导读:本文包含了介导的原生质体转化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质体,炭疽,真菌,水稻,苹果,遗传学,镰刀。
介导的原生质体转化论文文献综述
闫思远,顾沛雯[1]（2019）在《PEG介导枸杞内生真菌NQG8Ⅱ4菌株原生质体转化》一文中研究指出为建立PEG介导的枸杞内生真菌NQG8Ⅱ4 (Fusarium nematophilum)的遗传转化体系。以NQG8Ⅱ4的幼嫩菌丝为材料,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素标记的质粒PDL2转入NQG8Ⅱ4的原生质体中;对获得的转化子进行PCR检测。试验获得NQG8Ⅱ4的最优原生质体制备条件为:菌龄16 h的菌丝0.05 g于含有3%崩溃酶+1%溶壁酶的混合酶液中反应2.5 h;整个试验的渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl,原生质体获得量达到最大为6.70×10~7个/mL。试验共获得57个转化子,转化效率为2.85个/μg。对转化子进行PCR检测,表明外源的hph基因已经整合到NQG8Ⅱ4的基因组中。本试验成功建立了稳定的PEG介导的NQG8Ⅱ4菌株遗传转化体系,可用于研究菌株NQG8Ⅱ4在枸杞中的侵染定殖以及对枸杞促生抗病机理。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
戴蓬博,梁晓飞,张荣,孙广宇[2]（2019）在《基于PEG介导原生质体转化构建粉红聚端孢荧光标记》一文中研究指出粉红聚端孢是多种植物的重要病原菌。本研究通过酶解粉红聚端孢幼嫩菌丝细胞壁获得原生质体,用PEG介导原生质体转化将携带GFP基因和博来霉素抗性基因的外源DNA随机插入粉红聚端孢基因组,共获得博来霉素抗性菌株90株,转化效率达18个/μg。选取22株转化子荧光观察,发现均可表达荧光,菌株间荧光强度不同,其中10株转化子荧光表达较强。与野生型相比,突变菌株TR45的菌落生长、产孢量和致病力等生物学特性均未改变,在不含博来霉素的培养皿中继代培养10代荧光仍能稳定表达。本研究构建的高效原生质体制备和PEG介导粉红聚端孢遗传转化方法,可用于该菌基因功能研究,绿色荧光标记菌株可用于病菌侵入、田间监测、侵染循环等发生规律研究。(本文来源于《菌物学报》期刊2019年01期）
沈慧敏,李超,高利,刘太国,刘博[3]（2017）在《原生质体法介导真菌遗传转化的研究进展》一文中研究指出原生质体法介导真菌遗传转化体系是实现大规模随机、定点突变和菌种改良的方法之一,为研究真菌致病性和侵染机制奠定了基础。原生质体法构建转化体系的步骤包括原生质体的制备、转化与再生,其中关键是原生质体的制备,通常采用酶解法破除细胞壁获得原生质体,其获得率直接影响转化效率。转化通常借助于聚乙二醇(PEG)介导、电击或限制性内切酶法完成,其中PEG介导的原生质体转化法较传统,技术较成熟;电击法操作较简单;限制性内切酶(REMI)介导的整合转化,因其转化效率较高,可产生大量稳定的转化子,正被越来越多地应用于丝状真菌的遗传转化。(本文来源于《植物保护》期刊2017年02期）
陈春梅,冯姣,陈志文,肖星,蒋敏敏[4]（2016）在《原生质体介导马尔尼菲青霉基因转化体系的优化》一文中研究指出目的优化原生质体介导的马尔尼菲青霉转化体系,为其基因功能研究提供良好的平台。方法通过原生质体介导将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)pyrG基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD(pyrG-,ligD-)中,在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子,运用PCR验证重组子,通过改变影响转化效率的酶解时间、培养基浓度、质粒浓度、不同配方的原生质体洗涤液STC和不同配方的原生质体助融剂PTC 5个条件对体系进行优化。结果 PCR验证A.nidulans pyrG基因成功的插入ligD中,转化子可稳定传代。最适合ligD原生质体转化效率的条件为:酶解时间6h,PTC(60%PEG-4000,100mmol/L Tris-HCl pH8.0,100mmol/L CaCl2),每100μL原生质体(106~107/mL)加入2.5μg质粒,0.6 mol/L蔗糖SD/SDU筛选/再生培养基,每1μg质粒转化子可达68个左右。结论成功优化了原生质体介导马尔尼菲青霉转化体系的条件,优化后该方法转化效率高,为基因功能研究提供良好平台。(本文来源于《中国真菌学杂志》期刊2016年03期）
张龄丹[5]（2016）在《PEG介导玉米叶肉细胞原生质体瞬时基因转化体系的应用研究》一文中研究指出原生质体瞬时基因表达系统以其经济、简便、快捷和高效的独特优势,用于研究植物信号转导途径、筛选信号通路途径中的功能基因以及分析功能基因的特性,已经成为一种研究植物生理、生化、分子机制的重要手段。植物原生质体具备与完整植株和组织类似的生理特性,如对植物激素、代谢物、外界环境、病原诱导的激发子的刺激能够做出相应的响应。结合遗传学,基因组学和转基因的方法,原生质体表达系统的应用为各种功能基因的高通量筛选和系统特异性分析作出了重要贡献。目前,拟南芥、烟草和番茄等双子叶植物的原生质体的应用已经很普遍,尤其是在模式植物拟南芥中,以PEG-Ca2+介导的原生质体瞬时表达系统的研究已经很成熟。不管是在信号转导和启动子的研究,还是在功能基因和amiRNA(人工miRNA)的高通量筛选方面都取得很多重要的成果。但是针对玉米和水稻这类单子叶植物的原生质体瞬时表达系统的研究还比较少。玉米不仅是一种重要的粮食作物,而且是单子叶植物研究的经典模式植物。以电激介导的玉米原生质体瞬时转化体系在信号转导、启动子和光合作用中关键酶的研究中都已经取得了许多成果。尽管化学转染方法更易操作,但是以PEG-Ca2+介导的玉米原生质体的转化方法却很少被报道。由于玉米的转基因工程存在周期长,耗材多,工作量大,得到稳定转化的植株较困难等问题,这就使玉米在功能基因如转录因子,启动子的筛选和功能研究等方面非常困难。而原生质体瞬时表达系统可以快捷,有效地筛选出植物中一些功能基因,并且分析它们的功能特性。因此,玉米原生质体瞬时基因转化技术对玉米功能基因的研究是必不可少的。我们以玉米原生质体为材料,详细阐述了玉米原生质体的提取、转化和培养方法。我们选取玉米的一个基因ZmMYC2-2,采用PEG-Ca2+介导的化学转染方法,对ZmMYC2-2进行亚细胞定位,在转录水平和次生代谢物水平对这个基因的功能进行初步分析,并且验证了玉米原生质体也可以筛选amiRNA。经研究和分析后得到以下结论:(1)亚细胞定位实验显示,ZmMYC2-2只在细胞核中表达。所以推测ZmMYC2-2基因类似于拟南芥中的AtMYC2基因,可能在玉米的茉莉酸(JA)合成和信号转导中作为转录因子起重要的调控作用。(2)ZmMYC2-2基因的过表达实验结果表明,与茉莉酸合成有关的OPR7和OPR8基因都有显着上调,与丁布合成有关的Bx基因也都有显着上调,与抗虫有关的丁布类次生代谢物的含量与对照相比也都显着上调。这些结果与亚细胞定位结果的功能预测相吻合。(3)ZmMYC2-1和ZmMYC2-1的人工小RNA(amiRNA)过表达实验结果表明,两个ZmMYC2的表达量与对照相比显着降低。说明我们所选择的amiRNA对各自的目的基因都有显着的沉默效果。以上结果都证明PEG介导的玉米原生质体表达系统也可以作为一种重要和实用的手段来对玉米中的功能基因筛选并进行功能特性研究。尤其为玉米在转录水平和次生代谢物水平的研究提供了更为快捷、经济、简便而有效的方法。同时,也为玉米的转基因工作提供参考。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2016-06-01）
韩小路,白静科,张玮,张荣,孙广宇[6]（2016）在《PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichum fructicola原生质体转化》一文中研究指出为建立PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichum fructicola的遗传转化体系,以果生刺盘孢SQ06-E的幼嫩菌丝为受体,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素标记的质粒pCB1003转入果生刺盘孢菌丝的原生质体中;对获得的转化子进行遗传稳定性检测、PCR检测和Southern杂交分析。试验获得果生刺盘孢的最优转化体系为:密度为1×106 mL-1分生孢子在M3S培养基中,28℃、200r/min震荡培养8h;过滤收集菌丝,在质量浓度为0.25g/mL崩溃酶+0.05g/mL溶壁酶的10mL酶解液中加入0.5g湿菌体酶解3h;整个试验的渗透压稳定剂为0.8mol/L KCl。试验共得到76个转化子,转化率为1μg DNA获得3~4个转化子。对转化子的PCR检测和Southern杂交分析都表明hph基因已整合入果生刺盘孢的基因组中。所有转化子在PDA培养基上继代5次后仍能正常生长,说明外源基因hph能在果生刺盘孢中稳定遗传。(本文来源于《西北农业学报》期刊2016年03期）
韩小路[7]（2015）在《PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichum fructicola原生质体转化体系的研究》一文中研究指出由刺盘孢菌引起的苹果炭疽类病害是当前我国苹果生产中主要病害之一,可引起早期大量落叶,以及果实生长期和贮藏期的腐烂,造成严重的经济损失。其中引起苹果大量落叶的病害又称之为苹果炭疽叶枯病。苹果炭疽叶枯病为我国苹果生产中出现的一种新病害,引起嘎啦、秦冠等品种早期大量落叶、果实产生大量褐色斑点,给果农造成严重的经济损失。本研究室前期的研究明确了苹果炭疽叶枯病的病原菌为果生刺盘孢Colletotrichum fructicola和隐秘刺盘孢C.aenigma,其中C.fructicola为优势种。本研究拟以果生刺盘孢菌株SQ06-E为供试菌株,利用PEG介导的遗传转化方法将质粒pCB1003和pRM7转入果生刺盘孢原生质体中,建立PEG介导的果生刺盘孢原生质体遗传转化体系,并获得GFP标记的果生刺盘孢菌株。取得以下主要研究结果:1.优化了菌龄、酶浓度、酶解时间、渗透压稳定剂对原生质体质量和产量的影响因素等条件,获得果生刺盘孢原生质体制备最优条件为:浓度为1×106个/mL的分生孢子在M3S培养基中经28℃、200 r/min震荡培养8 h;过滤收集菌丝,用浓度为2.5%崩溃酶+1%溶壁酶的混合酶解液酶解3 h;整个试验中渗透压稳定剂为0.8 mol/L KCl。按10mL酶解液/0.5g菌丝的比例,可获得3×107个/mL的原生质体。该体系稳定、产生原生质体效率高,可以用于果生刺盘孢及其近似种的原生质体转化研究。2.建立了PEG介导的果生刺盘孢稳定、高效原生质体遗传转化体系,获得76个含hph基因的转化子,转化效率为3-4个/μgDNA。连续培养5代后,所有转化子均能在含潮霉素的培养基上生长;对转化子进行PCR检测和Southern杂交分析均表明,外源基因hph已成功插入并整合到果生刺盘孢的基因组中且能够稳定遗传。可以用于后续刺盘孢致病基因功能的研究。3.使用上述体系将质粒pCB1003和pRM7共转化果生刺盘孢,获得42株GFP标记的果生刺盘孢菌株。PCR检测和荧光显微观察均显示外源基因hph和gfp基因已整合到果生刺盘孢基因中。连续培养5代后,所有转化子均能在含潮霉素的培养基上生长,并稳定表达绿色荧光,表明插入基因能稳定遗传。随机挑选7株转化子,对其生物学特性和致病性进行检测,获得了两株在生物学特性和致病性上与野生型菌株均无显着差异的GFP标记的果生刺盘孢荧光菌株。可用于果生刺盘孢侵染结构和侵染机制的研究。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-25）
朱文静,马飞,孙春玉,蒋世翠,李珊珊[8]（2015）在《电击法介导的人参大片段DNA转化灵芝原生质体的研究》一文中研究指出为探讨灵芝原生质体电击转化的最佳条件,以人参大片段DNA(80kb)为材料,通过电击转化法,将其转入6d菌龄的灵芝原生质体中。使用2mm电击杯的最佳转化条件为平均外加电场861.34V、大片段DNA∶原生质体为1∶4;PCR检测结果显示,载体左区699bp处和右区397bp处电泳检测结果均显示有目的条带,初步判断人参大片段DNA已经转入灵芝原生质体中;镜检发现,转化子的菌丝分枝少,仍然存在锁状联合,菌丝体边缘更致密、整齐且生长速度更快,灵芝酸含量增高。(本文来源于《特产研究》期刊2015年01期）
徐齐君,胡小平,陈婷,赵俊兴[9]（2012）在《PEG介导的棉花枯萎病菌原生质体转化体系的建立》一文中研究指出通过酶解尖孢镰刀菌萎蔫专化型(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)FOV1和FOV4菌株幼嫩菌丝的细胞壁产生原生质体,PEG8000介导外源DNA随机插入的方法,分别获得具有抗潮霉素及荧光信号的转化子27个和39个,转化效率(以单位质量的DNA的转化子数计)分别为1350 mg-1和1950 mg-1。选取FOV1和FOV4菌株的代表性转化子各3株,经过5代继代培养后,其产孢量、荧光稳定性和致病性均无明显变化。因此,可以认为棉花枯萎菌原生质体的这种转化方法是一种比较稳定高效的遗传转化体系。(本文来源于《棉花学报》期刊2012年03期）
孙志光[10]（2012）在《农杆菌介导转化水稻纹枯病菌原生质体体系的构建及优化》一文中研究指出水稻(Oryza sativa L.)是世界上最重要的粮食作物之一,超过1/3的世界人口将其作为主要食物来源,是中国产量最大的粮食作物,年产1.9亿t左右。水稻纹枯病、白叶枯病、稻瘟病是水稻的叁大主要病害,对水稻产量造成严重的影响。关于白叶枯病、稻瘟病的研究已经展开的很多,而且很深入。而对于纹枯病的研究不多——纹枯病的致病机理不清楚,而且关于致病基因克隆的报道也很少。本研究通过构建双元质粒pCAMBIA1300sGFP,用农杆菌介导转化水稻纹枯病菌原生质体、菌丝,以潮霉素磷酸转移酶为筛选标记,将外源基因绿色荧光蛋白(GFP)基因导入水稻纹枯病菌基因组。为了制备水稻纹枯病菌原生质体,我们建立了水稻纹枯病菌原生质体制备、再生的最优体系；最佳的原生质体制备条件：通过纤维素酶和崩溃酶的组合对菌龄为12h的菌丝,35℃条件下,以pH5.2,0.6mol/L的硫酸镁为渗透压稳定剂,酶解3h,此条件下得到的原生质体产率高达16.7×108个/g；原生质体再生的最优条件为：在再生培养基RM上,酶解2.5h,菌龄为16h的原生质体,以0.6mol/L硫酸镁为渗透压稳定剂,26℃条件下培养时,再生效果最佳,同时比较了几种再生培养基对再生的影响,其中RM再生率最高,再生率最高可达39%,而IM再生效果相当,但是再生时间要长20h。PSA培养基再生效果不理想,再生效率仅为12%。通过农杆菌介导转化水稻纹枯病菌菌丝和原生质体,获得了6000株转化子；同时对农杆菌转化原生质体、菌丝的转化体系进行了优化,获得了稳定、有效的转化体系,最优转化体系为：农杆菌/原生质体比为200：1,预诱导和共转化同时以200μmol/乙酰丁香酮诱导,24℃下预诱导10h、共转化36h时,获得的转化效率最高,每106个原生质体可以获得600个转化子；通过比较农杆菌介导转化(ATMT)、限制性酶切插入(REMI)、PEG介导转化在转化效率方面的差异,可以得知,叁种方法都能获得转化子,但是农杆菌转化效率更高、更为稳定。获得转化子之后,通过正向遗传学分析突变子的表型——菌落形态、菌丝显微观察、生理生化、致病性,为探索控制表型、性状的基因提供丰富的材料。在生长速率方面,大部分突变子的平均生长速率都小于1.00mm/h(标准菌株的平均生长速率为1.34mm/h),其中突变子267的平均生长速率明显变缓,只有0.46mm/h；在致病性方面,276、130、115等突变子的致病性明显减弱,突变子267基本上不致病,而突变子340的致病性较标准菌株明显增强。以双元载体T-DNA的边界序列设计引物,已经获得2个突变子的右边界序列,通过与立枯丝核菌IG1-IA基因组序列进行比对,目前扩增的序列长度有限,无法预测基因功能,但是也为进一步克隆完整的基因序列奠定了基础。另外,将含有GFP基因的突变株侵染水稻,进行荧光显微观察,从亚细胞结构上观察水稻纹枯病菌侵染水稻的过程,与标准菌株侵染水稻相比,突变子的菌丝在荧光显微下可以清楚的看到菌丝发出绿色荧光,为之后观察纹枯病病菌-水稻互作提供了一个可靠的工具。(本文来源于《四川农业大学》期刊2012-05-01）
介导的原生质体转化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
粉红聚端孢是多种植物的重要病原菌。本研究通过酶解粉红聚端孢幼嫩菌丝细胞壁获得原生质体,用PEG介导原生质体转化将携带GFP基因和博来霉素抗性基因的外源DNA随机插入粉红聚端孢基因组,共获得博来霉素抗性菌株90株,转化效率达18个/μg。选取22株转化子荧光观察,发现均可表达荧光,菌株间荧光强度不同,其中10株转化子荧光表达较强。与野生型相比,突变菌株TR45的菌落生长、产孢量和致病力等生物学特性均未改变,在不含博来霉素的培养皿中继代培养10代荧光仍能稳定表达。本研究构建的高效原生质体制备和PEG介导粉红聚端孢遗传转化方法,可用于该菌基因功能研究,绿色荧光标记菌株可用于病菌侵入、田间监测、侵染循环等发生规律研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
介导的原生质体转化论文参考文献
[1].闫思远,顾沛雯.PEG介导枸杞内生真菌NQG8Ⅱ4菌株原生质体转化[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[2].戴蓬博,梁晓飞,张荣,孙广宇.基于PEG介导原生质体转化构建粉红聚端孢荧光标记[J].菌物学报.2019
[3].沈慧敏,李超,高利,刘太国,刘博.原生质体法介导真菌遗传转化的研究进展[J].植物保护.2017
[4].陈春梅,冯姣,陈志文,肖星,蒋敏敏.原生质体介导马尔尼菲青霉基因转化体系的优化[J].中国真菌学杂志.2016
[5].张龄丹.PEG介导玉米叶肉细胞原生质体瞬时基因转化体系的应用研究[D].安徽农业大学.2016
[6].韩小路,白静科,张玮,张荣,孙广宇.PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichumfructicola原生质体转化[J].西北农业学报.2016
[7].韩小路.PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichumfructicola原生质体转化体系的研究[D].西北农林科技大学.2015
[8].朱文静,马飞,孙春玉,蒋世翠,李珊珊.电击法介导的人参大片段DNA转化灵芝原生质体的研究[J].特产研究.2015
[9].徐齐君,胡小平,陈婷,赵俊兴.PEG介导的棉花枯萎病菌原生质体转化体系的建立[J].棉花学报.2012
[10].孙志光.农杆菌介导转化水稻纹枯病菌原生质体体系的构建及优化[D].四川农业大学.2012
论文知识图
