野三七鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达

论文摘要

目的:对野三七中可能参与三萜皂苷合成的关键酶鲨烯环氧酶基因（Pvf SE）进行克隆,并对其进行生物信息学分析和原核表达。方法:采用Trizol法提取野三七根的总RNA并反转录为c DNA第一链,基于野三七的转录组数据,设计Pvf SE基因序列特异性引物,克隆基因全长,利用相关软件对该基因进行生物信息学分析,构建p Mal-c2X-Pvf SE原核表达载体,在大肠埃希菌中诱导表达重组蛋白。结果:Pvf SE开放阅读框为1 887 bp,编码628个氨基酸,蛋白相对分子质量为68. 8 k Da,理论等电点为9. 28,脂肪系数为95. 18,亲水性系数为-0. 060,不稳定指数为40. 36,属于不稳定蛋白。生物信息学分析表明,Pvf SE具有2个跨膜结构域,无信号肽,可能定位在叶绿体或细胞质膜上,具有FAD/NAD（P）结合域和鲨烯环氧酶结构域,属于混合型蛋白。Pvf SE与西葫芦和芒柄花中参与三萜皂苷合成的鲨烯环化酶（Cp SE1,Cp SE3,Os SE1,Os SE2）亲缘关系较近。此外,在大肠埃希菌BL21（DE3）中成功表达Pvf SE的重组蛋白。结论:克隆得到Pvf SE基因,并在大肠埃希菌中成功表达其重组蛋白,为进一步研究Pvf SE的功能和解析野三七中三萜皂苷生物合成途径奠定了基础。

论文目录

• 1 材料
• 2 方法
•   2.1 野三七总RNA提取及cDNA合成
•   2.2 PvfSE基因克隆
•   2.3 PvfSE基因的生物信息学分析
•   2.4 SE基因的原核表达载体构建及表达
• 3 结果与分析
•   3.1 PvfSE基因的克隆
•   3.2 PvfSE基因编码蛋白序列分析
•     3.2.1 PvfSE蛋白质序列的基本性质
•     3.2.2 PvfSE蛋白的空间结构
•     3.2.3 氨基酸序列比对及进化分析
•   3.3 野三七PvfSE基因的原核表达载体构建及诱导表达
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王宝婕,朱灵英,周青青,张帅,马晓惠,徐福荣

关键词: 野三七,鲨烯环氧酶,基因克隆,生物信息学分析,原核表达

来源: 中国实验方剂学杂志 2019年22期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,农作物

单位: 云南中医药大学中药学院

基金: 国家自然科学基金地区科学基金项目(81760690,81460581),云南省科技厅科技计划项目(2018FB144),云南省教育厅科学研究基金项目(2017ZZX288)

分类号: S567.53;Q943.2

DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20192212

页码: 147-153

总页数: 7

文件大小: 701K

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