鼠伤寒沙门菌sseK3基因缺失株的构建及其生物学特性研究

论文摘要

通过检测sse K3基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供了新思路。通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除sse K3基因并成功构建缺失菌株的回复菌株,进而检测其生物学和免疫学特性。结果显示,PCR、双酶切及测序结果证实成功构建了sse K3缺失株及其回复菌株。生物学特性研究表明,sse K3缺失菌株和亲本株SL1344血清型均为1, 4,[5], 12:i:1, 2,生化特性和生长速度无明显差异,且sse K3缺失株能够稳定遗传;然而sse K3缺失株的生物被膜形成能力明显下降;粘附和侵入结果显示,sse K3缺失株的粘附和侵入能力较亲本菌株无明显变化,但在巨噬细胞内的增殖能力发生了显著下降。此外,sse K3缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为2.96×108CFU,毒力较亲本株SL1344降低约1035倍;免疫保护效力实验显示:sse K3缺失株免疫后第17天保护率为66.7%;在免疫小鼠后的第14天血清Ig G达到最高水平;回复菌株与亲本亲株生物学特性无显著性差异,基本回复到野生型水平。本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌sse K3基因缺失株,可稳定遗传,毒力显著降低,具有良好的免疫原性,推测sse K3对鼠伤寒沙门菌的毒力具有重要的调节作用,为探究该基因的功能及评估其作为用于减毒活疫苗的候选株奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒、试剂和实验动物
•   1.2 引物设计与合成
•   1.3 重组自杀性质粒p RE112Δssek3的构建及鉴定
•   1.4 鼠伤寒沙门菌ssek3缺失株的构建及筛选
•   1.5 鼠伤寒沙门菌sseK3互补菌株的构建与鉴定
•   1.6 鼠伤寒沙门菌sseK3缺失株生物学特性检测
•     1.6.1 sseK3缺失株的表型鉴定及生化特性分析
•     1.6.2 sseK3缺失株遗传稳定性的测定
•     1.6.3 sseK3缺失株生长曲线的绘制
•     1.6.4 sseK3缺失株生物被膜的形成及主要成分检测
•     1.6.5 sseK3缺失株对上皮细胞黏附和侵入的检测
•     1.6.6 sse K3缺失株在巨噬细胞内增殖的检测
•     1.6.7 sseK3缺失株半数致死量（LD50）的测定
•     1.6.8 sseK3缺失株免疫小鼠IgG抗体的测定
•     1.6.9 sseK3缺失株免疫小鼠保护率的测定
•   1.7 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 重组自杀性质粒p REΔsseK3的构建
•   2.2 sseK3缺失株的筛选及鉴定
•   2.3 回复菌株SL1344CΔsseK3的构建
•   2.4 sseK3缺失株生物学特性检测
•     2.4.1 sseK3缺失株的表型鉴定
•     2.4.2 sseK3缺失株遗传稳定性测定
•     2.4.3 sseK3缺失株生长特性鉴定
•     2.4.4 sseK3缺失株生物被膜的检测
•     2.4.5 sseK3缺失株对HeLa细胞黏附、侵入的检测
•     2.4.6 sseK3缺失株在巨噬细胞内的增殖的检测
•     2.4.7 sseK3缺失株半数致死量（LD50）的测定
•     2.4.8 sseK3缺失株免疫小鼠血清特异性Ig G抗体的检测
•     2.4.9 sseK3缺失株免疫保护率的测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 国内会议

作者: 杜付玉,廖成水,郁川,张春杰,程相朝

关键词: 鼠伤寒沙门菌,基因,缺失株,回复菌株,生物学特性

来源: 中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会 2019-07-27

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南科技大学动物科技学院/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳职业技术学院

分类号: S852.61

页码: 376-388

总页数: 13

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