论文摘要
细菌素是核糖体合成具有抗菌活性的抗菌肽,对细胞本身具有自身免疫。肠球菌广泛存在于食品中,它所产生的细菌素-肠球菌素能有效抵抗单增李斯特菌,有望作为生物保鲜剂而被用于食品中。然而截止目前,对肠球菌产细菌素影响因素的研究相对较少。为此,本研究以一株产细菌素的屎肠球菌TRS5为试验菌株,对屎肠球菌TRS5的益生特性进行研究,对屎肠球菌TRS5产细菌素的特性进行分析,同时,将屎肠球菌TRS5产细菌素的发酵条件进行了优化,得到以下主要研究结果:1.与鼠李糖乳杆菌LGG相比,屎肠球菌TRS5具有良好的耐酸和耐胆盐能力。药敏试验证实屎肠球菌TRS5对庆大霉素、新霉素和头孢他啶具有耐药性,对大多数抗生素敏感。屎肠球菌TRS5没有溶血性,PCR未检测出常见的毒力基因。TRS5在培养3 h后进入对数生长期,此时细菌素产量开始增加,菌体在培养15 h后,生长进入稳定期,此时细菌素产量开始趋于稳定。2.屎肠球菌TRS5所产细菌素对大多数受试菌,包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌,尤其对单增李斯特菌具有较强的抑制作用。在80℃以内,细菌素热稳定性良好,但在100℃时失去活性;在pH510之间,屎肠球菌TRS5仍具有较高的活性,尤其是在碱性条件下仍有一定的抑菌性,当pH为8时,抑菌活性最强。PCR反应及测序结果证实屎肠球菌TRS5含有肠球菌素enterocin P和类L50的结构基因。3.采用琼脂扩散法进行抑菌试验,通过单因素水平试验和正交试验,对屎肠球菌TRS5产细菌素的最佳培养条件及培养基成分进行了优化。结果表明,屎肠球菌TRS5产细菌素的最佳培养条件为37℃,培养基初始pH值为6.0,最佳接种量为1%,培养基最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为胰蛋白胨,最佳生长因子为牛肉膏,刺激因子吐温-80的最佳添加量为0.2%。最佳培养基组成为:葡萄糖1.5%、胰蛋白胨1.5%、牛肉膏1.5%、吐温-80 0.2%、磷酸氢二钾0.2%、乙酸钠0.5%、柠檬酸三铵0.2%、硫酸镁0.058%、硫酸锰0.025%,蒸馏水1000 mL。在此条件下培养,屎肠球菌TRS5的细菌素产量显著提高,效价值达到715 AU/mL。
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摘要Abstract第1章 前言及文献综述 1.1 屎肠球菌的综述 1.1.1 屎肠球菌的概述 1.1.2 屎肠球菌的特性研究 1.1.3 屎肠球菌的应用现状 1.2 细菌素的综述 1.2.1 细菌素的定义 1.2.2 细菌素的分类 1.2.3 细菌素的抑菌机理 1.2.4 细菌素的理化特点 1.2.5 影响细菌素合成的因素 1.2.6 细菌素的国内外研究现状 1.2.7 细菌素的应用 1.3 研究意义及主要研究内容 1.3.1 研究意义 1.3.2 研究内容第2章 屎肠球菌TRS5益生特性的研究 2.1 材料与方法 2.1.1 菌种、培养基与试剂 2.1.2 仪器与设备 2.1.3 试验方法 2.1.3.1 屎肠球菌TRS5与鼠李糖乳杆菌LGG的活化 2.1.3.2 耐酸能力 2.1.3.3 耐胆盐能力 2.1.3.4 屎肠球菌TRS5的药敏试验 2.1.3.5 屎肠球菌TRS5的溶血性试验 2.1.3.6 屎肠球菌TRS5的疏水性测定 2.1.3.7 抑菌试验 2.1.3.8 细菌素效价曲线测定 2.1.3.9 生长曲线测定 2.1.3.10 屎肠球菌TRS5毒力基因检测 2.2 结果与分析 2.2.1 耐酸试验结果 2.2.2 耐胆盐试验结果 2.2.3 药敏试验结果 2.2.4 溶血试验结果 2.2.5 疏水性试验结果 2.2.6 效价分析标准曲线的测定 2.2.7 生长曲线测定 2.2.8 屎肠球菌TRS5基因组DNA的提取 2.2.9 毒力基因PCR检测 2.3 结论第3章 屎肠球菌TRS5所产细菌素的特性研究 3.1 材料与方法 3.1.1 菌种、培养基与试剂 3.1.2 仪器与设备 3.1.3 试验方法 3.1.3.1 屎肠球菌TRS5与指示菌的活化 3.1.3.2 抑菌谱测定 3.1.3.3 细菌素的热稳定性试验 3.1.3.4 细菌素的酸碱稳定性试验 3.1.3.5 肠球菌素基因的PCR扩增 3.1.3.6 PCR扩增片段的测序及比对 3.2 结果与分析 3.2.1 细菌素的抑菌谱 3.2.2 细菌素的热稳定性试验结果 3.2.3 细菌素的酸碱稳定性试验结果 3.2.4 已知肠球菌素基因的PCR扩增 3.3 结论第4章 屎肠球菌TRS5产细菌素发酵条件优化 4.1 材料与方法 4.1.1 菌株 4.1.2 培养基 4.1.3 仪器与设备 4.2 试验方法 4.2.1 屎肠球菌TRS5与指示菌单增李斯特菌54002的活化[108]'> 4.2.2 屎肠球菌TRS5产细菌素培养条件的确定[108] 4.2.2.1 最佳培养温度的确定 4.2.2.2 最佳初始pH值的确定 4.2.2.3 最佳接种量的确定 4.2.3 屎肠球菌TRS5产细菌素培养基营养成分优化 4.2.3.1 不同碳源对细菌素产量的影响 4.2.3.2 不同氮源对细菌素产量的影响 4.2.3.3 生长因子对细菌素产量的影响 4.2.3.4 刺激因子吐温-80添加量对细菌素产量的影响 4.2.3.5 外源添加成分对细菌素产量的影响 4.2.4 正交试验确定细菌素发酵培养基的最佳组合 4.3 结果与分析 4.3.1 培养温度对细菌素产生的影响 4.3.2 培养基初始pH值对细菌素产量的影响 4.3.3 不同接种量对细菌素产量的影响 4.3.4 碳源对细菌素产量的影响 4.3.5 氮源对细菌素产量的影响 4.3.6 生长因子对细菌素产量的影响 4.3.7 刺激因子对细菌素产量的影响 4.3.8 外源添加成分对细菌素产量的影响 4.3.9 正交试验设计 4.4 结论第5章 本文主要结论及创新点 5.1 主要结论 5.2 创新点与展望 5.2.1 本文创新点 5.2.2 展望参考文献致谢作者简介
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 荣梓娴
导师: 周辉
关键词: 细菌素,屎肠球菌,益生特性,发酵条件
来源: 湖南农业大学
年度: 2019
分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑
专业: 生物学,轻工业手工业
单位: 湖南农业大学
分类号: TS201.3
DOI: 10.27136/d.cnki.ghunu.2019.000732
总页数: 60
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相关论文文献
- [1].产细菌素屎肠球菌TRS5特性分析及其编码基因的扩增[J]. 食品科学 2017(08)
标签：细菌素论文; 屎肠球菌论文; 益生特性论文; 发酵条件论文;
