人工锌指蛋白介导调控的里氏木霉纤维素酶生产

论文摘要

里氏木霉Trichoderma reesei Rut-C30是目前研究最广泛的纤维素酶生产菌,选育高产纤维素酶的里氏木霉菌株有助于提高木质纤维素资源生物炼制的经济性。利用人工锌指蛋白文库转化T.reeseiRut-C30,筛选获得了两株高产纤维素酶的突变株T. reesei M1和M2,与出发菌株比较,突变株M1和M2滤纸酶活分别提高100%和53%,且M1突变株外泌蛋白量提高69%,M2内切纤维素酶活提高64%。实时定量PCR分析结果表明,与对照菌株相比,突变株M1和M2中主要纤维素酶基因转录均上调,但不同酶基因在两株菌中有不同的变化特征。此外,纤维素酶抑制转录因子基因ace1在两株突变株中都转录下调,而纤维素酶正调控转录因子基因xyr1仅在M1突变株中上调。以上结果表明,不同人工锌指蛋白对纤维素酶活性的影响具有多样性。对这些突变体中人工锌指蛋白靶基因进行深入分析,为进一步深入探究里氏木霉纤维素酶合成调控的机理,以及利用代谢工程选育更高效的产酶菌株提供了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌种与培养基
•   1.2 主要生化试剂
•   1.3 锌指转化子遗传稳定性测试
•   1.4 液体摇瓶发酵
•   1.5 里氏木霉染色体DNA提取
•   1.6 人工锌指转录因子DNA片段扩增
•   1.7 蛋白质含量测定
•   1.8 滤纸酶活、内切葡聚糖酶活、木聚糖酶活测定
•   1.9 人工锌指蛋白在基因组中插入位点分析
•   1.1 0 人工锌指蛋白基因组结合位点预测
•   1.1 1 实时定量PCR分析 （RT-qPCR）
• 2 结果与分析
•   2.1 高产纤维素酶突变体筛选
•   2.2 纤维素酶高产株M1和M2摇瓶发酵验证
•   2.3 高产菌株M1和M2锌指序列分析
•   2.4 人工锌指转录因子在菌株M1和M2基因组中插入位点分析
•   2.5 人工锌指转录因子对突变株纤维素降解酶合成主要基因转录影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孟庆山,李嘉祥,张飞,赵心清,白凤武

关键词: 里氏木霉,人工锌指蛋白,纤维素酶,转录因子,代谢工程

来源: 生物工程学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 大连理工大学生命科学与技术学院,上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室,上海交通大学教育部代谢与发育国际合作联合实验室

基金: 国家自然科学基金(Nos.21536006,51561145014)资助~~

分类号: Q936;Q78

DOI: 10.13345/j.cjb.180132

页码: 81-90

总页数: 10

文件大小: 1450K

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