基于量子点标记的赭曲霉毒素A快速、高灵敏荧光免疫层析检测方法的建立及应用

论文摘要

赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）具有肾毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性,广泛存在于各种粮食作物及其副产品中,是食品和饲料原料的重要污染物,可在人类及动物体内蓄积,在已知发现的真菌毒素中,重要性和危害性仅次于黄曲霉毒素。本研究通过采用量子点荧光微球（quantum dots,QDs）标记OTA单克隆抗体,并基于免疫层析原理,优化、建立了OTA高灵敏荧光免疫层析检测方法（FICGA）,15min即可实现对农产品中OTA污染的快速定量检测。该方法检测下限(IC10)达到0.04ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.05–0.59ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.18ng/mL。与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为7.3%和11.9%,对其他常见真菌毒素AFB1、ZEN、FB1和DON均无交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达83.2%–117.8%,与LC-MS/MS同时对天然样本中OTA含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的FICGA快速、灵敏,可满足基层单位和现场的快速检测需求,具有很好的应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 主要试剂:
•     1.1.2 主要仪器:
•   1.2 偶联抗原 （OTA-BSA/OVA） 的制备与鉴定
•   1.3 抗体量子点荧光标记物 （anti-OTA-QDs） 的制备与鉴定
•   1.4 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 的优化
•   1.5 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 的建立
•   1.6 基质影响的消除
•   1.7 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 稳定性试验
•   1.8 样本萃取与加标试验
•   1.9 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 与LC-MS/MS比较试验
• 2 结果与分析
•   2.1 偶联抗原 （OTA-BSA/OVA） 的制备
•   2.2 单克隆抗体量子点荧光标记物 （Anti-OTA-QDs） 的纯化与鉴定
•   2.3 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 相关条件的确定
•   2.4 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 的建立
•   2.5 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 检测OTA特异性分析
•   2.6 量子点荧光免疫层析检测方法 （FICGA） 稳定性的验证
•   2.7 基质效应的消除
•   2.8 加标回收试验
•   2.9 量子点荧光免疫层析检测法 （FICGA） 与LC-MS/MS相关性分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨眈,王作欢,蒋小武,方维焕,宋厚辉,章先

关键词: 赭曲霉毒素,免疫层析,量子点,单克隆抗体,定量检测

来源: 菌物学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑,医药卫生科技

专业: 轻工业手工业,预防医学与卫生学

单位: 浙江农林大学动物科技学院,浙江大学动物科学学院,宁波出入境检验检疫局,浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室,动物健康检测互联网技术浙江省工程实验室

基金: 浙江省自然科学基金(LQ17C170002),浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划资助项目(2019R412036),浙江农林大学人才项目(2016FR025),浙江省重点研发计划(2018C02041),国家高新技术研究发展计划(863计划)(2012AA101602)~~

分类号: R155.5

DOI: 10.13346/j.mycosystema.180330

页码: 1003-1013

总页数: 11

文件大小: 1789K

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