张晓玲1谭新玲1房笑丽2周纪平2张恩忠2
（1威海市中医院山东威海264200；2山东省文登整骨医院山东文登264400）
【中图分类号】R187【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)26-0104-02
【摘要】目的探讨低温真空甲醛的灭菌效果。方法采用自研的90L低温真空甲醛灭菌器，灭菌介质采用自研的1%甲醛灭菌组合物，将拟灭菌的关节镜器械、导尿管、手机、骨科电钻进行纸塑包装，放在灭菌内胆中，分别运行低温真空甲醛灭菌箱的54℃、62℃、70℃程控灭菌程序。灭菌效果采用被灭菌物品采样细菌培养和“过程挑战性批量监测装置”监测。结果54℃、62℃、70℃程控灭菌程序各30次，被灭菌物品采样细菌培养和“过程挑战性批量监测装置”监测全部合格。结论低温真空甲醛灭菌效果可靠，适合对细长管道、多腔隙电动力器械、电子仪器和精密光学仪器的灭菌。
【关键词】甲醛低温真空灭菌
随着医学发展的需要，各种细长管道、多腔隙电动力器械、电子仪器和精密光学仪器已经在临床广泛使用。但因其不耐热、不耐湿，灭菌介质不易到达管道和腔隙的深部，灭菌时间和灭菌介质解析时间长，目前临床上所采用的灭菌方法虽多，其灭菌效果却不尽如人意，甚至或多或少地存在着一定的缺陷。
甲醛分子中的醛基可与微生物蛋白质和核酸分子中的氨基、羧基、羟基、巯基等发生反应,从而破坏微生物分子的活性,使其死亡，对细菌、芽孢都具有杀灭作用[1]，适用于多种不耐热物品的灭菌。在真空状态特定条件下,甲醛气体穿透力与环氧乙烷相当，分布更均匀，较低浓度的甲醛溶液即可达到灭菌作用，为灭菌后残留甲醛的解析降低了难度，适用于对细长管道、多腔隙电动力器械、精密光学仪器和电子仪器灭菌，
2008年10月我们对“低温甲醛蒸汽灭菌器”的灭菌效果进行了临床试验，探讨了低温真空状态下的甲醛灭菌效果。现汇报如下。
1材料与方法
1.1材料仪器选择“山东海蛙医疗设备股份有限公司”提供的“低温甲醛蒸汽灭菌器”。被灭菌的器械为上海“博进电子仪表设备工贸有限公司”生产的医用直流电动锯钻、“诺道夫”牌的关节镜器械、乳胶导尿管等。
1.2方法
1.2.1被灭菌器械包装与装载将清洁干燥的待灭菌器械，装入3M公司生产的30cm×30cm纸塑包装袋。用封口机严密封口，包装袋内物品占包装袋容积的2/3左右[2]。将待灭菌器械包，放入灭菌内的专用灭菌筐中，装载量为灭菌箱容积的80%左右。灭菌包摆放时，纸面与纸面相对，塑面与塑面相对，以保证甲醛蒸汽的穿透。
1.2.2灭菌条件设定采用甲醛含量为1%的灭菌组合物，分别运行“低温甲醛蒸汽灭菌器”的54℃、62℃、70℃程控灭菌程序。
1.2.3灭菌过程（1）灭菌器预热及负载阶段关闭“低温甲醛蒸汽灭菌器”门，开启程序，使灭菌器预热达到设定的温度。（2）预真空阶段反复数次的注入饱和蒸汽和抽真空，使灭菌器内胆中的空气被饱和蒸汽完全置换。内胆中达到设定的温度和压力。（3）平衡阶段自动开启甲醛灭菌组合物加入和汽化程序（一旦启动甲醛加入程序，灭菌器门即会自动完全锁定，防止甲醛外泄）。灭菌组合物随着灭菌器内胆中的压力变化，被汽化成与之相对应温度的蒸汽，使甲醛灭菌组合物蒸汽将饱和蒸汽完全置换，灭菌器内胆中灭菌组合物达到预设剂量，进入下一程序。（4）灭菌阶段维持内胆中温度、压力及甲醛灭菌组合物浓度，持续一定的时间，灭菌完成。（5）甲醛解析阶段自动开启程序，通过数十次脉动，用蒸汽置换出灭菌内胆中的甲醛灭菌组合物气体，极低浓度的甲醛被水迅速稀释后排入下水道，在微生物分解下达到无害化。（6）干燥等压阶段自动开启干燥程序，以高效过滤的空气置换灭菌内胆中的残留蒸汽，去除灭菌包上的湿气；灭菌内胆内外等压后，解除自动锁定装置，完成灭菌程序，手动开启灭菌器门。
1.3灭菌效果监测
1.3.1“过程挑战性批量监测装置”生物监测每个灭菌过程监测一次。将生物指示剂（采用3M公司生产的自含式枯草杆菌芽孢生物指示剂，每只含枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC93725.0×105cfu）[3]，放到长1.5米、内径2mm、一头为封闭盲端的“过程挑战性批量监测装置”中，加双层纸塑包装后放在灭菌器内胆中心，甲醛气体只有透过双层纸塑包装，且通过长管才能到达生物指示剂[4]。同时留置对照菌管。经历灭菌过程后将枯草杆菌芽胞生物指示剂取出。把其培养液的玻璃管挤碎，连同对照菌管一起放入37℃温箱培养7天。分别在2天、5天和7天时观察结果，如枯草杆菌芽胞生物指示剂内的培养液在2天、5天和7天未变色(仍呈原来的蓝色)，说明无细菌生长，即为阴性反应；如枯草杆菌芽胞生物指示剂的培养液在2天或5天或7天变为黄色，说明有细菌生长，即为阳性反应；如一次灭菌程序运行后，枯草杆菌芽胞生物指示剂呈阴性反应，对照菌管呈阳性反应时，则判定本次灭菌合格；如一次灭菌程序运行后，“过程挑战性批量监测装置”枯草杆菌芽胞生物指示剂呈阳性反应，对照菌管呈阳性反应时，则判定本次灭菌失败。
1.3.2被灭菌物品的灭菌效果监测
（1）被灭菌器械的表面采样：每个灭菌过程监测一次。在无菌条件下，用无菌生理盐水棉拭子，在经历过灭菌程序的被灭菌器械表面反复涂抹采样，被采样本体表面积≥100cm2采100cm2，被采样本体表面积＜100cm2的采全部表面，将无菌生理盐水棉拭子投入到装有10ml无菌洗脱液的无菌试管中，反复震荡100次。取1ml接种于9cm普通营养琼脂平板上，37℃下培养48h,观察细菌生长情况。如果48h后无细菌生长，则判定本次灭菌合格，如果48h后有细菌生长，则判定本次灭菌失败。
（2）被灭菌器械管腔采样：每个灭菌过程监测一次。无菌操飨拢梦蘧⑸淦鞒?0ml无菌洗脱液，反复冲洗被灭菌乳胶导尿管的管腔5次，取1ml接种于9cm普通营养琼脂平板上，37℃下培养48h,观察细菌生长情况。如果48h后无细菌生长，则判定本次灭菌合格，如果48h后有细菌生长，则判定本次灭菌失败。
2结果（见表一）
表1灭菌结果
。
2.154℃程序下的灭菌结果本程序共运行30次。
将经过灭菌过程的“过程挑战性批量监测装置”中的30支枯草杆菌芽胞生物指示剂经37℃温箱培养7天，分别在2天、5天和7天观察，全部呈阴性反应；所设的阳性对照菌管，自2天起全部呈阳性反应。
将经过灭菌过程的30件被灭菌器械进行表面采样，37℃下培养48h后，均无细菌生长；将经过灭菌过程的30件被灭菌乳胶导尿管管腔采样，37℃下培养48h后，均无细菌生长。
试验结果表明，54℃灭菌程序运行30次,灭菌全部合格。
2.262℃程序下的灭菌结果本程序共运行30次。
将经过灭菌过程的“过程挑战性批量监测装置”中的30支枯草杆菌芽胞生物指示剂经37℃温箱培养7天，分别在2天、5天和7天观察，全部呈阴性反应；所设的阳性对照菌管，自2天起全部呈阳性反应。
将经过灭菌过程的30件被灭菌器械进行表面采样，37℃下培养48h后，均无细菌生长；将经过灭菌过程的30件被灭菌乳胶导尿管管腔采样，37℃下培养48h后，均无细菌生长。
试验结果表明，62℃灭菌程序运行30次,灭菌全部合格。
2.370℃程序下的灭菌结果本程序共运行30次。
将经过灭菌过程的“过程挑战性批量监测装置”中的30支枯草杆菌芽胞生物指示剂经37℃温箱培养7天，分别在2天、5天和7天观察，全部呈阴性反应；所设的阳性对照菌管，自2天起全部呈阳性反应。
将经过灭菌过程的30件被灭菌器械进行表面采样，37℃下培养48h后，均无细菌生长；将经过灭菌过程的30件被灭菌乳胶导尿管管腔采样，37℃下培养48h后，均无细菌生长。
试验结果表明，70℃灭菌程序运行30次,灭菌全部合格。
3讨论
本次试验所使用的低温蒸汽甲醛灭菌器，是以甲醛灭菌组合物作为灭菌介质，甲醛与乙醇成协同灭菌作用[5]。乙醇能防止甲醛分子聚合形成多聚甲醛，使甲醛的稳定性更大；另外，在低温真空的特定条件下,甲醛分子能量增强，运动能力增加，对靶细胞的攻击能力大大增强，从而到达器械的腔隙和导管的内部，无灭菌死角，杀灭所有微生物包括芽孢，使其灭菌效果非常可靠。使用较低的甲醛灭菌组合物浓度和剂量，即可达到预期灭菌效果。
由表1、表2中可以看出，在应用1%甲醛浓度的灭菌组合物，运行的54℃、62℃、70℃灭菌程序各30次，其中“过程挑战性装置”中的90支生物指示剂被完全杀灭，被灭菌器械表面90次采样培养无细菌生长，灭菌乳胶导尿管管腔90次采样培养无细菌生长，证明了本数控低温蒸汽甲醛灭菌适合对细长管道、多腔隙电动力器械、电子仪器和精密光学仪器的灭菌。且本灭菌方法灭菌时间短，一个周期仅104±10分钟[6]，大大满足了临床手术的需要。且被灭菌器械是在纸塑包装后进行灭菌，灭菌后的有效期可达3～6个月或更长,且运输保存也极其方便。更值得一提的是，低温真空状态下的甲醛灭菌组合物灭菌，还有对器材的包装和功能无损害、对人安全无害、无残留物质污染环境、运行成本低和监测方便等优点。
参考文献
[1]徐伟雄,周惠平.低温蒸汽甲醛灭菌技术[J].中华医院感染学杂志,2000，10(4):286.
[2]刘水玉，李金方，梁云连，等.低温蒸汽甲醛气体灭菌效果观察[J].中国消毒学杂志，2005；22（1）：45.
[3]贾松树，王万海，王宇，等.预真空甲醛消毒灭菌器的杀菌效果试验[J].河南预防医学杂志，2004，15（3）：135.
[4]高建君，张黎华.低温蒸汽甲醛灭菌的应用[J].中华医院感染学杂志，2007，17（2）：169.
[5]房笑丽，谭远超，张恩忠等.纸塑与棉布包装下低温真空甲醛灭菌效果比较[J].中国中医骨伤科杂志，2008；16（6）：14.
[6]谭远超，房笑丽，王燕等.低温真空甲醛与传统甲醛熏箱灭菌效果比较[J].中国中医骨伤科杂志，2008；16（7）：13.