一、HGV RNA转录体的感染性研究（论文文献综述）
周冬[1]（2019）在《重组柯萨奇病毒CA16-A6VP的构建及其感染性研究》文中提出近年来在手足口病（Hand,foot,and mouth disease,HFMD）中,柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A16,CV-A6）是爆发流行中较活跃的病原体之一。有相关数据指出,柯萨奇病毒A组6型可以通过人恶性胚胎横纹肌瘤细胞（RD）进行培养,却很难在常用的疫苗生产基质细胞（如Vero、MRC-5等）中进行培养,从而给柯萨奇病毒A组6型病毒疫苗的研发带来了极大的障碍,目前临床上缺乏相关对CV-A6治疗的特效药物和疫苗,所以进行CV-A6的细胞感染机制研究,及相关单价多价疫苗的开发已迫在眉睫。CV-A6复制期间不经历DNA的中间阶段,使重组DNA技术不能直接适用于分析和病毒基因组的研究,同时病毒RNA分子的体外稳定性也给相关研究的开展产生了很大的困难。这使我们非常需要人为控制编辑RNA病毒基因组的操作技术。经过科学家们不断的改进,反向遗传学技术应运而生,此技术可以将基因操作技术针对病毒基因组的全长c DNA进行开展。这项技术,使得RNA病毒在人为条件下经历DNA的中间阶段,这有助于我们在DNA水平上进行CV-A6病毒深入研究,同时我们也通过相关的基因水平上的操作对CV-A6基因组进行改造,以探究CV-A6相关细胞感染性机制,并尝试构建一种同时具有CV-A6和CV-A16两种抗原位点的重组病毒,为后续研发柯萨奇CV-A6与CV-A16双价疫苗提供基础。在第一部分中,我们首先提取并分离了手足口病病人疱疹样标本中的CV-A6病毒,通过空斑纯化得到了七株病毒株,并分别对七株病毒株展开细胞感染性的相关研究,我们发现七株病毒株都能顺利感染人恶性胚胎横纹肌瘤细胞（RD）。但是这七株病毒株却无法在Vero细胞上感染,这也给CV-A6疫苗开发带来不小的阻碍。而作为手足口病柯萨奇病毒中另一家族成员的CV-A16却能同时感染RD与Vero细胞,这引起了我们的兴趣与重视。最后,我们进行了CV-A6毒株相关的鉴定,通过电泳及测序鉴定了CV-A6七个毒株的基因序列,在此基础上利用软件分析了其系统发育树图谱,并测定了各毒株的滴度,选取了滴度最高的CV-A6病毒株XS45进行后续实验探究。第二部分中我们利用反向遗传技术分别构建了CV-A6和CV-A16的全长c DNA。并在此研究基础上,利用Overlap PCR拼接出了重组病毒（CA16-CA6VP）基因组c DNA,重组病毒（CA16-CA6VP）c DNA序列是由CA6-VP段替换原CA16-VP段,并在上下游引入了适合的酶切位点与T7启动子序列得到的。将上述三种病毒的c DNA通过与p BM16A-TOPO载体的连接,我们构建了三种p BM16A-CA6,p BM16A-CA16,p BM16A-Re（CA16-A6VP）感染性克隆。通过测序鉴定,与设计的理论序列一致,为我们第三部分鉴定及其感染性探究打下了基础。第三部分中我们将对构建的三种p BM16A-CA6,p BM16A-CA16,p BM16A-Re（CA16-A6VP）感染性克隆展开细胞感染性研究相关的探索。我们将三种感染性克隆通过设计的酶切位点双酶切线性化,经体外转录成RNA,然后通过脂质体共转染细胞,盲传三代适应,展开对重组病毒的感染性相关研究。我们对三种盲传适应的重组病毒的基因组序列进行分析,病毒间接免疫荧光,细胞显微镜形态学观察,滴度检测等。我们对比发现,通过反向遗传技术构建得到的重组CV-A6,CV-A16具有与亲本母毒株相似的性状,在细胞感染性上基本一致。而构建得到的重组病毒（CA16-A6VP）是以CV-A16为基本,将CV-A6-VP替换了其VP段。在后续滴度测定中,重组病毒其滴度高于母本病毒CV-A16和CV-A6,但在细胞感染性上表现了与CV-A6病毒感染性一致的情况,即能感染RD细胞却无法正常感染Vero细胞。这一细胞感染现象提示我们病毒VP段结构可能是病毒感染细胞相关位点的重要结构基础,病毒VP段中可能存在相关基因调控蛋白,影响病毒吸附细胞途径。实验成果:1.成功从病人疱疹样品中分离（A:XS45,B:JB66,C:JB70,D:IB69,E:JB71,F:XS46,G:JB68）七个毒株并对细胞感染性展开研究。2.研究利用反向遗传技术构建CV-A6,CV-A16感染性克隆并转染细胞,经全基因测序分析,RT-PCR,免疫荧光鉴定,成功获得CV-A6,CV-A16重组病毒。3.CV-A6,CV-A16重组病毒和母本野毒株表现相同的细胞感染性。4.在此基础上,构建的重组病毒（CA16-A6VP）毒力显着高于原母本双亲。重组病毒（CA16-A6VP）表现与CV-A6母本相同的细胞感染性,感染RD细胞,无法在Vero细胞上培养。5.CV-A6的细胞感染性感染应与其病毒VP结构有关,VP结构上可能有相关区域（P1,P2,P3）位点调控其细胞感染性。6.已经建立一套稳定的上游分子生物学技术,通过此技术可以替换,突变相关结构及位点,展开对柯萨奇病毒的相关分子生物学研究及双价,多价嵌合疫苗的研究。综上所述,利用反向遗传技术,我们就能人为构建适于研究的重组病毒,可以尝试通过设计位点以及定向突变,或者替换整段基因的方式来研究病毒基因相关的功能,进一步深入研究病毒感染细胞的致病机理,为研制多价疫苗提供了很好的平台和材料,为后续研发疫苗等各方面研究打下基础。
邓玲玲[2]（2013）在《重组辛德毕斯病毒的制备及其功能特性的研究》文中提出辛德毕斯（Sindbis virus, SINV）病毒隶属于披膜病毒科（Togavirudea）甲病毒属（Alphavirus），感染人类可引发发热、倦怠、头痛、关节痛和皮疹等症状，被称为“辛德毕斯综合热”。SINV在形态、结构、复制、翻译及发病机理等方面均集中体现了动物病毒的特征，并且其为温和型病原体，操作安全性高，目前已作为模型病毒被广泛应用于动物病毒基本规律的研究。SINV在感染BHK、Vero等哺乳动物细胞的同时，也可以感染C6/36等昆虫细胞，但该病毒在活体动物中的感染路径和组织嗜性并不清楚，进一步探讨其感染的分子机制有赖于可视化重组病毒的制备。脑内接种SINV可致3日龄乳鼠死亡，而高日龄小鼠在接种SINV后可自愈。近期研究表明，经过传代培养或定点突变后的筛选病毒可使高日龄小鼠死亡。但是SINV神经毒力株特异性的分子机理还有待于进一步研究。XJ-160病毒是上世纪90年代从新疆采集的蚊虫标本分离到的一株SIN病毒。本课题组多年来针对其开展了一系列工作，包括全基因组序列测定和分析，感染性克隆构建等。为了进一步探讨辛德毕斯病毒的组织嗜性，本研究以XJ-160病毒感染性克隆为分子基础，通过融合PCR、体外转录和脂质体转染等方法构建新型增强型绿色荧光蛋白（Enchanced green fluorescent protein，EGFP）报告基因标记的SINV，并利用标记病毒进行了细胞易感性研究。同时，为了探讨决定SINV神经毒力日龄依赖性的分子机制，本研究还通过体外定点突变等方法对其E2基因上的关键毒力位点进行突变，并考察E2基因定点突变SINV的神经毒力特征。本研究利用XJ-160病毒反向遗传学技术平台，获得了EGFP标记的SINV和4株突变病毒。恢复病毒的空斑形态和增殖趋势均与亲本病毒相似。利用标记病毒进行细胞嗜性研究，结果发现SINV对肾癌细胞具有特异性侵染能力，为肾癌治疗带来了新的契机，对于开发相应的肿瘤治疗手段具有重要的指导意义。同时，乳鼠神经毒力实验结果提示，E2基因上关键位点突变改变了XJ-160病毒致小鼠死亡的日龄，SINV致小鼠死亡的分子机理和确切的结果还需进一步加以验证。本研究制备的报告基因标记SINV具有可视化特征，可广泛应用于抗病毒药物筛选、病毒在活体动物内感染路径观察等研究。而E2基因定点突变病毒的构建也为进一步阐明SINV致小鼠死亡的神经毒力的分子机理奠定了基础。
冯晓燕,赵秀萍,张贺秋[3]（2013）在《庚型肝炎病毒感染的研究进展》文中进行了进一步梳理1967年,Deinhardt F等用患有急性肝炎的外科医生（G.B.）的血清接种入狨猴体内导致肝炎发生,狨猴血清中可能含有的致病因子被命名为GB病毒。1995年,Simons等在小绢猴体内鉴定出2种黄病毒科家族新成员,GBV-A和GBV-B。随后,又有2个实验室分别从非甲非乙型肝炎患
杨扬,谭文杰[4]（2012）在《RNA病毒感染性克隆技术及其应用》文中进行了进一步梳理为实现对RNA病毒基因分子水平上的操作与研究,可将病毒基因组RNA体外转换成cDNA,构建出cDNA克隆,通过cDNA克隆与重组技术实现对RNA病毒基因分子水平的修饰,从而为病毒基因组的结构和功能研究提供有效的方法。这种方法是现代实验病毒学非常有用的工具,称为RNA病毒感染性克隆技术或反向遗传学技术。我们对该技术及其应用进行简要综述。
王永智,王文博,许刚,曹明媚,任浩,戚中田[5]（2011）在《丙型肝炎病毒JFH1 NS5A基因对HC-J4病毒复制和感染性的影响》文中认为目的探讨丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）2a FL-J6JFH NS5A基因置换对1b型HC-J4复制和感染性的影响,为建立HCV 1b细胞模型奠定基础。方法将JFH1 NS5A置换至HC-J4基因组内,构建嵌合全长基因组HC-J4/JFHNS-5A。体外制备野生型HC-J4、嵌合体及FL-J6JFH的RNA转录体,脂质体介导转染Huh-7.5细胞,采用间接免疫荧光法（IFA）检测转染细胞内的蛋白表达,HCV负链RNA特异性RT-PCR法和荧光定量PCR方法（FQ-PCR）检测基因复制情况。转染后不同时间收集转染细胞上清,感染naive Huh-7.5细胞,观察其感染性。结果 IFA未观察到野生型HC-J4和嵌合体转染细胞内HCV蛋白的表达,但在转染后18 d内的各个时间点,均检测到HCV负链RNA,表明嵌合体和野生型HC-J4在转染细胞内呈低水平复制。转染后第9天和12天,FQ-PCR检测表明,嵌合体转染细胞内HCV RNA水平明显高于野生型转染的细胞（P<0.05）。不同时间点转染细胞上清感染naive Huh-7.5细胞后,IFA均未观察到表达HCV蛋白的阳性细胞。结论 JFH1 NS5A蛋白虽然在一定程度上可提高1b型HC-J4株在体外培养细胞中的复制能力,但还不足以产生能够检测到的感染性病毒颗粒。HCV 1b细胞模型的建立尚受其他因素的影响。
龚晓莹,周阳[6]（2010）在《庚型肝炎病毒感染的研究进展》文中研究指明庚型肝炎病毒（HGV）是发现时间尚短的嗜肝病毒,可能是病因不明肝炎的病因之一。现就HGV的病原生物及HGV感染的流行病学、临床表现、治疗及预后等方面相关研究进展进行综述。
贡树基,赵卫,张文炳,周浩,陈丽丹,张复春,严子锵,曹虹[7]（2009）在《登革病毒2型全长cDNA感染性转录体的构建和鉴定》文中提出为构建登革病毒感染性克隆,针对登革病毒2型基因组全长cDNA的体外转录方法及感染性转录体进行研究。采用长链RT-PCR技术,扩增DEN2NGC株全长基因组cDNA,以之为模板,用SP6RNA聚合酶系统制备体外转录RNA转录体,分别经乳鼠脑内接种及电穿孔转染BHK-21细胞,观察其感染效应。并从受染鼠脑和病变细胞中提取总RNA,进行RT-PCR扩增、克隆测序以及电镜观察。结果发现,从感染鼠脑和细胞中经RT-PCR均可扩增出病毒特异的基因片段,大小与预期一致;并从乳鼠脑组织和BHK-21细胞中观察到恢复病毒颗粒。上述结果表明本文成功构建的DEN2 NGC株病毒全长cDNA的体外转录体具有感染性,乳鼠脑内接种途径与电穿孔转染细胞一样可成为体外转录体感染宿主细胞、获得恢复病毒的方法。
吕建亮[8]（2008）在《口蹄疫病毒泛亚型O/CHINA/99株（全长、缺失和置换）cDNA分子克隆构建和感染性鉴定》文中指出FMD（Foot-and-Mouth Disease ,FMD）是严重威胁世界畜牧业经济及人类健康的烈性传染病,是牛、羊、猪等主要畜种的头号杀手。该病病原FMDV（Foot-and-Mouth Disease virus,FMDV）属于小RNA病毒,具有高度的变异性和广泛的宿主谱,关于其致病的分子机制、抗原变异的分子机理和宿主嗜性,至今还不是十分清楚。为了研究其致病机制、抗原变异的分子机理和宿主嗜性,我们首次构建了FMDV牛源泛亚型O/CHINA/99株的3株不同感染性cDNA分子克隆。1. FMDV O/CHINA/99株全长cDNA分子克隆的构建和感染性鉴定设计并合成了覆盖O/CHINA/99株基因组的9条引物,从感染牛源O/CHINA/99株的乳鼠胴体中提取病毒基因组RNA,采用RT-PCR方法分别扩增出4条目的基因片段（S、C、Z和E）。利用片段两端的限制性内切酶位点,将各基因片段分别插入到pOK12载体中,构建成O/CHINA/99株基因组的全长cDNA分子克隆。用脂质体转染法将转录物RNA导入BHK-21细胞,24h后可观察到典型的FMDV致细胞病变效应。分别使用RT-PCR法和乳鼠皮内接种法对拯救的病毒进行鉴定,结果表明拯救到了特定的FMDV。以上鉴定结果表明,我们已成功构建了O/CHINA/99株全长感染性cDNA分子克隆,并拯救出基因工程病毒。这将为研究FMDV基因组的结构与功能、探讨PMDV的分子致病机制以及宿主嗜性奠定了良好的基础。2. FMDV O/CHINA/99缺失毒株的全长cDNA分子克隆的构建和感染性鉴定关于PKs的功能目前尚不太清楚,有报道称PKs与FMDV的宿主嗜性和毒力有一定的关系。为揭示FMDV翻译、分子致病机制以及阐明PKs基因缺失导致的病毒宿主嗜性改变的原因,我们设计并合成了O/CHINA/99株基因组5条引物,利用RT-PCR扩增各基因片段,成功构建0/CHINA/99缺失毒株全长cDNA分子克隆。并拯救出0/CHINA/99特定缺失的基因工程病毒,这为进一步探索FMDV致病的分子机制及宿主嗜性奠定了良好的基础。3.嵌合病毒pOKTAW97/CHINA99的全长cDNA分子克隆的构建和感染性鉴定IRES是蛋白翻译顺式作用元件,二级结构有4个结构域,IRES不依赖帽结构指导病毒蛋白合成。由于IRES的空间结构发生变化,而结合的宿主真核翻译起始因子不同,所以IRES在病毒翻译和宿主嗜性中发挥很重要的作用。为揭示FMDV蛋白翻译、分子致病机制以及阐明IRES空间结构改变导致的病毒宿主嗜性改变的原因,我们以牛源FMDV O/CHINA/99株的感染性cDNA为骨架,用猪源FMDV的IRES置换相应的区段,构建了FMDV型内嵌合病毒pOKTAW97/CHINA99的全长cDNA分子克隆,并得到置换IRES的嵌合病毒。这将为研究FMDV基因组的IRES的结构与功能、探讨FMDV的分子致病机制以及宿主嗜性创造了良好的条件。
曹利利,李建华,张西臣,张国才,宫鹏涛,杨举[9]（2008）在《犬贾第虫病毒感染性体外转录体制备及转染试验》文中提出目的研究犬贾第虫病毒全长cDNA体外RNA转录体的感染性,为进一步研究犬贾第虫病毒的特性、深入阐明病毒的致病机理奠定基础。方法根据已知的GCV（长春株）基因序列设计一套特异性重叠引物,利用RT-PCR技术,构建感染性犬贾第虫病毒基因组全长cDNA;用T7 RiboMAXTM Express Large Scale RNA Production System制备体外转录体,电穿孔方法感染无病毒株犬贾第虫滋养体,通过提取总核酸和超薄切片电镜观察感染情况。结果成功构建犬贾第虫病毒基因组全长cDNA,体外转录体电穿孔后72 h,提取的总核酸中发现6.2 kb的dsRNA带,电镜观察到完整的病毒粒子。结论该转录体具有感染性,可以在无病毒株犬贾第虫滋养体内复制表达,为进一步研究GCV奠定基础。
朱光泽[10]（2007）在《戊型肝炎流行病学和戊型肝炎病毒全基因克隆与表达研究》文中提出本研究应用酶联连免疫吸附分析法（ELISA）和本课题组建立的免疫捕获多联RT-PCR方法,对吉林省人群和动物群戊型肝炎病毒的血清抗体和HEV RNA进行了检测和分析。克隆猪戊型肝炎病毒吉林分离株Ch-S-1全基因组。并对全长cDNA克隆的表达进行了初步鉴定。对吉林省猪血清HEV抗体阳性率为86.61%（427/493）,从猪胆汁中检测到的HEV RNA片断（348 bp）序列分析为基因Ⅳ型。牛、羊、鹿、鸡、马血清HEV抗体阳性率为45.86%（122/266）、7.52%（7/93）、43.61%（348/798）、4.87%（18/369）、15.73%（31/197）。对吉林省人群血清（7,514份）HEV抗体阳性率为22.79%。其中男性阳性率为34.27%、女性阳性率为10.88%。20岁以下人群HEV抗体阳性率低于1.00%。HEV抗体男女抗体阳性率之比为2.64:1。HEV在各年龄段人群中均有流行,在不同职业人群中流行情况不同。从急性戊肝患者血清中检测到HEV RNA（348 bp）,序列分析为基因Ⅳ型。设计8对PCR引物分片段扩增猪戊型肝炎病毒长春分离株Ch-S-1全基因,两端采用RACE法扩增,得到HEV Ch-S-1全长基因组（GenBank登录号EF077630） 7,261bp。HEV Ch-S-1全序列与已报道的36株人源和猪源HEV序列比较,其基因结构特征与HEV IV型一致。用质脂体转染法将pBlueScriptⅡKS（-）-HEV体外转录得到的HEV基因组RNA转染至HepG2细胞,并对其克隆的表达进行了初步鉴定。
二、HGV RNA转录体的感染性研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、HGV RNA转录体的感染性研究（论文提纲范文）
（1）重组柯萨奇病毒CA16-A6VP的构建及其感染性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1.CV-A6的流行病学 |
| 2.CV-A6的生物学特性 |
| 3.反向遗传学技术在RNA病毒中的应用 |
| 4.研究意义和目的(基本策略) |
| 第一部分 CV-A6病毒的筛选和细胞感染性的研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.小结 |
| 第二部分 重组柯萨奇病毒(CA16-A6VP)感染性克隆的构建 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.小结 |
| 第三部分 重组病毒(CA16-A6VP)鉴定及感染性研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料 |
| 3.结果 |
| 4.小结 |
| 讨论与建议 |
| 课题总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 RNA病毒反向遗传技术及其应用 |
| 参考文献 |
| 附件1 攻读学位期间发表论文目录 |
| 附件2 |
（2）重组辛德毕斯病毒的制备及其功能特性的研究（论文提纲范文）
| 学位论文数据集 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 我国辛德毕斯病毒的研究概况 |
| 1.3 辛德毕斯病毒基因组结构与生物学特征 |
| 1.4 研究目的与研究内容 |
| 第二章 报告基因标记的辛德毕斯病毒的制备及应用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 菌株、质粒及细胞 |
| 2.2.2 试剂及工具酶 |
| 2.2.3 主要试剂配制 |
| 2.2.4 主要仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 含 EGFP 报告基因重组质粒的构建 |
| 2.3.2 含 EGFP 报告基因重组质粒的鉴定 |
| 2.3.3 报告基因标记辛德毕斯活病毒的拯救 |
| 2.3.4 报告基因标记拯救病毒的鉴定 |
| 2.3.5 标记病毒遗传稳定性的检测 |
| 2.3.6 标记病毒的滴度测定 |
| 2.3.7 标记病毒对各种细胞的感染性检测 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 报告基因标记 SINV 重组质粒的构建策略 |
| 2.4.2 报告基因标记 SINV 重组质粒的构建与鉴定 |
| 2.4.3 报告基因标记 SINV 的制备 |
| 2.4.4 重组 EGFP 标记病毒的稳定性检测 |
| 2.4.5 重组标记病毒的滴定及空斑形态 |
| 2.4.6 拯救病毒对各种细胞的感染性分析 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 定点突变辛德毕斯病毒的制备与鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料 |
| 3.2.1 菌株、质粒及细胞 |
| 3.2.2 试剂及工具酶 |
| 3.2.3 主要试剂配制 |
| 3.2.4 主要仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 E2 定点突变体的构建与鉴定 |
| 3.3.2 E2 定点突变病毒的获得 |
| 3.3.3 E2 定点突变病毒的鉴定 |
| 3.3.4 乳鼠神经毒力实验 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究成果及发表的学术论文 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 |
（3）庚型肝炎病毒感染的研究进展（论文提纲范文）
| 1 HGV的分子生物学 |
| 1.1 基因结构与编码蛋白质 |
| 1.2 亲嗜性 |
| 1.3 基因型 |
| 2 HGV感染的流行病学与输血安全 |
| 3 HGV感染的检测 |
| 4 HGV感染的致病性 |
| 4.1 单独HGV感染 |
| 4.2 HGV与HBV和/或HCV重叠感染 |
| 4.3 HGV与HIV重叠感染 HGV |
| 4.4 HGV感染与再生障碍性贫血 |
| 5 展望 |
（4）RNA病毒感染性克隆技术及其应用（论文提纲范文）
| 1 全长c DNA感染性克隆的构建 |
| 1.1 基因组全长c DNA的获得 |
| 1.2 感染性转录体制备 |
| 1.3 细胞转染及感染性克隆的检测 |
| 2 病毒拯救的效率 |
| 3 RNA病毒的c DNA感染性克隆的应用 |
| 3.1 研究病毒的性质 |
| 3.2 建立动物模型 |
| 3.3 构建新的基因工程载体 |
| 3.4 研制新型疫苗 |
| 4 结语 |
（6）庚型肝炎病毒感染的研究进展（论文提纲范文）
| 1 病原学及分子生物学特征 |
| 2 流行病学 |
| 3 临床表现 |
| 3.1 临床分型及症状体征 |
| 3.2 血清学改变 |
| 3.3 病理 |
| 4 治疗及预后 |
（8）口蹄疫病毒泛亚型O/CHINA/99株（全长、缺失和置换）cDNA分子克隆构建和感染性鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景、目的和意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 FMDV 5'UTR 的VPg |
| 1.2.2 FMDV 5'UTR 的假结节 |
| 1.2.3 IRES在病毒翻译中的作用 |
| 1.2.4 3'UTR 的功能及其与高级结构的关系 |
| 1.2.4.1 3'UTR 对基因组复制的调控 |
| 1.2.4.2 3'UTR对基因组翻译的调控 |
| 1.2.4.3 3'UTR与蛋白质因子间复杂的相互作用 |
| 1.2.5 影响FMDV宿主嗜性的基因 |
| 1.2.5.1 |
| 1.2.5.2 |
| 1.2.5.3 |
| 1.3 RNA 病毒的反向遗传学研究 |
| 1.3.1 概述 |
| 1.3.2 早期的反向遗传学的研究 |
| 1.3.3 病毒反向遗传操作技术的建立 |
| 1.3.3.1 构建病毒基因组全长cDNA克隆 |
| 1.3.3.2 感染性转录物的产生 |
| 1.3.3.3 从cDNA克隆拯救感染性病毒 |
| 1.3.4 正链RNA 病毒的反向遗传学操作 |
| 1.3.5 负链RNA 病毒 |
| 1.3.6 影响构建感染性克隆的限制性因素 |
| 1.3.7 感染性克隆的产生与鉴定 |
| 1.3.8 病毒基因组功能的研究 |
| 1.3.9 新型疫苗的研究 |
| 1.3.10 基因治疗 |
| 1.4 结语 |
| 1.5 研究内容和方法 |
| 第二章 口蹄疫病毒泛亚型0/CHINA/99 株全长cDNA 分子克隆构建和感染性鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.2.1 引物的设计与合成 |
| 2.1.2.2 全长cDNA 的克隆和构建 |
| 2.1.2.3 FMDV O/CHINA/99 株基因组全序列的扩增 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 感染性克隆载体的鉴定 |
| 2.2.2 体外转录物RNA的制备 |
| 2.2.3 转染BHK-21细胞 |
| 2.2.4 乳鼠实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 口蹄疫病毒泛亚型 0/CHINA/99 缺失毒株全长 cDNA 分子的克隆构建和感染性鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 毒株和工程菌 |
| 3.1.2 主要工具酶及试剂盒 |
| 3.1.3 5'端片设计与合成 |
| 3.1.4 FMDV O/CHINA/99株基因组全序列的扩增 |
| 3.1.5 全长cDNA的克隆和构建 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 5'端缺失后序列的鉴定 |
| 3.2.2 全长cDNA 构建和鉴定 |
| 3.2.3 体外转录物 RNA 的制备 |
| 3.2.4 转染BHK-21 细胞 |
| 3.2.5 乳鼠试验结果 |
| 3.2.6 功能未知区序列的空间结构 |
| 3.2.7 5'UTR序列的比对 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 FMDV型内嵌合病毒TAW97／CHINA 99的构建和感染性鉴定 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 O/CHINA/99 感染性cDNA 克隆 |
| 4.1.2 主要工具酶及试剂盒 |
| 4.1.3 突变序列的设计与合成 |
| 4.1.4 O/CHINA/99 突变毒株全长cDNA 的克隆和构建技术路线（图1） |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 嵌合重组质粒pOKTAW97/CHINA99 的鉴定结果 |
| 4.2.2 线性化全长cDNA 的获得 |
| 4.2.3 体外转录物RNA的制备 |
| 4.2.3.1 体外转录 |
| 4.2.3.2 转录产物的纯化 |
| 4.2.4 转染BHK-21细胞 |
| 4.2.4.1 细胞培养及处理 |
| 4.2.4.2 制备RNA-阳离子脂质体试剂复合物 |
| 4.2.4.3 转然细胞 |
| 4.2.5 乳鼠实验结果 |
| 4.3 IRES的空间结构及真核起始因子 |
| 4.3.1 IRES空间结构 |
| 4.3.2 FMDV翻译所涉及的细胞因子 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 研究结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）戊型肝炎流行病学和戊型肝炎病毒全基因克隆与表达研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 戊型肝炎病毒研究进展 |
| 1 形态特征 |
| 2 理化特性 |
| 3 HEV 分类地位 |
| 4 HEV 分子病毒学 |
| 5 戊型肝炎的流行病学 |
| 6 细胞培养 |
| 8 实验诊断 |
| 9 免疫和防制 |
| 第二章 RNA 病毒反向遗传学的原理和应用 |
| 1 概述 |
| 2 正链RNA 病毒的反向遗传学操作 |
| 3 感染性克隆的应用 |
| 4 结语 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 吉林省戊型肝炎病毒动物群血清流行病学和分子流行病学研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 吉林省戊型肝炎病毒人群血清流行病学和分子流行病学研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 人与动物HEV 的相互关系 |
| 5 小结 |
| 第三章 猪戊型肝炎病毒全基因序列的分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 戊型肝炎病毒CH-S-1 株全长体外转录载体的构建及其表达初步研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| CURRICULUM VITAE |
四、HGV RNA转录体的感染性研究（论文参考文献）
- [1]重组柯萨奇病毒CA16-A6VP的构建及其感染性研究[D]. 周冬. 浙江省医学科学院, 2019(04)
- [2]重组辛德毕斯病毒的制备及其功能特性的研究[D]. 邓玲玲. 北京化工大学, 2013(S2)
- [3]庚型肝炎病毒感染的研究进展[J]. 冯晓燕,赵秀萍,张贺秋. 中国输血杂志, 2013(05)
- [4]RNA病毒感染性克隆技术及其应用[J]. 杨扬,谭文杰. 生物技术通讯, 2012(02)
- [5]丙型肝炎病毒JFH1 NS5A基因对HC-J4病毒复制和感染性的影响[J]. 王永智,王文博,许刚,曹明媚,任浩,戚中田. 中国生物制品学杂志, 2011(04)
- [6]庚型肝炎病毒感染的研究进展[J]. 龚晓莹,周阳. 中国医药导报, 2010(19)
- [7]登革病毒2型全长cDNA感染性转录体的构建和鉴定[J]. 贡树基,赵卫,张文炳,周浩,陈丽丹,张复春,严子锵,曹虹. 微生物学通报, 2009(05)
- [8]口蹄疫病毒泛亚型O/CHINA/99株（全长、缺失和置换）cDNA分子克隆构建和感染性鉴定[D]. 吕建亮. 中国农业科学院, 2008(10)
- [9]犬贾第虫病毒感染性体外转录体制备及转染试验[J]. 曹利利,李建华,张西臣,张国才,宫鹏涛,杨举. 中国病原生物学杂志, 2008(01)
- [10]戊型肝炎流行病学和戊型肝炎病毒全基因克隆与表达研究[D]. 朱光泽. 吉林大学, 2007(03)