产纤维素酶大肠杆菌工程菌的构建和酶的表达

论文摘要

为了使大肠杆菌（Escherichia coli）具备生产纤维素酶的能力,从铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）PKC-001克隆碱性纤维素酶基因,进行密码子优化后连到载体pET-22b,转入大肠杆菌BL21（DE3）菌株,对工程菌进行表达优化并分析纤维素酶酶活。结果表明大肠杆菌工程菌能生产分子量约39 kD的纤维素酶,在培养温度20℃、摇床转速170 r/min、IPTG终浓度0.01 mmol/L的条件下,纤维素酶的产量最大;在酸性条件下,细胞内和细胞外的滤纸酶活力（FPA）分别为5.78 U/mL和1.13 U/mL,在碱性条件下检测不到滤纸酶活。显然,重组纤维素酶仅在酸性条件下有活力。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 碱性纤维素酶基因的克隆及分析
•   1.2 表达载体的构建
•   1.3 重组大肠杆菌表达条件的优化
•   1.4 Cytoplasmic Supernatant酶活分析
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 实验材料
•     3.1.1 培养基
•     3.1.2 药品和试剂
•     3.1.3 菌种和质粒
•   3.2 实验方法
•     3.2.1 纤维素酶基因的克隆
•     3.2.2 大肠杆菌的培养和诱导
•     3.2.3 蛋白质的定位和表达量的分析
•     3.2.4 酶活的测定

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈小玲,芦志龙,吴仁智,陈英,黄俊,陆琦,陈东

关键词: 纤维素酶,大肠杆菌,酶活,异源表达

来源: 基因组学与应用生物学 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 国家非粮生物质能源工程技术研究中心非粮生物质酶解国家重点实验室广西科学院广西生物炼制重点实验室

基金: 国家863计划项目(2012AA023202),广西科技攻关计划(桂科合14123001-6,桂科重14122004-3,桂科重14122004-1,桂科AB16380024,桂科合2015DD23055和1517-07)共同资助

分类号: Q78

DOI: 10.13417/j.gab.038.002620

页码: 2620-2626

总页数: 7

文件大小: 2137K

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