β-甘露聚糖酶AuMan5Aloop/H321G在乳酸克鲁维酵母中的高效表达

论文摘要

为制备食品级β-甘露聚糖酶,将来源于宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶突变体基因(AuMan5Aloop/H321G)克隆至表达质粒pKLAC1信号肽α-MF下游,构建重组表达质粒pKLAC1-AuMan5Aloop/H321G,并电转化乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）GG799。采用半乳糖诱导表达和酶活性分析获得了高水平表达的重组β-甘露聚糖酶突变酶(reAuMan5Aloop/H321G)的转化子GG799/AuMan5Aloop/H321G,其产酶活力为54.9 U/mL。SDS-PAGE分析显示,reAuMan5Aloop/H321G的表观相对分子质量约为55 000。经YPG培养基初始pH、摇瓶装液量以及诱导剂的种类、初始质量浓度和添加方式的初步优化,GG799/AuMan5Aloop/H321G所产酶活力较工艺优化前提高了254.6%,从而实现了reAuMan5Aloop/H321G在乳酸克鲁维酵母中的高效表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒、菌株和培养基
•   1.2 工具酶和试剂
•   1.3 PCR引物设计及合成
•   1.4 重组表达质粒的构建
•   1.5 乳酸克鲁维酵母转化子的筛选和表达
•   1.6 重组表达产物的分析
•   1.7 发酵产酶工艺的初步优化
•     1.7.1 诱导剂种类对产酶的影响
•     1.7.2 摇瓶装液量对产酶的影响
•     1.7.3 培养基初始pH对产酶的影响
•     1.7.4诱导剂初始质量浓度对产酶的影响
•     1.7.5 诱导剂添加方式对菌体生长和产酶的影响
• 2 结果与分析
•   2.1 重组表达质粒的构建
•   2.2 重组乳酸克鲁维酵母的构建及筛选
•   2.3 发酵产酶工艺的初步优化
•     2.3.1 诱导剂种类对GG799/Auman5Aloop/H321G产酶的影响
•     2.3.2 摇瓶装液量对GG799/Auman5Aloop/H321G产酶的影响
•     2.3.3 培养基初始pH对GG799/Auman5Aloop/H321G产酶的影响
•     2.3.4 诱导剂初始质量浓度对GG799/Auman5Aloop/H321G产酶的影响
•     2.3.5 诱导剂添加方式对GG799/Auman5Aloop/H321G菌体生长和产酶的影响
•   2.4 重组表达产物的分析
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 唐诗涵,李雪晴,袁风娇,李剑芳,邬敏辰

关键词: 甘露聚糖酶,乳酸克鲁维酵母,表达,诱导剂,发酵工艺

来源: 食品与生物技术学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学食品学院,江南大学无锡医学院

基金: 国家自然科学基金项目（31271811）,江苏省普通高校研究生科研创新计划项目（SJLX16-0472）

分类号: Q786

页码: 26-33

总页数: 8

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