基于聚天冬氨酸骨架的药物/基因共运输载体的制备及细胞生物学特性

论文摘要

目的:以聚天冬氨酸作为主链,接枝胺基侧链和烷基侧链制备药物/基因共运输载体,考察不同侧链接枝率形成的纳米粒载体的载药及载基因性能,并筛选出性能较优的载体。方法:以D,L-天冬氨酸为单体,通过聚合反应合成聚天冬氨酸,然后以不同比例的N,N-二甲基亚二丙基三胺、3,3′-二氨基二丙胺和十二胺/十六胺/十八胺进行开环接枝,得到两亲性聚天冬氨酸-3,3′-二氨基二丙胺-N,N-二甲基亚二丙基三胺-烷基胺（PEEC）材料。采用氢核磁共振确认PEEC结构,用动态光散射法测定纳米粒胶束的粒径和表面电位,用芘荧光探针法测定临界胶束浓度,用琼脂糖凝胶电泳表征RNA阻滞能力,考查载药胶束的释放行为并且在细胞层面上研究材料的细胞毒性、细胞摄取和基因沉默效率。结果:成功合成了不同接枝率的PEEC材料,纳米粒胶束的粒径为250～350 nm,表面电位为27～45 mV,拥有较小的临界胶束浓度值,RNA阻滞的质量比约为0.8∶1;PEEC胶束有一定的细胞毒性,其载药能力和基因绑定能力良好,其中PEEC16-2在细胞水平上表现出较高的基因沉默效率。结论:PEEC具有共载药物/基因的能力,其中PEEC16-2胶束具有良好的药物包载和基因运输能力。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料和细胞
•   1.2 PEEC的合成及其结构表征
•     1.2.1 制备聚天冬氨酸
•     1.2.2 合成PEEC
•     1.2.3 氢核磁共振测定PEEC结构
•   1.3 PEEC胶束的制备及其理化性质测定
•     1.3.1 制备PEEC胶束
•     1.3.2 动态光散射仪和荧光分光光度计测定PEEC胶束理化性质
•   1.4 琼脂糖凝胶电泳测定PEEC胶束RNA阻滞能力
•   1.5 MTT法检测PEEC的细胞毒性
•   1.6 紫外-分光光度法测定PEEC/DTX载药量及包封率
•   1.7 透析法和高效液相色谱法测定PEEC/DTX体外释放能力
•   1.8 DAPI染色和流式细胞术检测PEEC细胞摄取能力
•   1.9 流式细胞术检测PEEC/siGFP绿色荧光蛋白的沉默效率
•   1.10 DAPI染色观察PEEC共载siRNA和药物的细胞摄取能力
•   1.11 统计学方法
• 2 结 果
•   2.1 PEEC的核磁共振氢谱表征
•   2.2 PEEC胶束的粒径、表面电位和临界胶束浓度
•   2.3 PEEC胶束阻滞RNA的能力
•   2.4 PEEC胶束的细胞毒性
•   2.5 PEEC/DTX的载药量和包封率
•   2.6 PEEC16-2的药物释放能力
•   2.7 PEEC16-2/siRNA的细胞摄取能力
•   2.8 PEEC16-2/siGFP的绿色荧光蛋白沉默效率
•   2.9 PEEC16-2/DOX/FAM-siRNA的细胞摄取能力
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 沈洁,王启闻,高东若,吕媛媛,汤谷平

关键词: 天冬氨酸,药物载体,基因治疗,纳米粒子,肿瘤

来源: 浙江大学学报(医学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工,药学

单位: 浙江大学城市学院医学院,浙江大学化学系,浙江大学医学院附属第一医院心血管内科

基金: 浙江大学城市学院教师科研基金(J16002),国家自然科学基金(81800442)

分类号: R943

页码: 657-667

总页数: 11

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