双重荧光数字PCR方法定量检测贝类中诺如病毒

论文摘要

目的建立双重荧光微滴式数字反转录聚合酶链式反应（microdropdigitalreversetranscription polymerase chain reaction, RT-ddPCR）法定量检测贝类样品中诺如病毒。方法确定RT-ddPCR方法的最佳退火温度和探针浓度,建立贝类中诺如病毒双重荧光数字PCR检测方法,并定量检测秦皇岛2015～2017年7月采集的贝类样品中的诺如病毒。结果贝类中诺如病毒RT-ddPCR检测方法线性范围为5×104～5×100copy/μL,检出限为1.0 copy/20μL的反应体系。用数字PCR方法检出秦皇岛贝类样品中诺如病毒总阳性率为67%, GⅠ型病毒平均浓度为8.70×102 copy/g消化腺, GⅡ型病毒平均浓度为1.04×103 copy/g消化腺。结论与荧光定量反转录聚合酶链式反应（fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, RT-qPCR）方法相比,数字PCR方法在检测贝类诺如病毒时有明显优势,能提高病毒检出率,不依赖标准品进行绝对定量。

论文目录

• 1 引言
• 2 材料与方法
•   2.1 主要仪器与试剂
•   2.2 样品采集
•   2.3 实验方法
•     2.3.1 样品前处理
•     2.3.2 核酸提取
•     2.3.3 过程控制
•     2.3.4 优化RT-ddPCR反应条件
•     2.3.5 制作标准曲线
•     2.3.6 实时荧光RT-qPCR
•     2.3.7 样品检测
•     2.3.8 数据分析
• 3 结果与分析
•   3.1 RT-ddPCR反应条件优化
•   3.2 RT-ddPCR和RT-qPCR线性范围及检出限比较
•   3.3 RT-ddPCR法和RT-qPCR法检测样品比较
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 白雪,张淑红,申志新

关键词: 数字,诺如病毒,定量检测

来源: 食品安全质量检测学报 2019年24期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 河北省疾病预防控制中心

基金: 河北省科技支撑计划项目(15277778D)~~

分类号: TS254.7;Q93

DOI: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2019.24.042

页码: 8444-8449

总页数: 6

文件大小: 1873K

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