达CtCHS1可以激活上游基因PAL2,PAL3,4CL2,CHS4和CHS6的表达,同时抑制4CL1,4CL3,4CL5,CHI2和DFR1的表达。在代谢水平上,CtCHS1过表达可以促使醌式查尔酮化合物HSYA和Carthamin分别上调19.83%和29.48%,黄酮醇类化合物呈现出与之完全相反的趋势,均呈现不同程度的下调,槲皮素,槲皮素-3-O-葡萄糖苷下调高达50~60%,山萘酚和芦丁也分别下降14.41%和24.89%,山萘酚-3-O-β-D葡萄糖苷下调17.06%,D-Phenylalanine下调39.51%。由此推测,CtCHS1可能参与正向调节醌式查尔酮化合物分支的含量积累,并抑制黄酮醇类分支化合物的生成。利用叶盘转化法我们获得了CtCHI1过表达烟草植株,CtCHI1过表达促进了上游基因NtC4H和Nt4CL表达。HPLC结果显示花青素苷元下降高达64.55%,槲皮素苷元在下降高达70%,山萘酚苷元则显着增加10%~20%。由此可以看出CtCHI1的过表达在烟草中对代谢产物的积累起了分流作用。在转基因红花中,CtCHI1过表达可以促进上游基因CtPAL3,CtC4H1和CtCHS1分别增长3.88,2.12和3.03倍,抑制下游基因CtF3H和CtDFR2的表达。为了评价CtCHI1过表达对转基因红花代谢组的影响,我们对转基因组和未转基因组的红花进行了PCA和PLS-DA分析,通过PCA分析,我们发现转基因组和未转基因组代谢组主成分可以得到有效分离。另外,监督PLS-DA在负离子模式下能得到很好的响应,可以分离出788差异性代谢产物。对次生代谢物进行UPLC-QTOF/MS定量分析表明,CtCHI1过表达可以显着提高HSYA和山萘酚-3-O-芸香糖苷,二氢山萘酚和芦丁的含量。在红花转录组数据库中,共有27个糖基转移酶UGT基因全长,基于时序性表达图谱分析,我们筛选出在两个品系的生长发育过程中具有显着差异的CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25。系统进化树分析显示CtUGT3和CtUGT16归类到广泛参与植物体内代谢进程的UGT71亚家族中。Ct UGT25与PoUGT具有很高的序列相似度,隶属于UGT90亚家族,主要参与黄酮类化合物的糖基化修饰。将CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25与已经报道的10个黄酮糖基转移酶基因进行多序列比对,结果显示这叁个UGT基因与黄酮糖基转移酶基因具有很高的同源性。由此可以预见,CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25可能也具有参与红花体内黄酮类化合物的糖基化修饰功能。运用WOLF PSORT亚细胞定位预测,我们发现CtUGT3和CtUGT16可能主要位于细胞质,CtUGT25可能主要位于叶绿体。Signal P4.1 Server分析证实这叁个蛋白均没有信号肽。这些结果显示CtUGT3,CtUGT16和CtUGT25可能不具有蛋白转运功能,主要在细胞质和叶绿体中发挥蛋白酶催化功能。通过MeJA诱导实验,我们构建了“基因-化合物”在红花两个不同品系中时序性表达相关网络,结果表明CtUGT3和CtUGT25在Y品系红花中主要诱导山萘酚-3-O-葡萄糖苷黄酮醇的积累,在W品系中促进槲皮素-3-O-葡萄糖苷黄酮醇的生成,CtUGT16则广泛参与两个红花品系中槲皮素-3-O-葡萄糖苷的正向调控。另外,我们首次对红花MYB家族进行了系统的生物信息学分析,从转录祖数据库中共筛选出21个R2R3-MYB,利用multiple em for motif elicitation(MEME)和Simple Modular Architecture Research Tool(SMART)分析R2R3-MYB中10个motif所在位置及功能,结果显示motif 3和motif 6是保守DNA结合域,其他motif多为未知功能结构域。通过基因芯片和化合物时序性表达相关性分析发现,R2R3-MYB转录因子MYB13,MYB14与HSYA和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的积累呈正相关关系(∣r∣≥0.7),且MYB13与MYB14序列高度相似,在进化上具有近源关系。为了研究MYB调控的分子机制,我们构建了红花花冠次级酵母文库,通过Y2H共转法筛选出了与MYB13互作的7个蛋白:CtSDGL,CtEPGL,CtPHOX1L,CtB2L,CtASC1,CtMPL1,CtMPL2。更深入的研究正在进行中。综上所述,过表达CtCHS1和CtCHI1可以正反馈调控上游基因PAL,CHS的表达,并促进红花中醌式查尔酮类化合物的积累;但抑制了下游基因表达。Ct UGT3,CtUGT16和CtUGT25广泛参与红花体内黄酮醇类化合物的糖基化修饰。R2R3-MYB转录因子MYB13可能正向调控HSYA和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的积累。本研究结果为阐明红花黄酮类成分的生物合成途径提供了重要科学依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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