一、流式细胞术快速检测急性胰腺炎核因子-κB激活的研究（论文文献综述）
孙亚梅,张杰[1]（2021）在《肝受体同系物1对大鼠急性胰腺炎细胞模型中腺泡细胞损伤修复的影响及其机制》文中认为目的探讨肝受体同系物1（NR5A2）对大鼠急性胰腺炎（AP）细胞模型中腺泡细胞损伤修复的影响及其机制。方法将大鼠胰腺腺泡细胞系AR42J细胞分为模型组和正常对照组,模型组予100 nmol/L雨蛙素刺激24 h构建体外AP模型,正常对照组予相同体积的磷酸盐缓冲液培养24 h。取对数生长期的AR42J细胞分为对照组、沉默NR5A2组（KD组）和对照慢病毒感染组（LV-control组）。KD组用慢病毒感染AR42J细胞,对照组不处理,LV-control组感染相同体积的对照慢病毒载体。慢病毒感染96 h后,对照组、KD组和LV-control组均予2%胎牛血清饥饿12 h,100 nmol/L雨蛙素刺激细胞24 h,分别设为正常模型组（CAE组）、沉默NR5A2+雨蛙素组（KC组）和对照慢病毒+雨蛙素组（LV-control+CAE组）。定量逆转录聚合酶链反应检测白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的m RNA表达量,比色法检测细胞淀粉酶的活性,蛋白质印迹法检测NR5A2和核因子κB P65的表达,细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。结果模型组IL-1β、IL-6、TNF-αm RNA及淀粉酶表达量均高于正常对照组（均P <0.001）,体外AP模型构建成功。模型组NR5A2 m RNA及蛋白表达量均低于正常对照组,核因子κB P65表达量高于正常对照组（均P <0.05）。慢病毒感染96 h后,KD组NR5A2 m RNA及蛋白表达量均低于对照组和LV-control组[（0.47±0.07）比（1.00±0.07）、（1.00±0.08）,（0.39±0.10）比（1.01±0.08）、（1.04±0.20）]（均P <0.05）。雨蛙素刺激24 h后,KC组IL-1β、IL-6、TNF-αm RNA及淀粉酶表达量均高于CAE组及LV-control+CAE组（均P <0.05）。KC组Ed U阳性百分比低于对照组、CAE组及LV-control+CAE组[（7.97±0.29）%比（71.70±1.64）%、（51.63±0.90）%、（45.37±1.31）%]（P <0.001）。KC组核因子κB P65表达量高于CAE组和LV-control+CAE组（P <0.001）。结论在体外AP细胞模型中,NR5A2的表达降低可以加重腺泡细胞的炎症反应,抑制腺泡细胞的增殖和再生,影响腺泡细胞的损伤修复,其机制可能与上调核因子κB的表达有关。
丁黎莉[2]（2021）在《白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究》文中研究说明研究背景与目的:急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是胰酶在体内异常激活所导致的局部或全身性炎症反应。促炎免疫与抗炎免疫系统失衡是促进疾病进展的重要机制。髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell,MDSC）是骨髓来源的调节性免疫细胞,可通过精氨酸酶（Arginase）-1、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、免疫抑制性受体（immune receptors,IRs）等机制发挥免疫抑制作用。含免疫球蛋白和ITIM基序的T细胞免疫受体（T cell immunoreceptor with Lg and ITIM domains,TIGIT）作为一种新型的IRs,对T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）的功能产生一定影响。但是TIGIT在AP中T细胞上表达的变化及其作用目前尚无报道。白介素（interleukin,IL）-37是新发现的抗炎因子,可通过诱导调节性免疫细胞表型转化等方式发挥抗炎作用。我们在预实验中发现AP患者血浆中IL-37升高。本研究通过分析AP患者体内MDSC、IL-37的变化,结合体外实验进一步阐释IL-37通过影响MDSC的抑制功能,影响AP的发生发展的作用及其机制,为AP的治疗提供新的思路。研究方法:（1）应用流式细胞分析法（flow cytometry,FCM）测定患者及健康对照组（healthy control,HC）中HLADR-CD11b+MDSC及其亚群CD66b+CD14-粒细胞样及CD66b-CD14+单核细胞样MDSC比例与数目,并分析与APACHE II评分、C-反应蛋白、住院天数（length of stay,LOS）的相关性。应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色测定T细胞增殖法分析HC来源与重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）来源的MDSC的抑制功能。应用FCM进一步分析及来源的Arg-1、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）及MDSC表面CD155的平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）表达有无差异。（2）应用FCM测定HC及AP患者外周血中CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞比例、数量。测定HC与来AP来源的CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞中的IFN-γ的比例及细胞表面TIGIT的差异。分析CD3+T细胞及其亚群细胞表面TIGIT表达与IFN-γ的表达、细胞增殖能力之间的关系。（3）应用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定HC、AP患者血浆IL-37浓度,并检测其与APACHE II评分、MDSC之间的相关性。体外分析IL-37处理组与未处理组的MDSC的比例、Arg-1、ROS及MDSC表面CD155的表达变化。将IL-37处理的与未处理的MDSC细胞分别与T细胞共培养,检测各孔细胞增殖率。将HC及SAP来源的MDSC与TIGIT+及TIGIT-细胞分别共培养,检测各组细胞的增殖率变化,揭示抑制细胞可能机制。研究结果:（1）AP患者外周血中MDSC细胞及其亚群G-MDSC、M-MDSC在外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中比例及绝对计数增加,且与APACHE II评分、C-反应蛋白正相关。SAP患者来源的MDSC对CD3+T细胞抑制作用增强。SAP来源的MDSC较HC组的Arg-1、ROS、CD155表达升高。（2）AP患者外周血中CD3+T细胞及其CD4+、CD8+亚群在PBMC中比例及数量减少,且各T细胞亚群IFN-γ分泌减少。AP患者外周血T细胞表面TIGIT表达比例较HC组降低。TIGIT+T细胞较TIGIT-T细胞IFN-γ分泌增多,细胞增殖能力增强。（3）AP患者血浆中IL-37浓度较HC升高,与MDSC呈负性相关。IL-37在体外不能诱导PBMC中细胞向MDSC转化,但是可以增强MDSC对T细胞的抑制作用。IL-37在体外降低MDSC的ROS、CD155的表达,对Arg-1表达强度无影响。阻断ROS降低MDSC表面CD155的表达。MDSC对TIGIT+T细胞具有抑制功能,而对TIGIT-T细胞无抑制功能。研究结论:本研究发现MDSC在AP患者体内增多,且MDSC抑制功能增强,且与疾病严重程度正相关,MDSC对T细胞的抑制作用可能是通过CD155/TIGIT途径实现的。AP患者外周血中IL-37因子升高,IL-37增强MDSC对T细胞的抑制作用,其增强作用机制尚不明确。本研究为探究AP的发病机制提供了新的思路,为阻止AP进展为SAP提供了新的理论依据。
张玉琳[3]（2021）在《热休克蛋白90α作为诊断脓毒症及其预后的新型生物标志物研究》文中指出目的:探讨脓毒症患者血清HSP90α（Heat Shock Protein 90 alpha,HSP90α）表达水平在诊断脓毒症及预后中的应用价值,并探索其潜在机制。方法:1、收集2019年9月至2020年9月于大理地区某三甲医院就诊的50例健康对照者、150例脓毒症患者的相关资料,记录研究对象姓名、性别、年龄、入院时间、基础疾病、感染部位、序贯性器官功能衰竭（SOFA）评分等一般资料,并进行统计学分析比较。2、根据28天随访的脓毒症患者预后情况,分成生存组（n=94）及死亡组（n=56）,实验室检查均收集患者入院48h内的外周静脉血液样本,并记录其血常规、肝肾功能、CRP、PCT、SOFA等指标,比较两组各指标之间的差异。3、脓毒症患者的HSP90α水平测定采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法,比较HSP90α在生存组和死亡组的表达差异。4、通过受试者工作曲线（Receiver Operating Characteristic curve,ROC）,评定各实验室指标对脓毒症患者诊断及预后判断的价值。5、随访脓毒症患者,以28天作为随访终点,用Kaplan‐Meier生存分析评估不同组别患者的生存情况。6、研究对象的细胞因子（IL‐1β、IL‐18）和趋化因子（MIP-3α、ENA-78）表达水平,采用流式细胞术测定。探讨细胞因子及趋化因子在生存组和死亡组的表达差异。7、通过受试者工作曲线（ROC）,评估细胞因子（IL-1β、IL-1）,趋化因子（MIP-3α、ENA-78）对脓毒症患者预后判断的价值,并同HSP90α进行比较。8、采用单变量Logistic回归分析评估脓毒症患者预后的独立危险因素。9、用Pearson相关性分析来分析HSP90α与SOFA评分、PCT、IL-1β、IL-18、MIP-3α、ENA-78的相关性。结果:1、脓毒症组患者白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、红细胞比容、血小板计数、HSP90α水平显着高于健康对照组,差异有统计学义（P<0.05）。2、死亡组降钙素原、SOFA评分、肌酐、尿素氮、HSP90α水平显着高于生存组,差异有统计学意义（P<0.05）。3、各指标中HSP90α对脓毒症的预后判断价值最佳,AUC面积最大,曲线下面积为0.84[95%CI（0.77—0.90）,P<0.001],诊断敏感度为98.2%,特异度为63.8%,生存分析表明HSP90α水平越高则脓毒症患者28天死亡率越高（P<0.05）。4、死亡组细胞因子IL‐1β、IL‐18,趋化因子MIP‐3α、ENA‐78水平显着高于生存组。5、细胞因子和趋化因子中IL‐18对脓毒症的预后判断价值最佳,AUC面积最大,曲线下面积为0.66[95%CI（0.57—0.73）,P=0.002],诊断敏感度为50.0%,特异度为83.0%。6、单变量Logistic回归分析提示SOFA评分、HSP90α、IL‐18是脓毒症预后的独立危险因素。7、相关性分析提示HSP90α水平与SOFA评分、IL‐1β、IL‐18、MIP‐3α水平均呈明显正相关。结论:1、HSP90α对脓毒症具有较好的诊断及预后判断价值,可作为脓毒症诊断及预后的新型生物标志物。2、根据ROC曲线可得到HSP90α的截断值为120 ng/m L,且HSP90α的表达水平高于该截断值的患者的预后较表达水平低于截断值的患者差,病死率高。3、细胞因子IL‐18对脓毒症的预后判断价值最佳,IL‐1β作为脓毒症预后因子无良好的效果。4、SOFA评分、HSP90α、IL‐18是脓毒症预后的独立危险因素。5、HSP90α与SOFA评分、PCT、IL‐18、IL‐1β、MIP-3α呈明显正相关。6、HSP90α在脓毒症中的作用机制可能与细胞因子风暴相关。
徐秋实[4]（2021）在《冷诱导RNA结含蛋白在重症急性胰腺炎相关性肺损伤发病机制中的作用及大黄素干预的实验研究》文中提出背景:随着世界范围内生活方式的广泛改变,致使肥胖和胆结石发生率日益增加,导致急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）的发病率呈逐年上升趋势。AP是临床上常见的腹部急症,其特点是起病急,进展快。临床上常将急性胰腺炎分为轻症急性胰腺炎（mild acute pancreatitis,MAP）和重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）,其中重症急性胰腺炎占20%左右。最新资料显示,SAP患者的病死率在13%～35%之间。而急性肺损伤（Acute Lung Injury,ALI）则是SAP最常见的早期并发症之一,ALI可进一步发展为危重的急性呼吸窘迫综合征（Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS）。入院1周内死亡的SAP患者中有60%死于呼吸功能衰竭,ARDS被认为是造成SAP患者死亡的主要原因之一。目前,国内、外学者将这种由急性胰腺炎所导致的肺损害称为急性胰腺炎相关性肺损伤（Acute Pancreatitis-Associated Acute Lung Injury,APALI）,虽然在APALI的发病机制和药物干预方面的相关研究越来越多,但近年来APALI的治疗效果仍无明显改善,死亡率仍然居高不下。因此,亟待深入探索APALI的发病机制及有效的治疗策略。细胞外冷诱导RNA结合蛋白（Extracellular cold inducible RNA-binding protein,e CIRP）是一种损伤相关分子模式（Damage-associated molecular pattern,DAMP）。在失血性休克或败血症患者中可检测到高水平的血清CIRP,其升高程度与死亡率呈正相关。在功能上,eCIRP可以激活NLRP3炎性小体,加剧炎症性疾病并导致组织损伤。NLRP3炎性小体是一个蛋白复合物,它可以直接与凋亡相关斑点样蛋白（Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）相互作用激活caspase-1,激活的caspase-1裂解活化gasdermin D（GSDMD）,pro-IL-1β和pro-IL-18,导致细胞焦亡和IL-1β以及IL-18的分泌。细胞焦亡是近年来发现的一种新的细胞死亡形式,与炎症有关,可导致疾病进程恶化。肺常驻巨噬细胞,如肺泡巨噬细胞活化产生剧烈炎症反应释放多种炎症介质是ALI/ARDS发病的关键因素。肺泡巨噬细胞焦亡可以通过产生炎性细胞因子IL-1β、IL-18等,加剧肺组织损伤。然而,对于eCIRP是否引能起肺泡巨噬细胞焦亡以及其是否参与APALI的发生发展过程,目前尚无报道,值得进一步探索。历经20余年的探索,本研究组在APALI的发病机制以及中西医结合治疗方案的基础与临床方面的研究证实,应用中西医结合方案治疗APALI,可明显缩短SAP病程,并降低病死率。因此,在SAP、APALI的诊疗方面,将现代医学与祖国传统医学相结合,优势互补,具有广阔的应用前景。经过多年的临床实践和实验研究,“肺与大肠相表里”理论得到充分阐释,并且经后世医家发展,成为中医学理论的重要组成部分之一。研究显示APALI的发生、发展可能与SAP时肠屏障功能发生障碍,肠内细菌和毒素易位后被吸收入血,循环至肺部有关。上述研究结果与中医脏腑相关理论中的“肺与大肠相表里”相关理论不谋而合,即“腑气不通,上逆于肺”,所以从治疗角度上要注重“从肠治肺”,故病变早期治法上以攻里通下为主,引肺气下行以止喘息。中医常用大黄以泻下攻积,清热泻火,故目前临床在中西医结合治疗急性胰腺炎方剂中都配伍中药大黄,而大黄素是大黄的主要活性成分之一。为探究大黄素在治疗APALI中可能的作用机理,本研究通过5%牛磺胆酸钠（Sodium Taurocholate,STC）逆行胰胆管注射法,应用SD大鼠建立APALI动物模型,利用现代生物学方法与技术,探究eCIRP在APALI发病机制中的病理潜在作用及大黄素的干预作用,以期进一步揭示APALI的发病机制并为中西医结合疗法防治APALI提供实验依据和新的治疗策略。目的:通过检测APALI大鼠模型CIRP的表达变化及拮抗CIRP对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的影响,以及应用重组大鼠CIRP刺激大鼠肺泡巨噬细胞并检测CIRP对该细胞的影响,以探索CIRP在APALI发病机制中的作用,同时应用大黄素进行干预性治疗的研究,探究大黄素治疗APALI的靶点,从而为治疗APALI寻找潜在靶点和应用大黄素治疗APALI提供理论依据。方法:第一部分:动物模型体内实验研究。将40只雄性SD（Sprague Dawley）大鼠,随机分为4组:假手术组（CON）,重症胰腺炎组（SAP）,C23（CIRP拮抗剂）干预组（C23）,大黄素干预组（EMO）。采用5%牛磺胆酸钠溶液（Sodium Taurocholate,STC）经胆胰管逆行注射（1ml/kg,0.1ml/min）诱导SAP大鼠模型,CON组大鼠经胆胰管逆行注入等体积无菌生理盐水。C23干预组于造模后2小时经尾静脉注入C23（8mg/kg）。大黄素干预组于术后2小时及术后12小时分别灌胃给予大黄素（40mg/kg）。造模24小时后,将各组大鼠麻醉后,开腹经腹主动脉采血,并收集胰腺及肺组织。进行HE染色观察胰腺及肺组织病理改变,并进行胰腺和肺组织病理评分来评价C23和大黄素对SAPALI的保护作用;酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清中CIRP、淀粉酶、IL-1β;应用全自动血气分析仪进行动脉血气分析测定;免疫组化染色观察胰腺和肺组织内CIRP表达情况及肺组织中Ly6G+细胞;采用qRT-PCR测定胰腺和肺组织中的CIRP mRNA水平及肺组织中的NLRP3、IL-1β和CXCL1的mRNA表达水平;以蛋白印迹（Western blot）法检测CIRP、p-P65、t-P65、p-IKBα、t-IKBα、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、CXCL1蛋白在各组大鼠中的表达;采用多重荧光染色观察胰岛中CIRP及肺内常驻巨噬细胞（F4/80+细胞）NLRP3和CXCL1的表达。第二部分:体外细胞学实验研究。以大鼠肺泡巨噬细胞珠NR8383细胞为研究对象,观察重组大鼠CIRP对肺泡巨噬细胞焦亡及炎症小体相关分子基因和蛋白表达的影响及大黄素的干预作用。实验一,NR8383细胞随机分为5组:对照组（Control）,重组CIRP处理组（CIRP）,TAK-242（一种TLR4受体特异性抑制剂）处理组（CIRP+TAK242）,C23处理组（CIRP+C23）,大黄素处理组（CIRP+EMO）。其中,对照组不予特殊处理,其余各组在采用重组大鼠CIRP（1.5μg/ml）处理NR8383细胞6h的同时,分别予应用TAK-242（500μM）预处理24h、应用C23（300ng/ml）预处理1h以及同时给予大黄素（20μM）干预。应用流式细胞术检测各组细胞的焦亡（Caspase-1以及PI双染）率。采用qRT-PCR测定各组细胞NLRP3、IL-1β和CXCL1的mRNA表达水平。采用Western blot法检测p-P65、t-P65、p-IKBα、t-IKBα、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、CXCL1蛋白在各组细胞中的表达。实验二,细胞分为Control组,CIRP组,CIRP+Si-IL-1β组和CIRP+NC（Negative control）组,应用NC siRNA或IL-1β特异性siRNA,在Lipofectamine 2000的介导下转染NR8383细胞48h后,用1.5μg/ml的CIRP处理CIRP组、NC组及Si-IL-1β组6h。此外,分别用不同浓度（0、1 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml）的重组大鼠IL-1β和应用10 ng/ml的IL-1β,以不同的时间点（0、6、12、24h）处理NR8383细胞,然后收集细胞,提取蛋白和RNA,采用q RT-PCR法和Western blot法研究IL-1β在CIRP诱导CXCl1表达中的作用。结果:第一部分,动物模型实验结果:（1）与CON组相比,SAP组大鼠胰腺及肺组织显示出明显的病理损伤,病理评分显着性增高（p<0.001）。此外,与CON组相比,SAP组大鼠血清CIRP、淀粉酶、IL-1β均明显升高（p<0.001）,且SAP组动脉血PaO2水平明显下降（p<0.001）,与此同时该组动脉血PaCO2水平明显上升（p<0.001）。与SAP组相比,C23组及EMO组胰腺及肺组织损伤明显缓解（p<0.001）,血清CIRP、淀粉酶、IL-1β均明显下降（p<0.001）,以及动脉血PaO2水平明显上升（p<0.001）而PaCO2水平明显下降（p<0.001）。（2）通过免疫组化、免疫荧光、qRT-PCR以及Western blot检测发现,与CON组相比,SAP组大鼠胰腺（主要位于胰岛）及肺组织CIRP表达明显增加（p<0.001）。与CON组相比,SAP组大鼠肺内p-P65、p-IKBα、NLRP3、ASC（Monomer,Dimer,Polymer）、Caspase-1 p20、GSDMD-N、IL-1β（pro-IL-1β以及p17）、CXCL1表达明显增高（p<0.001）,且SAP组大鼠肺组织内中性粒细胞（Ly6G+细胞）的浸润明显增加。（3）与SAP组相比,C23组及EMO组胰岛及肺组织CIRP表达明显被抑制,且伴随着肺内p-P65、p-IKBα、NLRP3、ASC（Monomer,Dimer,Polymer）、Caspase-1 p20、GSDMD-N、IL-1β（pro-IL-1β以及p17）、CXCL1表达的下降（p<0.05）及肺内Ly6G+细胞的浸润的明显减少。第二部分,体外细胞学实验结果。（1）用CIRP（1.5μg/ml）诱导了NR8383细胞内p-IKBα和p-P65及NLRP3、ASC（Monomer,Dimer,Polymer）、Caspase-1 p20、GSDMD-N、IL-1β（pro-IL-1β以及p17）蛋白的表达增高（p<0.001）,并进一步促进了NR8383细胞的焦亡（p<0.001）,同时还促进了其表达CXCL1（p<0.001）。TLR4受体抑制剂TAK-242几乎完全地抑制了CIRP所致的上述细胞效应（p<0.001）。结果表明,CIRP通过TLR4受体介导的NF-κB信号及NLRP3炎症小体的激活诱导NR8383细胞焦亡。CIRP拮抗剂C23和大黄素均显示出能够显着性抑制CIRP所致的NR8383细胞内NF-κB的活化、NLRP3炎症小体及组装与激活、细胞焦亡及CXCL1的表达,差异有统计学意义（p<0.05）。（2）CIRP对NR8383细胞表达CXCL1的影响。结果显示,与Control组相比,CIRP组的CXCL1表达明显增高（p<0.001）。而与CIRP组相比,CIRP+Si-IL-1β组的CXCL1表达水平显着性下降（p<0.001）,CIRP+NC（Negative control）组的CXCL1表达水平则无明显改变（p>0.05）。结果表明,IL-1β是CIRP促进NR8383细胞表达CXCL1的关键介质。分别用不同浓度（0、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml）的重组大鼠IL-1β和以相同浓度的IL-1β（10ng/ml）以不同的时间点（0、6、12、24h）刺激NR8383细胞,结果显示,IL-1β以剂量依赖性的方式和时间依赖性的方式促进NR8383细胞表达CXCL1。结论:（1）采用5%牛磺胆酸钠溶液经胆胰管逆行注射制备SAP肺损伤模型24h后,模型组大鼠血清淀粉酶含量的显着升高,胰腺和肺组织出现了明显的病理损伤,同时动脉血气分析结果也显示大鼠出现明显的呼吸功能障碍,表明SAP诱发肺损伤模型制备成功。（2）CIRP在APALI大鼠模型的胰岛及肺组织中表达增高,并伴有血清CIRP水平的升高。应用CIRP拮抗剂C23后,CIRP在胰岛、肺组织中表达下调且血清中CIRP水平下降,并明显缓解了ALI,提示CIRP与APALI发生发展密切相关。CIRP拮抗剂C23能抑制APALI大鼠肺组织中NF-κB的激活、NLRP3炎症小体的组装与活化、肺组织中CXCL1的表达及中性粒细胞的浸润,并缓解了SAP时的肺损伤。（3）CIRP可能通过TLR4受体介导激活大鼠肺泡巨噬细胞的NF-κB信号及NLRP3/IL-1β/CXCL1信号通路,在APALI中发挥重要作用。（4）大黄素能能显着降低APALI大鼠的血清淀粉酶、CIRP和IL-1β水平,能明显减轻SAP大鼠胰腺和肺组织的病理损伤,并能够改善肺功能,显示出对APALI具有较好的治疗作用。（5）大黄素可能通过抑制CIRP-TLR4介导的NF-κB和NLRP3/IL-1β/CXCL1信号通路减少中性粒细胞向肺内浸润从而发挥其治疗APALI的药理作用。
梁婧[5]（2021）在《雷公藤种子提取物Tws抑制NFκB信号通路影响巨噬细胞体外抗炎活性研究》文中认为目的 探讨雷公藤种子提取物Tws通过调控核因子-κB（NFκB）信号对巨噬细胞体外抗炎活性作用的研究。方法 将正常培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7作为对照组;同期培养的该细胞予以100ng/m L的LPS处理6小时作为模型组;实验组分别再予以15,30,60μmol/L的低、中、高剂量雷公藤种子提取物Tws培养。Tws处理12小时后,分别使用逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测一氧化氮合酶（iNOS）,白细胞介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达水平,用酶联免疫吸附试剂盒检测TNF-α,IL-1β和白细胞介素-6（IL-6）分泌水平,用Western Blotting法检测NF-κB p65蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）含量。结果 qRT-PCR检测对照组、模型组、低、中、高剂量实验组诱导型一氧化氮合酶i NOS的m RNA相对表达量分别为（1.00±0.05）,（8.57±0.59）,（6.86±0.62）,（4.73±0.69）和（3.66±0.19）;IL-1β表达量分别为（1.00±0.11）,（294.62±8.15）,（228.79±6.09）,（182.13±4.18）和（146.71±6.63）;TNF-α表达量分别为（17.59±6.97）,（931.19±32.44）,（641.10±16.22）,（534.38±11.64）和（389.26±15.79）;ELISA检测TNF-α的分泌水平分别为（17.59±6.97）,（931.19±32.44）,（641.10±16.22）,（534.38±11.64）和（389.26±15.79）;IL-1β分泌水平分别为（12.96±5.88）,（1637.25±32.07）,（1363.11±30.55）,（1100.36±12.14）和（848.53±24.61）;IL-6分泌水平分别为（6.31±3.59）,（398.71±14.02）,（310.36±7.74）,（251.00±14.46）和（206.74±10.09）;NFκB磷酸化相对水平分别为（0.411）,（1.399）,（1.041）,（0.423）和（0.500）;活性氧（ROS）产生率分别为（0.23±0.00）%,（1.00±0.02）%,（0.84±0.01）%,（0.73±0.01）%,（0.57±0.01）%。结果表明,模型组与对照组比较,低、中、高剂量实验组分别与模型组比较,i NOS,TNF-α,IL-1β的m RNA表达水平,细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6分泌水平,磷酸化NFκB蛋白水平,胞内活性氧产生水平均有显着差异,且均有统计学意义（P<0.05）。结论 雷公藤种子提取物通过抑制NFκB信号通路能够影响巨噬细胞的体外抗炎活性。
梁运轩[6]（2020）在《急性胰腺炎患者HMGB1的表达及其对淋巴细胞自噬、凋亡的作用研究》文中研究表明目的:初步探讨急性胰腺炎（Acute Pancreatitis,AP）患者外周血HMGB1的表达及其对淋巴细胞自噬、凋亡的作用。方法:收集AP患者76例,其中轻症急性胰腺炎（Mild Acute Pancreatitis,MAP）28例,中度重症急性胰腺（Moderately Severe Acute Pancreatitis,MSAP）25例,重症急性胰腺炎（Severe Acute Pancreatitis,SAP）23例,选择同期健康志愿者25例作为对照组。RT-q PCR法检测AP患者外周血高迁移率族蛋白B1（Highmobility group protein B1,HMGB1）、微管相关蛋白1轻链3-II（Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3-II,LC3-II）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Cysteinylaspartate Specific Proteinase,Caspase-3）m RNA表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测AP患者血清HMGB-1、LC3-II、Caspase-3蛋白水平;流式细胞术检测AP患者外周血淋巴细胞自噬率、凋亡率。结果:（1）SAP患者外周血HMGB1 m RNA及其血清蛋白水平较对照组、MAP组及MSAP组升高（P<0.05）;MSAP组外周血HMGB1 m RNA及其血清蛋白水平较对照组及MAP组升高（P<0.05）;MAP组外周血HMGB1 m RNA及其血清蛋白水平较对照组升高（P<0.05）。（2）SAP组患者外周血Caspase-3、LC3-II m RNA及其血清蛋白水平较对照组、MAP组及MSAP组升高（P<0.05）;MSAP组外周血Caspase-3、LC3-II m RNA及其血清蛋白水平较对照组及MAP组升高（P<0.05）;MAP组外周血Caspase-3、LC3-II m RNA及其血清蛋白水平较对照组仅轻度升高（P>0.05）,统计学上差异不显着。（3）SAP组外周血淋巴细胞自噬率、凋亡率较对照组、MAP组及MSAP组升高（P<0.05）;MSAP组外周血淋巴细胞自噬率、凋亡率较对照组及MAP组升高（P<0.05）;MAP组外周血淋巴细胞自噬率、凋亡率较对照组仅轻度升高（P>0.05）,统计学上差异不显着。（4）SAP组、MSAP组血清HMGB1蛋白水平与淋巴细胞自噬率、凋亡率呈正相关（P<0.05）,随着HMGB1水平升高,淋巴细胞自噬率、凋亡率增加;SAP组、MSAP组血清HMGB1水平与LC3-II、Caspase-3水平呈正相关（P<0.05）,随着HMGB1水平升高,LC3-II、Caspase-3水平升高。结论:1.AP尤其是SAP患者HMGB1表达水平明显升高,淋巴细胞自噬及凋亡增加。2.HMGB1高表达,使自噬相关基因LC3-II及凋亡相关基因Caspase-3的表达水平上调,可能是AP患者外周血淋巴细胞自噬、凋亡增加的重要原因。
刘剑[7]（2020）在《虎杖提取物白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞生长及NF-κB P65表达影响的研究》文中研究表明目的:研究虎杖提取物白藜芦醇（Resveratrol,Res）对人肺腺癌A549细胞生长及核因子-κB（Nuclear Factor kappa-B,NF-κB）P65表达的影响。方法:取体外培养的人肺腺癌A549细胞,分别加入0umol/L、30umol/L、50umol/L、100umol/L的白藜芦醇干预24小时和48小时,使用细胞计数试剂盒-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）测定A549细胞的增殖;选用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测白藜芦醇对A549细胞NF-κB P65 m RNA表达的影响;采用流式细胞仪分析A549细胞的细胞周期及凋亡;用蛋白免疫印迹（Western blot）检测A549细胞NF-κB P65蛋白的表达水平。结果:CCK-8试验结果显示:人肺腺癌A549细胞的增殖率能够被白藜芦醇降低,而且这种作用会随着时间及浓度的增加而变得越强。上述不同浓度的白藜芦醇作用人肺腺癌A549细胞48小时后,RT-PCR结果显示白藜芦醇可以下调NF-κB P65 m RNA的表达,且随着白藜芦醇的浓度增加（30umol/L、50umol/L、100umol/L）,NF-κB P65 m RNA的相对表达量就越低。通过Western blot试验,我们发现用不同浓度白藜芦醇处理人肺腺癌A549细胞后其NF-κB P65蛋白的表达显着降低。经过不同浓度的白藜芦醇作用人肺腺癌A549细胞48小时后,通过流式细胞仪检测显示,随着白藜芦醇浓度的增加,人肺腺癌A549细胞中G0-G1期的百分比明显增加,降低了S期的百分比,阻滞了细胞周期,同时促进了人肺腺癌A549细胞的早期和晚期的凋亡率。结论:1.白藜芦醇可以通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡降低人肺腺癌A549细胞的增殖,同时下调人肺腺癌A549细胞中NF-κB P65的表达;2.白藜芦醇可能通过下调NF-κB P65抑制肺腺癌的进展。
郭洪雷[8]（2020）在《Pirfenidone和Fraxinellone对实验小鼠慢性胰腺炎的疗效及分子机制研究》文中研究表明慢性胰腺炎（Chronic pancreatitis,CP）是由各种因素引起的一种胰腺组织慢性炎症-纤维化性疾病,其病理特征为腺泡萎缩、腺泡导管化生、炎细胞浸润、间质纤维化、胰管扩张/扭曲/狭窄和组织钙化。CP患者的主要临床表现为腹痛可伴腰背痛、脂肪泻、血糖升高和营养不良。小部分CP患者甚至可进展成胰腺癌,缩短了预期寿命。临床上治疗CP的主要手段为胰酶替代、体外震波碎石、内镜和外科手术。但是,尚无有效的药物可以逆转胰腺组织的慢性炎症及纤维化进程。因此,迫切需要研究CP的发病机制并寻找有效的治疗药物。胰腺纤维化是CP的重要病理特征之一。胰腺星状细胞（Pancreatic stellate cells,PSCs）在组织纤维化过程中发挥了关键作用。胰腺组织损伤所致的炎症反应激活了PSCs,PSCs活化后分泌大量的细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）,ECM沉积在组织间质内引起纤维化,最终导致了胰腺内外分泌功能的减退。此外,慢性炎症反应保证了PSCs的持续激活,加速了组织纤维化。巨噬细胞在慢性炎症反应中发挥了关键作用,不同功能类型的巨噬细胞均促进了CP的发展。吡非尼酮（Pirfenidone,PFD）是一种具有广谱抗纤维化作用的药物,已被FDA批准用于治疗特发性肺纤维化患者。梣酮（Fraxinellone,Frx）是从中草药中提取出来的一种多效性天然产物,具有抗炎、抑制肿瘤等作用。本研究将通过小鼠模型和体外细胞实验来探索PFD和Frx对CP的疗效及其分子作用机制,旨在为CP的临床药物治疗提供实验基础。本研究在C57BL/6雄性小鼠体内反复腹腔注射雨蛙素6周造CP模型,对照组小鼠体内反复腹腔注射生理盐水。治疗药物PFD或Frx从CP造模的第4周开始灌胃,持续约4周。每周监测各组小鼠的体重变化,可见单纯雨蛙素造模组小鼠的体重比对照组小鼠明显下降,而PFD或Frx治疗组小鼠的体重比单纯雨蛙素组小鼠显着增加,这说明PFD和Frx可以改善CP小鼠的体重变化,改善营养状况。小鼠处死后将胰腺组织进行石蜡包埋,切片进行H&E染色、Sirius red染色、Masson’s trichrome染色和IHC染色以评估CP的严重程度。单纯雨蛙素造模组小鼠的胰腺组织切片染色结果显示腺泡萎缩、炎细胞浸润、腺泡导管化生和纤维化形成,而对照组小鼠的胰腺切片染色结果显示正常的组织结构。PFD或Frx治疗组小鼠的胰腺切片染色结果显示组织损害程度明显减轻,CP病理学评分有所改善。此外,本研究提取了小鼠胰腺组织的RNA,进行RT-PCR和q PCR实验,分析了目的基因的转录表达情况。与对照组相比,单纯雨蛙素造模组小鼠胰腺组织内纤维化相关基因（αSMA、FN、Col1α1、TGFβ）和炎症相关基因（F4/80、CD68、TNFα、IL-6、CCL2）的转录表达明显增加,而PFD或Frx治疗可以减少纤维化和炎症相关基因的表达,这为体内实验PFD或Frx的疗效提供了一种解释机制。为进一步探索PFD和Frx的分子作用机制,本研究将进行大量体外实验,主要针对在CP发生发展过程中发挥关键作用的PSCs和巨噬细胞。首先分析PFD或Frx对PSCs活化及ECM合成的影响。本研究通过q PCR实验分析了PSCs活化marker（αSMA）及ECM（FN、Col1α1）的转录表达,并检测纤维化相关细胞因子CTGF和基质金属蛋白酶（MMP2/9）及其抑制剂（TIMP1/2）的转录表达。WB和IF实验分析了fibronectin、collagen和CTGF的蛋白表达。上述实验结果证明PFD和Frx能够抑制PSCs的激活和ECM的合成。为进一步解析PFD抑制PSCs活化的分子机制,本研究进行PSCs的转录组测序分析,找到了药物处理组和对照组之间的差异表达基因并推测出4条细胞信号转导通路与PFD的作用密切相关。随后通过q PCR、WB和IF实验分析了TGF-β/Smad信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、JAK/STAT信号通路和Hippo信号通路中的关键组分的表达情况。实验结果显示PFD减少了转录因子Smad2/3的磷酸化,降低了LRP6和GSK3β的磷酸化水平,减少了activeβ-catenin的表达,并下调了靶基因CCND1、c-Myc和LEF1的表达。此外,PFD还能够减少转录因子STAT3的磷酸化,而对YAP的磷酸化无明显影响。上述结果证明PFD通过TGF-β/Smad、Wnt/β-catenin和JAK/STAT信号通路抑制了PSCs活化与ECM的合成。除了影响PSCs的激活,PFD还可以抑制PSCs的迁移,被细胞划痕实验和Transwell迁移实验所证实。此外,流式细胞实验结果还显示PFD可以增加PSCs的凋亡。对于Frx抑制PSCs活化的分子机制,本研究主要分析了MAPK和GSK3β/β-catenin信号通路。WB实验证明Frx可以降低p38 MAPK和GSK3β的磷酸化水平,减少activeβ-catenin及基因CCND1、c-Myc和LEF1的表达。因此推测Frx通过p38 MAPK/GSK3β/β-catenin信号通路抑制了PSCs活化与ECM的合成。巨噬细胞在胰腺慢性炎症中发挥着关键作用。本研究将进行体外实验分析PFD和Frx对巨噬细胞功能的影响。用LPS刺激巨噬细胞使其发生M1型极化,发挥促炎功能。用IL-4/IL-13刺激巨噬细胞使其发生M2型极化,发挥促纤维化功能。用PFD或Frx分别处理不同功能类型的巨噬细胞。由q PCR实验可知PFD下调了基因i NOS、TNFα和IL-1β的转录表达而没有影响基因CD206、CD301和Arg1。由WB实验可知PFD减少了CD86、i NOS、TNFα和IL-1β的蛋白表达而没有影响CD206、IL-4R、Arg1和TGFβ。此外,WB和IF实验结果显示PFD降低了STAT3的磷酸化水平而没有影响STAT1、IκBα和p65的磷酸化。因此说明PFD抑制巨噬细胞M1型极化,通过STAT3信号发挥抗炎功能,而没有影响巨噬细胞M2型极化。关于Frx对巨噬细胞功能的研究,首先进行了巨噬细胞的转录组测序分析,找到了药物处理组和对照组之间的差异表达基因,推测Frx既影响了巨噬细胞M1型极化,又影响了M2型极化。随后的q PCR和WB实验结果显示Frx下调了M1型、M2型极化相关的基因表达。WB结果还显示Frx可以抑制LPS刺激升高的IκBα和p65的磷酸化水平,而且可以抑制IL-4/IL-13刺激增加的IL-4R的表达。因此证明Frx通过NFκB信号通路抑制巨噬细胞的促炎功能,通过减少IL-4R抑制巨噬细胞的促纤维化功能。此外,用PSCs的上清液刺激巨噬细胞可使其发生M2型极化。q PCR结果显示Frx可以减少PSCs分泌趋化因子CCL2的表达,并下调了巨噬细胞分泌促纤维化因子TGFβ和PDGF的表达,而且可以拮抗PSCs上清液的作用。因此说明Frx还影响了PSCs与巨噬细胞之间的交互作用。综上所述,PFD和Frx可以缓解雨蛙素诱导的小鼠CP,抑制PSCs活化及ECM的合成,并减轻巨噬细胞的促炎促纤维化作用,有希望作为临床药物治疗CP。
谢雪[9]（2020）在《普鲁士蓝纳米粒抑制炎症/清除活性氧及相关机制研究》文中研究表明目的:炎症（Inflammation）和过量活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的产生在多种疾病的发生和发展中起着关键作用。本论文主要探究生物相容性、生物安全性好的普鲁士蓝纳米粒（Prussian Blue Nanoparticles,PB）在抑制炎症/清除活性氧中的应用及相关机制研究。主要分两个工作展开:1)普鲁士蓝纳米粒在急性胰腺炎中的治疗及其机制研究;2)普鲁士蓝纳米粒自协同效应:高效光热治疗肿瘤并减轻光热治疗的副作用（光热治疗诱导的炎症和活性氧）。方法:1)通过PVP修饰法制备普鲁士蓝纳米粒。通过透射电镜（TEM）、紫外-可见光-近红外（UV-vis-NIR）等体外表征手段验证其体外物化特性并检测其体外清除ROS的催化性能。通过细胞毒性试验评价PB的生物安全性,并在细胞水平上验证PB抑制炎症、清除ROS的效果。通过体内血清检测、H&E染色病理组织评分、TUNEL荧光染色、PCR ARRAY和基因热图、KEGG分析评价了PB治疗急性胰腺炎的疗效以及进行了机制通路分析。2)通过优化材料配比制备成分单一、生物相容性好的普鲁士蓝纳米粒。通过对材料进行体外表征证明PB的成功制备。使用808nm近红外激光器、红外热成像探究PB的光热升温效果;使用电子自旋共振（ESR）检测PB对ROS的清除能力。细胞水平验证PB抑制炎症、清除ROS的能力。通过激光共聚焦显微镜观察PB对乳腺癌细胞吞噬材料PB的过程和光热杀死乳腺癌细胞的效果。活体血清生化、血常规,肝、脾免疫细胞检测,TUNEL染色检测PB在体内的生物安全性。动物实验中,通过构建乳腺癌小鼠皮下瘤模型,并比较不同实验组光热治疗小鼠乳腺癌的治疗效果;检测血清炎症因子、肿瘤组织周边ROS水平评价光热治疗肿瘤同时减轻光热治疗的副作用（光热消融肿瘤刺激诱导肿瘤周围产生炎症和ROS）。同时,通过超声、超声造影、光声成像技术,红外热成像、激光共聚焦显像等评价了PB在乳腺癌光热治疗中疗效。并通过血清检测、H&E评价、Ki-67抗原免疫荧光染色、肿瘤体积治疗前后监测来综合评定PB高效光热治疗肿瘤并减轻光热治疗副作用,自协同高效治疗乳腺癌。结果:普鲁士蓝纳米粒成功制备,TEM下为类椭圆型结构,材料分散均一,粒径大约为110 nm。UV-vis-NIR光谱分析PB在近红外区域具有很强的吸收峰,保证了PB优异的光热转化效率。体外催化实验证明了PB能高效清除ROS。细胞水平验证了PB能抑制炎症因子的释放和具有清除ROS的能力。体内实验中,PB在急性胰腺炎体内治疗时表现出较强的抗氧化和抗炎作用,可降低氧化应激,减轻炎症反应。PB对AP的治疗作用可能与抑制Toll样受体/核因子NF-κB信号通路和清除活性氧有关。在乳腺癌动物模型中,PB能高效光热杀死肿瘤,同时抑制光热过程诱导的炎症和清除过量ROS的产生,发挥“光热-抗炎”和“光热-抗ROS”的自协同效应,协同治疗肿瘤。结论:具有高效抑制炎症/清除活性氧的普鲁士蓝纳米粒通过抑制Toll样受体/核因子NF-κB的炎症、ROS信号通路治疗急性胰腺炎。普鲁士蓝纳米粒光热转化效率高,能光热治疗肿瘤同时减轻光热治疗过程中诱导的炎症和过量ROS,从而高效杀死肿瘤。
程向炜[10]（2020）在《星孢菌素类似物7-oxostaurosporine抗肿瘤作用及机制研究》文中研究说明胰腺癌,被称为癌症之王,是恶性程度极高的消化道肿瘤,5年整体生存率只有9.3%。靶向分子治疗日益成为了癌症治疗的研究热点,而胰腺癌的发病机制复杂,目前尚无有效的可用于临床的靶向抑制剂。寻找新的诊疗靶点是当前胰腺癌研究的重点。我们前期从海洋微生物中分离鉴定化合物和抗肿瘤活性研究中发现了一种具有显着抗肿瘤活性的化合物7-oxostaurosporine（33C）,属于星孢菌素类化合物,星孢菌素类化合物是很好的PKC抑制剂,迄今尚未见该活性成分抗肿瘤作用的相关研究报道。本文对33C体内外抗胰腺癌效应和作用机制进行了系统的研究。结果表明,33C在体内外具有良好的抗肿瘤效果,且毒副作用较小;33C通过抑制PKC-NF-κB信号通路,从而显着诱导人胰腺癌细胞凋亡;同时活化的PKCδ和P65在胰腺癌病人的瘤块组织中、细胞浆和细胞核中均高表达,并与病人的预后负相关。主要研究内容与结果如下:1.运用硅胶柱色谱法、凝胶柱色谱法和高效液相色谱法等现代分离纯化方法从海洋放线菌Streptomyces sp.NB-A13的固体发酵产物中提取了7-oxostaurosporine（33C）,并采用核磁共振等技术对其结构进行了鉴定。2.用Cell Counting Kit-8试剂盒检测不同浓度的33C作用胰腺癌、肺癌和结肠癌等肿瘤细胞24h后,测定细胞的存活率。结果显示,在处理浓度为3.2μM,对胰腺癌和肺癌细胞株的抑制率均在90%左右,并且在33C处理浓度降低时,其对肿瘤细胞的抑制率也随之下降,呈现一定的浓度依赖性关系。通过计算33C对各个肿瘤细胞的IC50在18～3.2μM范围之内。3.建立小鼠的人胰腺癌细胞Bx PC-3移植瘤模型和胰腺癌人源肿瘤异种移植模型（PDX）,考察了33C的体内抑瘤作用。考察了各组肿瘤体积变化情况,并计算肿瘤体积并绘制肿瘤体积生长曲线。给药期间,各组裸鼠的瘤体积均持增长趋势,但与对照组相比,Napabucasin组和33C组的肿瘤增长速度明显减慢,其中33C组显着抑制了Bx PC-3移植瘤和胰腺癌PDX增长速度。4.通过对小鼠一般情况观察发现,小鼠精神状态良好,与阴性对照组比较,各给药组小鼠体重稍微有下降,但均无显着性差异。采用HE染色重要脏器观察33C对小鼠主要脏器的毒副作用。结果表明,小鼠的心、肝、脾、肺、肾等主要组织脏器未见明显的病理改变。5.用流式细胞仪检测不同浓度的33C对人胰腺癌Bx PC-3、PANC-1与MIA paca-2细胞凋亡率的影响。结果显示,不同浓度的33C（0、0.25μM、0.5μM、1μM）干预细胞24小时后,经流式检测结果显示,三种胰腺癌细胞的凋亡率会随药物浓度的增加而升高,1μM时诱导肿瘤细胞凋亡显着;不同干预浓度之间的细胞凋亡率存在明显差异（P<0.05）。6.用Western Blot（WB）对不同浓度的33C干预Bx PC-3细胞后,肿瘤细胞中PKC亚型的表达情况和磷酸化水平进行研究。结果显示,0.25μM 33C作用组PKCθ（T538）亚型磷酸化水平降低,0.5μM 33C作用组PKCθ（T538）亚型磷酸化水平显着降低、PKCδ（T505）亚型磷酸化水平下降,1μM 33C作用组PKCθ（T538）、PKCδ（T505）亚型磷酸化水平均明显下降。而其它PKC亚型的磷酸化水平未发生变化。7.利用HTRF体外激酶试验研究33C对PKCδ和PKCθ的活性影响,计算33C对PKCδ、PKCθ激酶的IC50值。结果表明,33C对PKCδ(IC50=10.94n M)和PKCθ(IC50=3.262 n M)要明显优于Sotrastaurin对PKCδ(IC50=198.6n M)和PKCθ(IC50=33.85 n M)。8.si RNA分别沉默胰腺癌Bxpc-3和As PC-1中的PKCδ和PKCθ,然后利用WB法研究33C对PKCδ/NF-κB信号通路中p-p65表达及磷酸化水平的影响。结果表明,si RNA沉默胰腺癌Bxpc-3和As PC-1中PKCδ表达时发现p-p65磷酸化水平被抑制,而沉默Bxpc-3和As PC-1中PKCθ后,p-p65磷酸化水平并没有变化。9.应用组织芯片技术研究胰腺癌中蛋白激酶PKCδ、NF-κB的表达及其临床意义,研究其与胰腺癌病人预后的相关性。结果表明,活化的PKCδ和P65在胰腺癌病人的瘤块组织中,细胞浆和细胞核中均高表达,并与病人的预后负相关。通过本文对33C以PKCδ为靶点的体内外抗胰腺癌效应和作用机制研究,可为PKCδ作为胰腺癌的治疗靶点和33C的临床应用提供理论基础和科学依据。
二、流式细胞术快速检测急性胰腺炎核因子-κB激活的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、流式细胞术快速检测急性胰腺炎核因子-κB激活的研究（论文提纲范文）
（1）肝受体同系物1对大鼠急性胰腺炎细胞模型中腺泡细胞损伤修复的影响及其机制（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 细胞培养及AP模型构建 |
| 1.2.2 慢病毒感染沉默NR5A2 |
| 1.2.3 流式细胞术 |
| 1.2.4 定量逆转录聚合酶链反应 |
| 1.2.5 淀粉酶活性检测 |
| 1.2.6 蛋白质印迹法 |
| 1.2.7 细胞增殖实验 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 模型组与正常对照组促炎因子m RNA及淀粉酶表达量比较 |
| 2.2 模型组与正常对照组NR5A2 m RNA及蛋白和核因子κB P65表达量比较 |
| 2.3 各组NR5A2 m RNA及蛋白表达量比较 |
| 2.4 各组炎症因子m RNA和淀粉酶表达量比较 |
| 2.5 各组细胞增殖情况比较 |
| 2.6 沉默NR5A2对核因子κB P65表达量的影响 |
| 3 讨论 |
（2）白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 急性胰腺炎 |
| 1.1.1 急性胰腺炎概述 |
| 1.1.2 AP的发病机制 |
| 1.2 调节性免疫细胞 |
| 1.2.1 调节性T细胞 |
| 1.2.2 调节性B细胞 |
| 1.2.3 调节性NK细胞 |
| 1.2.4 调节性DC细胞 |
| 1.2.5 调节性巨噬细胞 |
| 1.3 髓源性抑制细胞 |
| 1.3.1 髓源性抑制细胞概述 |
| 1.3.2 MDSC的产生与分化 |
| 1.3.3 MDSC的功能 |
| 1.3.4 影响MDSC功能的因素 |
| 1.3.5 MDSC与疾病 |
| 1.4 TIGIT |
| 1.4.1 耗竭性T细胞概述 |
| 1.4.2 TIGIT概况 |
| 1.4.3 TIGIT在肿瘤中的研究 |
| 1.4.4 TIGIT在移植中的研究 |
| 1.4.5 TIGIT在感染性疾病中的研究 |
| 1.4.6 TIGIT在自身免疫性疾病中的研究 |
| 1.5 IL-37 |
| 1.5.1 IL-37 的调控作用 |
| 1.5.2 IL-37 在疾病中的作用 |
| 1.6 MDSC与 TIGIT的关系及其调控机制 |
| 1.7 展望 |
| 第2章 AP患者中MDSC数量及功能分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 试剂耗材 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验对象 |
| 2.3.2 样本采集与保存 |
| 2.3.3 梯度密度离心法分离PBMC |
| 2.3.4 细胞计数 |
| 2.3.5 细胞表面染色 |
| 2.3.6 体外刺激PBMC实验 |
| 2.3.7 细胞内染色 |
| 2.3.8 流式分选MDSC细胞 |
| 2.3.9 磁珠分选CD3~+T 细胞 |
| 2.3.10 MDSC抑制实验 |
| 2.3.11 抑制实验检测 |
| 2.3.12 ROS染色 |
| 2.3.13 统计学方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 HC、MAP、SAP患者一般信息及临床特点 |
| 2.4.2 MAP、SAP患者外周血中MDSC细胞升高 |
| 2.4.3 SAP患者腹腔积液中MDSC细胞比例较外周血升高 |
| 2.4.4 AP患者外周血中MDSC升高与疾病严重程度相关 |
| 2.4.5 G-MDSC和 M-MDSC与疾病严重程度相关性分析 |
| 2.4.6 SAP患者外周血中MDSC对 T细胞的抑制作用更强 |
| 2.4.7 AP患者与健康对照外周血中 MDSC中 Arg-1、ROS分析 |
| 2.4.8 AP患者与健康对照外周血中MDSC表面CD155 表达分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 TIGIT在 AP患者外周血中表达及其功能分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 试剂耗材 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 研究对象、入选标准、排除标准及疾病严重程度分级标准 |
| 3.3.2 样本采集与保存 |
| 3.3.3 外周血PBMC的获取 |
| 3.3.4 细胞计数 |
| 3.3.5 细胞表面染色 |
| 3.3.6 PBMC体外刺激实验 |
| 3.3.7 细胞内染色 |
| 3.3.8 流式分选CD3~+TIGIT~+、CD3~+TIGIT~-细胞 |
| 3.3.9 细胞增殖实验 |
| 3.3.10 细胞增殖实验检测 |
| 3.3.11 数据分析及统计方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 AP外周血中CD3~+ T 细胞及CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞百分比及数量减少 |
| 3.4.2 AP外周血中CD3~+ T 细胞及CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞表面TIGIT表达下降 |
| 3.4.3 SAP患者外周血中CD3~+ T 细胞及其亚群CD4~+、CD8~+ T细胞功能检测 |
| 3.4.4 TIGIT~+T 细胞增殖能力较TIGIT~-T 细胞增殖能力强 |
| 3.5 实验讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 IL-37 通过影响 CD155 表达影响 MDSC对 T细胞的抑制功能 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 研究对象、入选标准、排除标准及疾病严重程度分级标准 |
| 4.3.2 样本采集与保存 |
| 4.3.3 外周血PBMC的获取 |
| 4.3.4 细胞计数 |
| 4.3.5 细胞表面染色 |
| 4.3.6 PBMC体外刺激实验 |
| 4.3.7 细胞内染色 |
| 4.3.8 流式分选MDSC细胞及CD3~+TIGIT~+、CD3~+TIGIT~-细胞 |
| 4.3.9 细胞增殖实验 |
| 4.3.10 细胞增殖实验检测 |
| 4.3.11 ELISA法检测血浆IL-37 浓度 |
| 4.3.12 数据分析及统计方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 AP患者血清中及单核细胞中IL-37 表达升高 |
| 4.4.2 IL-37对MDSC表型的影响 |
| 4.4.3 IL-37对MDSC抑制功能的影响 |
| 4.4.4 IL-37对MDSC抑制功能的影响的机制 |
| 4.4.5 MDSC表面CD155 的表达依赖于ROS的表达 |
| 4.4.6 MDSC通过CD155/TIGIT途径抑制T细胞功能 |
| 4.5 实验讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及博士在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（3）热休克蛋白90α作为诊断脓毒症及其预后的新型生物标志物研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1.前言 |
| 1.1 脓毒症 |
| 1.1.1 脓毒症定义 |
| 1.1.2 流行病学情况 |
| 1.1.3 发病机制 |
| 1.2 热休克蛋白 |
| 1.2.1 热休克蛋白简述 |
| 1.2.2 热休克蛋白90 |
| 1.2.3 热休克蛋白与脓毒症 |
| 2.研究对象与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 纳入及排除标准 |
| 2.2.1 纳入标准 |
| 2.2.2 排除标准 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 数据收集 |
| 2.3.2 标本采集 |
| 2.3.3 检验设备和试剂 |
| 2.3.4 血清HSP90αELISA检测 |
| 2.3.5 细胞因子及趋化因子流式细胞术检测 |
| 2.4 技术路线 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3.研究结果 |
| 3.1 健康对照组和脓毒症组及脓毒症生存组和死亡组各指标比较 |
| 3.1.1 健康对照组和脓毒症组比较 |
| 3.1.2 脓毒症生存组和死亡组比较 |
| 3.2 各实验室指标对脓毒症的诊断及预后价值 |
| 3.2.1 HSP90α对脓毒症的诊断价值 |
| 3.2.2 各实验室指标对脓毒症的预后判断价值 |
| 3.3 根据血清HSP90α水平和SOFA评分截断值的分组比较 |
| 3.3.1 血清HSP90α水平分组组间一致性检验 |
| 3.3.2 SOFA评分分组组间一致性检验 |
| 3.3.3 根据截断值分组的病死率比较分析 |
| 3.3.4 根据截断值分组的生存分析 |
| 3.4 细胞因子和趋化因子的比较 |
| 3.4.1 生存组和死亡组细胞因子和趋化因子比较 |
| 3.4.2 细胞因子和趋化因子对脓毒症预后价值分析 |
| 3.5 脓毒症预后相关因素的Logistic回归分析 |
| 3.6 HSP90α水平与各指标的相关性分析 |
| 4.讨论 |
| 4.1 HSP90α在脓毒症及脓毒症死亡组中显着升高 |
| 4.2 HSP90α介导脓毒症SIRS |
| 4.3 HSP90α介导脓毒症多器官功能障碍 |
| 4.4 HSP90α与促炎细胞因子 |
| 4.5 HSP90α在脓毒症中的诊断价值和预后价值 |
| 4.6 本研究的优势和限制 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 热休克蛋白在炎症性疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（4）冷诱导RNA结含蛋白在重症急性胰腺炎相关性肺损伤发病机制中的作用及大黄素干预的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分:CIRP 在 SAP 大鼠模型中的表达及其在 APALI 发病机制中的作用和大黄素干预的研究 |
| (一)引言 |
| (二)材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 药物配制 |
| 2.2 实验动物分组及模型制备 |
| 2.3 采集样本 |
| 2.4 苏木精-伊红(Hematoxylin & Eosin, HE)染色 |
| 2.5 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)检测血清 CIRP、淀粉酶(amylase)、IL-1β 水平 |
| 2.6 免疫组化检测 CIRP 及 Ly6G 的表达 |
| 2.7 免疫荧光法(Immunofluoresence, IF)实验步骤 |
| 2.8 Western blot法实验步骤 |
| 2.9 Quantitative Real-time PCR (qRT-RCR) 法实验步骤 |
| 2.10 统计学方法 |
| (三)结果 |
| 3.1 各组大鼠一般状态的比较 |
| 3.2 各组大鼠胰腺及肺组织的病理学观察结果 |
| 3.3 各组大鼠肺功能的变化 |
| 3.4 各组大鼠血清中的淀粉酶、IL-1β 及CIRP水平的变化 |
| 3.5 各组大鼠胰腺和肺组织中 CIRP mRNA 的表达 |
| 3.6 各组大鼠胰腺和肺组织中CIRP蛋白的表达 |
| 3.7 免疫组化观察各组大鼠胰腺及肺组织中CIRP的表达 |
| 3.8 免疫荧光观察各组大鼠胰岛中CIRP的表达 |
| 3.9 各组大鼠肺组织内NF-κB p65 和IKBα 磷酸化水平的比较 |
| 3.10 各组大鼠肺组织内 NLRP3 及 IL-1β mRNA 的表达 |
| 3.11 各组大鼠肺组织内 NLRP3 炎性小体的组装与活化水平 |
| 3.12 各组大鼠肺组织中 CXCL1 表达水平的比较 |
| 3.13 各组大鼠肺内中性粒细胞的浸润的比较 |
| (四)讨论 |
| (五)小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分:CIRP 对 NR8383 细胞 NF-κB 及 NLRP3/IL-1β/CXCL1信号通路的影响及大黄素干预的实验研究 |
| (一)引言 |
| (二)材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 试剂准备 |
| 2.2 细胞的复苏 |
| 2.3 细胞培养条件 |
| 2.4 细胞的传代 |
| 2.5 细胞的冻存 |
| 2.6 CCK8 实验检测大黄素的细胞毒性 |
| 2.7 细胞的分组及处理 |
| 2.8 流式细胞术检测细胞焦亡 |
| 2.9 siRNA瞬时转染 |
| 2.10 Western blot分析 |
| 2.11 Quantitative Real-time PCR (qRT-PCR) |
| 2.12 统计学方法 |
| (三)结果 |
| 3.1 大黄素对 NR8383 细胞增殖活性的影响 |
| 3.2 各组NR8383 细胞NF-κB p65 和IKBα 磷酸化水平的的比较 |
| 3.3 各组NR8383 细胞的NLRP3 和IL-1β mRNA的表达水平 |
| 3.4 各组 NR8083 细胞内 NLRP3 炎性小体的组装与活化水平 |
| 3.5 各组NR8383 细胞焦亡率的比较 |
| 3.6 各组NR8383 细胞的CXCL1 的表达水平比较 |
| 3.7 RNA 干扰 IL-1β 对 CIRP 诱导 NR8383 细胞 CXCL1 表达的影响 |
| 3.8 IL-1β 促进NR8383 细胞表达CXCL1 的剂量和时间依赖性关系 |
| (四)讨论 |
| (五)小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 本研究存在的不足与展望 |
| 综述 冷诱导 RNA 结合蛋白(Cold-inducible RNA binding protein)在炎症性疾病中作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（5）雷公藤种子提取物Tws抑制NFκB信号通路影响巨噬细胞体外抗炎活性研究（论文提纲范文）
| 中英文对照缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 .材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 用逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测iNOS、IL-1β、TNF-α mRNA的表达水平 |
| 2.4 用ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清液中,TNF-α、IL-1β,IL-6的分泌水平 |
| 2.5 用Western Blotting法检测NF-κBp65蛋白表达水平 |
| 2.6 流式细胞术检测活性氧(ROS) |
| 2.7 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Tws对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症相关基因(iNOS、IL-1β、TNF-α) mRNA表达水平的影响 |
| 3.2 Tws对LPS诱导的细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)分泌水平的影响 |
| 3.3 Tws对巨噬细胞NFκB信号通路的影响 |
| 3.4 Tws对巨噬细胞活性氧(ROS)的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 雷公藤种子提取物Tws对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症相关基因(TNF-α、IL-1β、iNOS) mRNA表达水平的影响 |
| 4.2 雷公藤种子提取物Tws对LPS诱导的细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)分泌的影响 |
| 4.3 雷公藤种子提取物Tws对巨噬细胞NFκB信号通路的影响 |
| 4.4 雷公藤种子提取物Tws对巨噬细胞活性氧(ROS)产生的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 雷公藤通过NF-κB信号通路对巨噬细胞的免疫调节作用研究进展 |
| 参考文献 |
（6）急性胰腺炎患者HMGB1的表达及其对淋巴细胞自噬、凋亡的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料、方法 |
| 1.1 病例选择及标本收集 |
| 1.2 主要设备与试剂 |
| 1.3 检测指标及方法 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组年龄、性别、APACHE-Ⅱ评分 |
| 2.2 外周血HMGB1 mRNA表达及其血清蛋白水平 |
| 2.3 外周血 LC3-Ⅱ、Capase-3 mRNA表达及其血清蛋白水平 |
| 2.4 淋巴细胞自噬率和凋亡率 |
| 2.5 血清HMGB1蛋白水平与淋巴细胞自噬、凋亡的相关分析 |
| 3 讨论 |
| 4 不足和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 HMGB1与细胞自噬、凋亡关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（7）虎杖提取物白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞生长及NF-κB P65表达影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 祖国医学对肺癌的研究 |
| 1.1 中医肺癌的起源 |
| 1.2 中医肺癌的病因病机 |
| 1.3 中医肺癌的辨证要点 |
| 1.4 中医肺癌的中草药治疗 |
| 2 现代医学对肺癌的认识 |
| 2.1 肺癌的流行病学 |
| 2.2 肺癌的病因 |
| 2.3 肺癌的症状及诊断方法 |
| 2.4 肺癌的治疗方法 |
| 3 虎杖提取物白藜芦醇的作用机制 |
| 3.1 虎杖的功效主治 |
| 3.2 虎杖中白藜芦醇的提取方法 |
| 3.3 白藜芦醇的理化性质 |
| 3.4 白藜芦醇的功效主治 |
| 4 NF-κB的作用机制 |
| 4.1 NF-κB的起源 |
| 4.2 NF-κB家族 |
| 4.3 NF-κB信号通路的激活 |
| 4.4 NF-κB与肿瘤的关系 |
| 第二部分 研究方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要器材 |
| 2 细胞培养 |
| 2.1 细胞培养液的配制 |
| 2.2 细胞复苏 |
| 2.3 细胞换液 |
| 2.4 细胞传代 |
| 2.5 细胞冻存 |
| 3 方法 |
| 3.1 CCK-8试验检测细胞的增殖 |
| 3.2 RT-PCR检测NF-κB P65 基因的表达 |
| 3.2.1 引物信息 |
| 3.2.2 RNA的提取(TRIZOL法) |
| 3.2.3 去DNA处理 |
| 3.2.4 逆转录 |
| 3.2.5 qPCR检测 |
| 3.2.6 所得实验结果数据分析 |
| 3.3 流式细胞术分析细胞周期 |
| 3.4 流式细胞术分析细胞凋亡 |
| 3.5 Western blot检测NF-κB P65 蛋白表达 |
| 3.6 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞的增殖作用 |
| 4.2 白藜芦醇对人肺腺癌A549 细胞NF-κB P65 mRNA表达的影响 |
| 4.3 白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞周期的影响 |
| 4.4 白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响 |
| 4.5 白藜芦醇对人肺腺癌A549 细胞的NF-κB P65 蛋白表达的影响 |
| 第三部分 讨论与分析 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 白藜芦醇对肺腺癌 A549 细胞作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间获得的科研成果 |
（8）Pirfenidone和Fraxinellone对实验小鼠慢性胰腺炎的疗效及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第一部分 Pirfenidone缓解雨蛙素诱导的小鼠慢性胰腺炎 |
| 一、实验结果 |
| 二、分析与讨论 |
| 三、结论 |
| 第二部分 Pirfenidone抑制胰腺星状细胞活化及其分子作用机制 |
| 一、实验结果 |
| 二、分析与讨论 |
| 三、结论 |
| 第三部分 Pirfenidone抑制巨噬细胞M1 极化及其分子作用机制 |
| 一、实验结果 |
| 二、分析与讨论 |
| 三、结论 |
| 第四部分 Fraxinellone缓解雨蛙素诱导的小鼠慢性胰腺炎 |
| 一、实验结果 |
| 二、分析与讨论 |
| 三、结论 |
| 第五部分 Fraxinellone抑制胰腺星状细胞活化及其分子作用机制 |
| 一、实验结果 |
| 二、分析与讨论 |
| 三、结论 |
| 第六部分 Fraxinellone调控巨噬细胞的功能及其分子作用机制 |
| 一、实验结果 |
| 二、分析与讨论 |
| 三、结论 |
| 参考文献 |
| 综述 慢性胰腺炎的试验性药物治疗进展 |
| 综述的参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（9）普鲁士蓝纳米粒抑制炎症/清除活性氧及相关机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 前言 |
| 1.纳米医学与炎症/活性氧相关疾病 |
| 1.1 炎症与疾病的关系 |
| 1.2 活性氧(ROS)与疾病的关系 |
| 1.3 纳米医学在炎症和ROS相关疾病中的应用 |
| 1.4 普鲁士蓝纳米粒(PB) |
| 1.5 普鲁士蓝纳米粒催化性能 |
| 1.6 普鲁士蓝纳米粒多模式成像 |
| 1.7 普鲁士蓝纳米粒抗炎和抗氧化的研究现状 |
| 2 论文的选题与意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 具有内源性抗氧化和抗炎活性的普鲁士蓝纳米粒在急性胰腺炎中的应用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 PB的制备及表征 |
| 2.2.2 PB体外清除活性氧(ROS)的性能评价 |
| 2.2.3 胰腺腺泡细胞培养及体外PB在细胞水平的安全性评价 |
| 2.2.4 PB在细胞水平清除ROS,抑制炎症细胞因子效果评价 |
| 2.2.5 PB治疗雨蛙素介导的急性胰腺炎的疗效评价 |
| 2.2.6 PB的生物安全性评价 |
| 2.2.7 数据统计与分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 PB的表征结果分析 |
| 2.3.2 PB在环境中的保存稳定性研究 |
| 2.3.3 PB体外清除活性氧(ROS)的性能评价 |
| 2.3.4 胰腺腺泡细胞(AR42J cells)培养及体外PB在细胞水平的安全性评价 |
| 2.3.5 PB在细胞水平清除ROS,抑制炎症细胞因子效果评价 |
| 2.3.6 PB治疗雨蛙素介导的急性胰腺炎的疗效评价 |
| 2.3.7 PB的生物安全性评价 |
| 2.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 普鲁士蓝纳米粒自协同效应:同时驱动光热疗法(PTT)并减轻PTT诱导的炎症反应和活性氧 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 PB的制备 |
| 3.2.3 PB的表征 |
| 3.2.4 PB的体外光热性能 |
| 3.2.5 PB体外清除ROS性能 |
| 3.2.6 细胞培养和细胞毒性评价 |
| 3.2.7 PB对肿瘤细胞的体外光热效应 |
| 3.2.8 激光共聚焦显微镜观察细胞对PB吞噬作用 |
| 3.2.9 激光共聚焦显微镜观察PTT体外效应 |
| 3.2.10 活体血清生化和血常规检查 |
| 3.2.11 肝脏和脾脏中的免疫细胞检测 |
| 3.2.12 TUNEL染色 |
| 3.2.13 PB体内清除ROS和抗炎作用的研究 |
| 3.2.14 PB体内光热治疗同时清除ROS和抗炎作用疗效评价 |
| 3.2.15 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 PB表征结果分析 |
| 3.3.2 PB体外稳定性 |
| 3.3.3 PB的体外光热性能 |
| 3.3.4 PB体外清除ROS性能 |
| 3.3.5 细胞毒性实验 |
| 3.3.6 细胞光热治疗效果评价 |
| 3.3.7 细胞对PB纳米粒吞噬实验 |
| 3.3.8 制备的PB的毒性和内质网应激诱导能力研究 |
| 3.3.9 PB体内清除ROS和抗炎作用的研究 |
| 3.3.10 PB在肿瘤PTT中的自我协同作用 |
| 3.4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 创新性与不足 |
| 普鲁士蓝纳米粒在生物医学中的应用及进展综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（10）星孢菌素类似物7-oxostaurosporine抗肿瘤作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 研究方案 |
| 1.4 预期目标 |
| 第二章 文献综述 |
| 2.1 胰腺癌诊疗的研究进展 |
| 2.1.1 EGFR抑制剂 |
| 2.1.2 VEGF抑制剂 |
| 2.1.3 IGF抑制剂 |
| 2.1.4 MMPs抑制剂抑制剂 |
| 2.1.5 针对原癌基因K-Ras信号靶向治疗药物 |
| 2.1.6 靶向诱导肿瘤细胞凋亡药物 |
| 2.1.7 其他靶向药物 |
| 2.2 胰腺癌的发病因素及机制 |
| 2.3 蛋白激酶C(Protcin Kinase C,PKC)在胰腺癌中的研究进展 |
| 2.3.1 PKC的结构及分类 |
| 2.3.2 PKC各亚型的功能 |
| 2.3.3 PKC抑制剂研究进展 |
| 2.4 核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)在胰腺癌中的研究进展 |
| 2.5 星孢菌素研究进展 |
| 2.5.1 星孢菌素的生物功能 |
| 2.5.2 7-羰基星孢菌素化合物(7-oxostaurosporine,33C)研究进展 |
| 第三章 实验方法 |
| 3.1 实验材料与设备 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 实验仪器与设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 33C制备方法 |
| 3.2.2 抑菌活性、体内外抗肿瘤作用及抗肿瘤机制、预后等实验方法 |
| 第四章 7-oxostaurosporine(33C)制备及其抑菌活性研究 |
| 4.1 7-oxostaurosporine(33C)制备 |
| 4.2 核磁鉴定数据及谱图 |
| 4.3 7-oxostaurosporine(33C)抑菌活性研究 |
| 4.3.1 菌种的活化与培养 |
| 4.3.2 抑菌效果测定 |
| 4.3.3 实验结果与分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 7-oxostaurosporine(33C)抗肿瘤药效作用研究 |
| 5.1 33C体外抗肿瘤作用研究 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.1.3 实验结果与分析 |
| 5.1.4 讨论 |
| 5.2 33C体内对BXPC-3胰腺癌荷瘤小鼠的药效研究 |
| 5.2.1 材料与方法 |
| 5.2.2 实验结果与分析 |
| 5.2.3 讨论 |
| 5.3 33C体内抗人胰腺癌小鼠异体移植瘤(PDX)药效研究 |
| 5.3.1 材料与方法 |
| 5.3.2 实验结果与分析 |
| 5.3.3 讨论 |
| 第六章 7-oxostaurosporine(33C)抗肿瘤作用机制研究 |
| 6.1 33C诱导肿瘤细胞凋亡 |
| 6.1.1 材料与方法 |
| 6.1.2 实验结果与分析 |
| 6.2 33C对蛋白激酶家族磷酸化水平影响 |
| 6.2.1 材料与方法 |
| 6.2.2 实验结果与分析 |
| 6.3 体外激酶试验研究33C对 PKCδ和PKCθ 的活性影响 |
| 6.3.1 材料与方法 |
| 6.3.2 实验结果与分析 |
| 6.3.3 讨论 |
| 6.4 PKCδ调控下游NF-κB活性的机制研究 |
| 6.4.1 材料与方法 |
| 6.4.2 实验结果与分析 |
| 6.4.3 讨论 |
| 第七章 应用组织芯片技术研究胰腺癌中蛋白激酶PKCδ、NF-κB的表达及其临床意义 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 实验材料 |
| 7.1.2 实验方法 |
| 7.1.3 原始实验数据的判读方式 |
| 7.1.4 原始实验数据的标准化方案 |
| 7.2 实验结果与分析 |
| 7.2.1 p-PKC(T505)组织芯片p-PKCδ的表达情况 |
| 7.2.2 p-PKC(T505)组织芯片p-P65 的表达情况 |
| 7.3 讨论 |
| 第八章 结论与展望 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 1 作者简历 |
| 2 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 3 参与的科研项目及获奖情况 |
| 学位论文数据集 |
四、流式细胞术快速检测急性胰腺炎核因子-κB激活的研究（论文参考文献）
- [1]肝受体同系物1对大鼠急性胰腺炎细胞模型中腺泡细胞损伤修复的影响及其机制[J]. 孙亚梅,张杰. 中国医药, 2021(11)
- [2]白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究[D]. 丁黎莉. 吉林大学, 2021(01)
- [3]热休克蛋白90α作为诊断脓毒症及其预后的新型生物标志物研究[D]. 张玉琳. 大理大学, 2021(09)
- [4]冷诱导RNA结含蛋白在重症急性胰腺炎相关性肺损伤发病机制中的作用及大黄素干预的实验研究[D]. 徐秋实. 大连医科大学, 2021
- [5]雷公藤种子提取物Tws抑制NFκB信号通路影响巨噬细胞体外抗炎活性研究[D]. 梁婧. 安徽医科大学, 2021(01)
- [6]急性胰腺炎患者HMGB1的表达及其对淋巴细胞自噬、凋亡的作用研究[D]. 梁运轩. 右江民族医学院, 2020
- [7]虎杖提取物白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞生长及NF-κB P65表达影响的研究[D]. 刘剑. 广西中医药大学, 2020(02)
- [8]Pirfenidone和Fraxinellone对实验小鼠慢性胰腺炎的疗效及分子机制研究[D]. 郭洪雷. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [9]普鲁士蓝纳米粒抑制炎症/清除活性氧及相关机制研究[D]. 谢雪. 重庆医科大学, 2020(01)
- [10]星孢菌素类似物7-oxostaurosporine抗肿瘤作用及机制研究[D]. 程向炜. 浙江工业大学, 2020(02)