重组UK114融合蛋白的表达纯化及免疫组化定位

论文摘要

[目的]UK114（山羊肝脏肿瘤抗原）是钙蛋白酶系统的主要成分钙蛋白酶ⅠCAPN1/S1（μ-calpain）的激活蛋白,本研究旨在利用原核表达系统体外制备重组UK114蛋白,获得融合蛋白制备抗体,对其进行组织定位,为深入研究其功能提供蛋白水平的证据。[方法]将重组质粒pGEX-4T-3-UK114转化入大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达、纯化,用凝血酶对GST-UK114融合蛋白进行酶切,制备抗UK114多克隆抗体,免疫组化分析重组UK114蛋白在组织中的分布情况。[结果]GST-UK114融合蛋白的分子量为40kD,酶切得到目标蛋白,其分子量为14kD;用UK114蛋白免疫家兔,得到了理想的高效价兔抗UK114多克隆抗血清,效价大于1∶125 000,抗血清经纯化得到兔抗UK114多克隆抗体,效价大于1∶25 000;Western blot分析结果显示,GST-UK114融合蛋白在约40kD处有一明显条带,融合蛋白酶切后在14kD附近出现一条带;免疫组织化学分析表明,免疫组化染色主要发生在细胞质中,山羊肝脏组织中肝小叶边缘区有肝细胞出现棕色的阳性着色,部分肝窦内皮细胞也有棕色的阳性着色。肾脏皮质中的肾小管上皮细胞有棕色的阳性着色出现,肾小球中没有出现着色。[结论]试验成功获得纯化后的重组UK114蛋白,制备的抗UK114抗体可以与正常山羊肝脏和肾脏组织中的UK114蛋白结合,为其后续分子伴侣特性以及抗肿瘤特性的研究提供一定的蛋白试验依据。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 GST-UK114蛋白在大肠杆菌中的诱导表达、纯化及酶切方法
•     1.2.2 抗UK114蛋白抗体的制备及纯化
•     1.2.3 UK114蛋白免疫组织化学检测
• 2 结果与分析
•   2.1 GST-UK114蛋白在大肠杆菌中的诱导表达纯化
•     2.1.1 GST-UK114融合蛋白的纯化
•     2.1.2 GST-UK114融合蛋白的酶切及酶切UK114蛋白的纯化
•   2.2 兔抗UK114多克隆抗体的制备及检测
•     2.2.1 动物免疫及抗体检测
•     2.2.2 抗体纯化
•   2.3 重组UK114蛋白免疫印迹 （Western blot） 分析
•   2.4 重组UK114蛋白在山羊肝脏和肾脏中的免疫组织化学定位
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 尹淑琴,范艳,朱宏,梁娟,常泓

关键词: 重组,多克隆抗体,蛋白免疫印迹,免疫组织化学定位

来源: 山西农业大学学报(自然科学版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 山西农业大学生命科学学院,山西农业大学期刊社

基金: 国家自然科学基金项目(31201347)

分类号: Q51

DOI: 10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201809013

页码: 95-100

总页数: 6

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