L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因5′端二级结构对重组表达的抑制机制及消除策略

论文摘要

探究赤拟谷盗Tribolium castaneum L-天冬氨酸-α-脱羧酶（PanD）与人工高效表达元件适配过程中翻译抑制产生的机制,并发展新的消除策略。首先在枯草芽孢杆菌中利用高效表达元件验证翻译抑制现象并分析了翻译抑制产生的机制,同时融合sfGFP考察其对翻译抑制的影响,筛选与PanD酶适配性强的精简融合肽。结果显示,强组成型启动子不能介导PanD高表达,呈翻译抑制。分析证实,panD转录后mRNA的5′编码区与5′UTR形成抑制性的二级结构,降低翻译起始效率。将两种报告基因和其N端部分序列作为绝缘肽分别与PanD的N端融合后均能够提升重组蛋白的表达水平,消除由mRNA分子内部的顺式作用导致的翻译抑制现象。这为深入探索利用通用型肽绝缘子元件稳定异源基因在底盘中的表达提供依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试剂材料
•     1.1.1 菌种、质粒和引物
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 仪器与设备
•     1.1.4 培养基
•     1.1.5 主要溶液
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 重组质粒的构建与转化
•     1.2.2 sfGFP荧光水平的测定
•     1.2.3 PanD酶活水平的测定
•     1.2.4 蛋白表达水平检测
• 2 结果与分析
•   2.1 赤拟谷盗L-天冬氨酸-α-脱羧酶在B. subtilis中表达抑制效应的鉴定
•   2.2 panD基因mRNA 5′端二级结构对重组蛋白表达水平的调控作用
•   2.3 利用N端融合策略消除PanD翻译抑制
•   2.4 融合肽长度精简及筛选
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 令狐梅,韩来闯,周哲敏,崔文璟

关键词: 天冬氨酸脱羧酶,二级结构,端截断,融合肽,枯草芽孢杆菌

来源: 食品与发酵工业 2019年16期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)

基金: 国家自然科学基金-青年基金(31400058)

分类号: Q75

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020730

页码: 1-10

总页数: 10

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