Bacillus flexus β-淀粉酶低pH值突变体的构建及在麦芽糖制备中的应用

论文摘要

工业上将β-淀粉酶与其他淀粉水解酶进行复配可获得高纯度的麦芽糖浆。相对于目前常用的植物来源β-淀粉酶,微生物β-淀粉酶具有生产工艺简单、不受原料限制、质量稳定、纯度高等优势,但其最适作用pH多为6.0～8.0,难以与其他淀粉水解酶（pH多为4.5～5.5）进行复配。本实验室前期获得的弯曲芽孢杆菌β-淀粉酶其最适pH值为7.0,本研究在此β-淀粉酶基础上构建T47K,Y164K,L396K三个突变体,其最适pH由突变前的7.0分别下降为6.0,4.5,5.5,其中L396K的最适温度也由突变前的50℃提高为60℃。以马铃薯淀粉（10%w/v）为底物进一步对L396K制备麦芽糖的转化条件进行探索与优化。结果表明,在反应初始pH为5.5,温度60℃,β-淀粉酶加酶量为100 U/g干淀粉时麦芽糖最大转化率达到80.2%,符合高纯度麦芽糖浆的生产要求。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 培养基
•   1.3 酶和试剂
•   1.4 突变体引物的设计及载体的构建
•   1.5 突变体的表达、纯化及SDS-PAGE电泳分析
•   1.6 β-淀粉酶活力的测定
•   1.7 突变体的酶学性质分析
•   1.8 突变体的应用
•     1.8.1 突变体和野生型的应用对比及优化
•     1.8.2 淀粉水解产物测定方法
•     1.8.3 麦芽糖转化率的计算
• 2 结果与讨论
•   2.1 突变体的构建
•   2.2 突变体的表达与纯化
•   2.3 突变体酶学性质分析
•   2.4 β-淀粉酶加量对麦芽糖产率的影响
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 亓旭辉,吴敬,王蕾,陈晟

关键词: 淀粉酶,定点突变,麦芽糖,弯曲芽孢杆菌,酶转化

来源: 食品与生物技术学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 食品科学与技术国家重点实验室江南大学,江南大学工业生物技术教育部重点实验室

基金: 国家杰出青年科学基金项目(31425020),江苏省产学研前瞻性联合研究项目(BY2015019-32),江苏高校优秀科技创新团队项目(2015),111计划(111-2-06)

分类号: TS245.5

页码: 105-110

总页数: 6

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