EV71临床毒株分离及其VP1单克隆抗体制备

论文摘要

目的对手足口病肠道病毒71型（EV71）流行临床株进行分型和鉴定,制备抗EV71外壳蛋白VP1的特异性单克隆抗体,为EV71生物学特征研究和疫苗株的筛选奠定基础。方法从患者咽拭子中分离出流行的EV71毒株,原核表达纯化该毒株EV71 VP1衣壳蛋白,以此蛋白为免疫原制备VP1的特异性小鼠单克隆抗体,采用免疫荧光法（ELISA）观察抗体能否特异性识别EV71感染的细胞。结果测序结果显示分离出的EV71病毒株为肠道病毒C4亚型。筛查出12株分泌针对VP1蛋白的抗体杂交瘤细胞株,将其中结合特异性和结合力最强的一株命名为11T12。复苏的11T12活化后接种于液体石蜡免疫的小鼠腹腔,收集腹水经过protein-G柱纯化后对抗体的效价进行ELISA评价,结果显示纯化抗体稀释10万倍后仍可以结合蛋白,证实成功制备了抗EV71 C4亚型外壳蛋白VP1单克隆抗体。抗体结合特征分析结果显示该抗体具有特异性识别能力。结论从感染的临床样本中分离到一株C4型EV71毒株,以该病毒VP1蛋白为免疫原获得一株相应的单克隆抗体11T12,该单克隆抗体的获得为病毒的检测、试剂盒的研发提供了核心材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 临床病毒株分离
•   1.3 EV71 VP1原核表达载体的构建
•   1.4 EV71 VP1表达鉴定
•   1.5 细胞融合与筛选
•   1.6 免疫荧光
•   1.7 Western Blot
•   1.8 EV71 VP1单克隆抗体大量制备
• 2 结果
•   2.1 临床EV71毒株分离、测序
•   2.2 EV71 VP1表达鉴定
•   2.3 单克隆抗体制备
•   2.4 免疫荧光和Western Blot验证抗体结合病毒蛋白活性
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄薇园,李建军,陈旺生,李么明

关键词: 手足口病,肠道病毒型,单克隆抗体,外壳蛋白

来源: 中国热带医学 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 海南省人民医院放射科,武汉生物工程学院湖北省病毒载体(基因治疗)工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金(No.81460272)

分类号: R392

DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2019.06.03

页码: 512-515

总页数: 4

文件大小: 1045K

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