CRISPR/Cas9系统介导GFP在兔H11位点的定点整合研究

论文摘要

目的家兔是一种重要的模式动物,然而目前家兔中缺乏外源基因定点整合的相关技术。方法为了在兔胚胎成纤维细胞水平建立起成熟的H11位点定点整合平台,试验根据文献报道的人和小鼠的H11位点鉴定出家兔的H11位点,并使用CRISPR/Cas9系统和同源重组技术,设计了两对针对H11位点的sgRNA和左右同源臂,构建敲除载体和打靶载体。将两种载体共同转染进兔胚胎成纤维细胞中,在共转染的细胞基因组中依托嘌呤霉素筛选检测外源基因整合。结果在共转染的兔胚胎成纤维细胞中检测到外源基因插入,并且在敲入后成功表达外源基因。结论该实验依赖于CRISPR/Cas9技术和同源重组技术在细胞水平上创建高效的位点特异性整合系统,为未来转基因兔的安全和有效制备奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂及仪器
•   1.2 序列比对
•   1.3 CRISPR/Cas9敲除载体的构建
•   1.4 同源打靶载体的构建
•   1.5 嘌呤霉素筛选兔胚胎成纤维细胞浓度确定
•   1.6 电转染
•   1.7 打靶细胞的检测
• 2 结果与分析
•   2.1 猪与小鼠与人的H11位点周围环境序列比对
•   2.2 CRISPR/Cas9敲除载体的构建
•   2.3 同源打靶载体的构建
•   2.4 嘌呤霉素最佳浓度筛选结果
•   2.5 GFP表达及药物筛选单克隆群
•   2.6 打靶细胞的检测
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 姚洋,尤双,刘芝瑾,张翔宇,侯晓旭,郭涛,倪伟,胡圣伟

关键词: 定点敲入,兔胚胎成纤维细胞,位点

来源: 石河子大学学报(自然科学版) 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 石河子大学生命科学学院

基金: 新疆生产建设兵团科技创新中青年领军人才项目(2016BC001,2017CB003),石河子大学青年科技创新人才项目(CXRC201603)

分类号: Q78

DOI: 10.13880/j.cnki.65-1174/n.2019.22.002

页码: 580-588

总页数: 9

文件大小: 4083K

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