适应性进化与甜菜碱的添加促进安丝菌素的生产

论文摘要

【背景】安丝菌素是一类由珍贵束丝放线菌橙色亚种（Actinosynnema pretiosum ssp. auranticu）生产的美登素类衍生抗生素,属于大环内酰胺类物质,根据不同的C-3位基团可以分为一系列衍生物。目前已上市的高效抗癌药物曲妥珠单抗（T-DM1）以AP-3 （Ansamitocin P-3）为生产底物,并表现出很好的乳腺癌治疗效果。然而当前AP-3的产量较低,其过高的成本限制了进一步发展。【目的】应用适应性进化及添加适量甜菜碱策略提高安丝菌素AP-3的产量。【方法】以珍贵束丝放线菌橙色亚种为出发菌株,链霉素和巴龙霉素为胁迫压力进行适应性进化,筛选出安丝菌素积累较高的菌株,随后向进化菌株的发酵培养基中添加0.1%的甜菜碱,AP-3的产量进一步提高,同时分析了进化菌株AP-3相关基因的转录水平,初步探索进化菌株安丝菌素积累提高的原因。【结果】得到2株进化菌株Str16-4-4和Par16-2-1,发酵7d后AP-3产量分别提高了33.4%和31.7%,添加甜菜碱后其AP-3产量相比出发菌株提高了54.6%和47.4%。【结论】通过适应性进化的策略获得了AP-3生产能力提高的珍贵束丝放线菌橙色亚种进化菌株,对促进AP-3的生产提供了新思路,而且为适应性进化策略提高目标产物的产量提供了新的例证。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株
•     1.1.2 引物
•     1.1.3 主要试剂和仪器
•     1.1.4 培养基及培养条件
•   1.2 适应性进化
•   1.3 珍贵束丝放线菌橙色亚种的发酵
•   1.4 代谢产物AP-3的检测
•   1.5 实时荧光定量PCR （RT-qPCR）
• 2 结果与分析
•   2.1 确定适应性进化的抗生素浓度及转接时间
•   2.2 链霉素和巴龙霉素胁迫下进化菌株的筛选
•   2.3 稳定性测定
•   2.4 实时荧光定量PCR分析
•   2.5 甜菜碱对菌株AP-3生产的影响
•     2.5.1 甜菜碱对出发菌株AP-3生产的影响
•     2.5.2 甜菜碱对进化菌株AP-3生产的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 许文龙,胡凤仙,刘婷,韦柳静,花强

关键词: 适应性进化,珍贵橙色束丝放线菌,安丝菌素,甜菜碱

来源: 微生物学通报 2019年07期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工,一般化学工业

单位: 华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室

基金: 高等学校博士学科点专项科研基金(20130074110002)~~

分类号: TQ920.6;TQ460.6

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180667

页码: 1561-1570

总页数: 10

文件大小: 999K

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