副结核分枝杆菌MAP1068胞外蛋白酶的特性研究

论文摘要

为研究副结核分枝杆菌（MAP） 1068蛋白的特性,本研究以MAP参考株K10基因组为模板,PCR扩增其map1068基因,构建p ET28a-map1068重组载体,将其转化BL21后诱导表达并纯化MAP1068蛋白。利用纯化的重组蛋白免疫（100μg/只/0.1 m L）小鼠制备多克隆抗体,应用该抗体对MAP1068蛋白进行亚细胞定位。以酪蛋白为底物测定MAP1068蛋白的酶活性。结果显示,MAP1068蛋白以包涵体形式表达;经变性、复性、亲和层析纯化后获得目的蛋白;将该蛋白免疫小鼠后其血清抗体效价可达1∶204 800;该蛋白主要定位于MAP细胞壁,可降解酪蛋白,为胞外蛋白酶。本实验为进一步研究MAP的致病机制奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料及实验动物
•   1.2 引物设计与合成
•   1.3 目的基因的扩增及重组表达质粒的构建
•   1.4 MAP1068蛋白的表达与纯化
•   1.5 MAP1068蛋白western blot和质谱分析
•   1.6 多克隆抗体的制备及效价评定
•   1.7 MAP1068蛋白的亚细胞定位
•   1.8 MAP1068蛋白的酶活性测定
• 2 结果
•   2.1 map10 68基因的扩增及重组质粒p ET28a-map1068的鉴定
•   2.2 MAP1068蛋白的表达与纯化
•   2.3 MAP1068蛋白的western blot和质谱分析
•   2.4 MAP1068蛋白多克隆抗体效价的测定及其亚细胞定位
•   2.5 MAP1068蛋白酶的活性测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王忠星,党光辉,刘虹秀,臧鑫鑫,崔莹莹,崔子寅,宋宁宁,陈利苹,刘思国

关键词: 副结核分枝杆菌,特性,酶活性

来源: 中国预防兽医学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

基金: 牛羊重要疫病免疫防控新技术研究,牛羊疫苗新型佐剂及工艺研究(2017YFD0500906),黑龙江省青年科学基金项目(QC201834)

分类号: S852.618

页码: 505-508

总页数: 4

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