导读:本文包含了迟发性神经元死亡论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:神经元,发性,受体,细胞,凋亡,脑缺血,认知。
迟发性神经元死亡论文文献综述
焦莉[1]（2015）在《CBX对海马迟发性神经元死亡的作用研究》一文中研究指出目的观察探讨星型胶质细胞缝隙连接胞间通讯阻滞剂CBX对大鼠大脑中动脉缺血再灌流后海马区迟发性神经元死亡(DND)的影响方法将体重为250g-300g的SD大鼠随机分成3组:sham组,MCAO组,MCAO+CBX组,建立大鼠短暂性大脑中动脉缺血再灌流模型(MCAO),分别于缺血再灌注后3d,7d,14d,30d将各组大鼠处死取脑作冰冻(本文来源于《中华医学会第十八次全国神经病学学术会议论文汇编（下）》期刊2015-09-18）
徐阳,汪敬业,罗本燕[2]（2014）在《溶酶体酶抑制剂对全脑缺血复灌损伤大鼠海马CA1区神经元迟发性死亡的作用研究》一文中研究指出目的本研究旨在探讨溶酶体酶抑制剂CA074对全脑缺血,复灌大鼠海马CA1区神经元死亡的影响。方法将280g-300g雄性SD大鼠随机分3组。除假手术组,模型组和CA074组各4个时间点,每时间点3只。分别为假手术组(n=6)、缺血/复灌模型组(n=15)、CA074组(n=15)。采用四血管法制作全脑缺血复灌损伤模型组,双侧椎动脉电凝24h后夹闭双侧颈总动脉,缺血20分钟后恢复灌注;假手术组除不夹闭双侧颈总动脉外其余操作同模型组;CA074组在缺血前侧脑室注射CA074 1ug,其余操作同模型组。假手术组、缺血,复灌(本文来源于《中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（上）》期刊2014-09-19）
徐阳,罗本燕[3]（2014）在《溶酶体酶抑制剂对全脑缺血复灌损伤大鼠海马CA1区神经元迟发性死亡的作用研究》一文中研究指出目的:本研究旨在探讨溶酶体酶抑制剂CA074对全脑缺血/复灌大鼠海马CA1区神经元死亡的影响。材料与方法:将体重在280g-300g雄性SD大鼠随机分为3组。除假手术组外,模型组和CA074组每组设4个时间点,每个时间点3只。分别为:假手术组(n=6)、缺血/复灌模型组(n=15)、CA074组(n=15)。采(本文来源于《2014年浙江省神经病学学术年会论文汇编》期刊2014-05-23）
焦莉,杜怡峰,郭守刚[4]（2013）在《CBX对海马迟发性神经元死亡的作用研究》一文中研究指出目的:观察探讨星型胶质细胞缝隙连接胞间通讯阻滞剂CBX对大鼠大脑中动脉缺血再灌流后海马区迟发性神经元死亡(DND)的影响方法:将S250g-300g的SD大鼠随机分成3组:sham组,MCAO组,MCAO+CBX组,建立大鼠短暂性大脑中动脉缺血再灌流模型(MCAO),利用尼氏染色观察缺血再灌注后3 d,7d,14d,30d海马神经元的存活情况,利用TUNEL方法观察缺血再灌注后3d,7d,14d,30d海马神经元凋亡数目。结果:大脑中动脉缺血再灌流后3 d,7 d,14d,30d海马神经元明显脱失,部分CA1 CA2区神经元凋亡;应用CBX后3 d,7 d,14d,30dTUNEL阳性神经元数目明显减少,幸存神经元数目增加(p<0.05)。结论:CBX明显降低了大脑中动脉缺血再灌注损伤中海马神经元的死亡,提高了存活神经元的数目,这一结果提示星型胶质细胞缝隙连接胞间通讯在局灶性脑缺血所产生的远隔效应中具有重要意义,它可能介导了缺血性脑卒中的进展过程,导致梗死面积的扩大。干预GJIC可能成为临床脑卒中的神经保护新策略.(本文来源于《山东省2013年神经内科学学术会议暨中国神经免疫大会2013论文汇编》期刊2013-09-07）
焦莉,杜怡峰,郭守刚[5]（2013）在《他莫昔芬在大鼠大脑中动脉缺血再灌注海马迟发性神经元死亡和远期记忆功能中的作用及其机制的研究》一文中研究指出目的:他莫昔芬为一种选择性雌激素受体调节剂广泛用于科研和临床,但目前关于它对远离缺血区的海马部位稍晚发生的神经损伤和远期的认知障碍的作用尚未见相关报道。本研究将探讨他莫昔芬在局部脑缺血后海马迟发性神经元死亡和远期认知功能中的作用及其具体机制。方法:本部分研究将Wistar大鼠分为叁组:假手术组(接受手术但并不堵塞大脑中动脉入口);缺血组(堵住大鼠大脑中动脉入口);他莫昔芬干预组(该组大鼠在再灌注后立即以及再灌注30分钟后分别经尾静脉注射一次他莫昔芬,剂量为3mg/kg)。采用线拴法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。尼式染色和TUNEL染色方法观察再灌注3,7,30天后海马CA1区神经元缺失和凋亡情况,水迷宫实验测试再灌注30天后大鼠学习记忆功能。再灌注3,7,30天后采用ELISA及RT-PCR方法测定再灌注同侧海马IL-1β,TNF-α蛋白和mRNA水平表达量;TUNEL+GFAP免疫荧光双标观察再灌注同侧海马CA1区神经元凋亡情况和星型细胞活化情况;Western blot分析再灌注同侧海马GFAP表达量。结果:缺血再灌注3天,7天,30天缺血组较假手术组海马CA1区神经元发生明显的缺失和凋亡,他莫昔芬干预后海马CA1区神经元缺失和凋亡情况明显减轻。缺血组动物再灌注30天后与假手术组动物比较学习记忆能力下降,水迷宫实验潜伏期明显延长,呆在目标象限的时间比例明显缩短,他莫昔芬干预后学习记忆能力提高,水迷宫实验潜伏期明显缩短,呆在目标象限的时间比例明显延长。MCAO后第3天和第7天,IL-1β和TNF-α的蛋白表达量及mRNA水平表达量明显增加,3mg/kg剂量的他莫昔芬干预降低了IL-1β和TNF-α的蛋白表达量及mRNA水平表达量。MCAO术后第3天,第7天,第30天在海马GFAP大量表达,而用他莫昔芬干预后海马GFAP表达也受到显着的抑制。结论:本部分研究表明他莫昔芬可以减轻大脑中动脉缺血再灌注海马迟发性神经元死亡,保护远期认知功能不受损害。其作用机制可能与抵抗炎症反应以及抑制星型胶质细胞活化有关。(本文来源于《山东省2013年神经内科学学术会议暨中国神经免疫大会2013论文汇编》期刊2013-09-07）
刘杰,吴穹,赵媛,刘瑞欣,柯淑敏[6]（2012）在《不同Hemin预处理条件对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区迟发性神经元死亡的影响》一文中研究指出目的观察不同条件下氯化血红素(Hemin)预处理对全脑缺血/再灌注(I/R)大鼠海马CA1区迟发性神经元死亡(DND)的影响。方法将102只雄性Wistar大鼠随机分成17组,应用四血管闭塞法复制I/R模型,予不同时间、不同剂量、不同途径、不同次数的Hemin预处理,观察(硫堇染色下)大鼠海马CAl区神经元组织学分级(HG)和神经元密度(ND),对DND进行评价。结果所有Hemin预处理组大鼠海马CAl区HG和ND与Sham、I/R组比较,除I/R前48 h、20 mg/kg、1次灌胃预处理组外,结果存在差异(P<0.05);所有Hemin预处理组中I/R前24 h、80 mg/kg、3次灌胃预处理组ND值最高,HG最低(P<0.05);I/R前Hemin 50、80 mg/kg预处理组海马CAl区ND值高于20 mg/kg预处理组(P<0.05),Hemin 50、80 mg/kg预处理组间ND值差异无统计学意义(P>0.05);Hemin不同时间预处理ND值大小规律为I/R前24 h>0.5 h>48 h;Hemin灌胃给药效果好于腹腔注射(P<0.05);I/R前Hemin3次预处理ND值高于单次预处理(P<0.05)。结论 HeminI/R前24 h、80 mg/kg、3次灌胃预处理下,或最有效减少I/R大鼠海马CA1区DND,发挥对脑组织的保护作用。(本文来源于《青海医学院学报》期刊2012年03期）
张雁儒,张建军,冯富明,李月白,王义生[7]（2012）在《耐力训练及力竭运动后大鼠大脑CA1区锥体细胞迟发性神经元死亡及其线粒体的超微结构变化》一文中研究指出目的观察耐力训练及力竭运动后大鼠大脑海马区锥体细胞及其线粒体的超微结构变化。方法实验于2007年6月至2008年11月在郑州大学完成。选取8周龄雄性SD大鼠40只,随机设耐力训练组:安静组;急性力竭运动后24h组;耐力训练+急性力竭运动后即刻组;耐力训练+急性力竭运动后24h组。每组10只。安静组不外加运动,其他组次日进行力竭运动,力竭运动开始的速度为10m/min,逐渐提高速度并在3min内到达预定的速度(中等强度、大强度力竭运动的速度分别为20m/min、36m/min),保持速度直至力竭,并记录力竭运动时间。耐力训练方案:大鼠在动物跑台进行运动训练,1次/d,6d/周。跑台速度由开始的10m/min逐渐增加至第4周30m/min,运动时间由30min/d增加到40min/d。力竭标准为大鼠用毛刷驱赶无效,在跑台尾端停留2s仍不愿跑,且失去快速翻正反射。主要观察指标:断头处死分别取材检测大鼠大脑海马区锥体细胞及其线粒体的超微结构变化。结果 40只SD大鼠均完成实验设计方案,全部进入结果分析。结果发现耐力训练和力竭运动后大鼠大脑细胞凋亡数量显着增加,力竭运动强度增加,凋亡细胞数量增多,且多为神经胶质细胞,安静组大脑细胞凋亡率为(6.56±1.24)%、急性运动后24h组为(16.14±3.26)%、耐力训练+急性运动后即刻组为(29.78±1.96)%、耐力训练+急性运动后24h组为(32.43±2.35)%。通过图像分析系统的分析研究,海马神经元线粒体变性较为显着。结论本实验观察到耐力训练和力竭运动对大脑细胞造成一定的损伤,海马区神经元线粒体变性,可能是由于疲劳训练引起脑组织的酸中毒和缺氧引起大脑细胞的一些变性现象。(本文来源于《中华临床医师杂志(电子版)》期刊2012年18期）
刘乃红,王锐,王晔,李建国,张策[8]（2011）在《EphA4受体在大鼠前脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元迟发性死亡中的作用观察》一文中研究指出目的观察大鼠海马脑区缺血/再灌注后ephrinA3激活EphA4受体对海马CA1区神经元凋亡的影响。方法采用经典的四血管夹闭大脑缺血/再灌注模型,分别脑室内给予EphA4受体激动剂ephrinA3-Fc以及EphA4受体阻断剂EphA4-Fc,通过TUNEL染色观察在缺血/再灌注后6、24、48h各组海马神经元凋亡情况,同时检测Caspase 3的活性,以观察EphA4/ephrinA3系统活化与CA1区神经元凋亡的关系。结果侧脑室内给予激动剂ephrinA3-Fc后,Caspase 3的活性较单纯缺血/再灌注组有明显升高(2.76±0.15 vs 2.28±0.28,P<0.05;24h:2.24±0.24 vs 2.20±0.19,P<0.05;48h:2.04±0.44 vs 1.90±0.29,P<0.05),同时神经元的凋亡亦有增加(31.8±4.40%vs 26.33±5.32%,P<0.05;24h:25.50±4.03%vs 23.8±5.56%,P<0.05;48h:22.17±4.52%vs 19.0±4.34%,P<0.05)。侧脑室给予阻断剂EphA4-Fc后,Caspase 3的活性较单纯再灌注组降低(6h:1.73±0.30 vs 2.28±0.28,P<0.05;24h:1.52±0.26 vs 2.20±0.19,P<0.05;48h:1.43±0.23 vs 1.90±0.29,P<0.05),而神经元的凋亡亦明显减少(6h:17.5±4.97%vs 26.33±5.32%,P<0.05;24h:15.0±4.47%vs 23.8±5.56%,P<0.05;48h:12.0±3.46%vs 19.0±4.34%,P<0.05),提示ephrinA3-EphA4系统的活化可能参与了再灌注后神经元凋亡的发生。结论 EphA4的活化可能通过激活Caspase 3通路促进了缺血/再灌注后海马脑区神经元的凋亡,阻断EphA4的活化可以抑制Caspase 3的激活,减少海马脑区神经元的凋亡,从而发挥神经保护作用。(本文来源于《中国医疗前沿》期刊2011年09期）
焦莉[9]（2011）在《依达拉奉在大鼠大脑中动脉缺血再灌注后海马迟发性神经元死亡和远期记忆功能中的作用及其机制研究》一文中研究指出研究目的：依达拉奉已作为一种自由基清除剂用于科研和临床。然而目前对它的研究主要集中在对脑血管病急性期缺血中心区以及周围缺血半暗带的保护作用上,对于远离缺血区的海马部位稍晚发生的神经损伤和远期的认知障碍尚未见相关报道。在本部分研究中,我们将探讨依达拉奉在局部脑缺血后海马迟发性神经元死亡和远期认知功能中的作用。研究方法：本部分研究将Wistar大鼠分为叁组：假手术组(该组大鼠接受手术但控制线栓进入长度,实际并不堵塞大脑中动脉入口)；缺血组(该组利用线栓堵住大鼠大脑中动脉入口)；依达拉奉干预组(该组大鼠在再灌注后立即以及再灌注30分钟后分别经尾静脉注射一次依达拉奉,剂量为3mg/kg)。采用线拴法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。尼式染色和TUNEL染色方法观察再灌注3,7,30天后海马CA1区神经元缺失和凋亡情况,水迷宫实验测试再灌注30天后大鼠学习记忆功能。研究结果：缺血再灌注3天,7天,30天缺血组较假手术组海马CA1区神经元发生明显的缺失和凋亡,依达拉奉干预后海马CA1区神经元缺失和凋亡情况明显减轻。缺血组动物再灌注30天后与假手术组动物比较学习记忆能力下降,水迷宫实验潜伏期明显延长,呆在目标象限的时间比例明显缩短,依达拉奉干预后学习记忆能力提高,水迷宫实验潜伏期明显缩短,呆在目标象限的时间比例明显延长。研究结论：本部分研究表明依达拉奉可以减轻大脑中动脉缺血再灌注海马迟发性神经元死亡,保护远期认知功能不受损害。研究目的：局灶性脑缺血后的海马迟发性神经元死亡(delayed neuronal death, DND)的机理目前尚不十分明确。我们的研究发现依达拉奉可以减轻大脑中动脉缺血再灌注海马的迟发性神经元死亡。本部分将进一步对依达拉奉这种保护作用机制进行研究。研究方法：线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。分别于再灌注3,7,30天后测定同侧海马丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)含量；ELISA及RT-PCR方法测定再灌注3,7,30天后同侧海马IL-1β, TNF-α蛋白和mRNA水平表达量；TUNEL+GFAP免疫荧光双标观察再灌注3,7,30天后海马CA1区神经元凋亡情况和星型细胞活化情况；Western blot分析再灌注3,7,30天后同侧海马GFAP表达量。研究结果：MCAO后第3天和第7天,缺血组的大鼠同侧海马的较假手术组相比MDA含量显着增加,SOD活力明显下降,IL-1β和TNF-α的蛋白表达量及mRNA水平表达量明显增加,3mg/kg剂量的依达拉奉干预下调了同侧海马MDA含量和上调了SOD活力,并且降低了IL-1β和TNF-α的蛋白表达量及mRNA水平表达量。MCAO术后第3天,第7天,第30天在海马GFAP大量表达,而用依达拉奉干预后海马GFAP表达也受到显着的抑制。研究结论：依达拉奉可以减轻大脑中动脉缺血再灌注海马迟发性神经元死亡,其作用机制可能与清除自由基,抵抗炎症反应以及抑制星型胶质细胞活化有关。(本文来源于《华中科技大学》期刊2011-04-01）
刘乃红[10]（2011）在《EphA4-ephrinA3系统在大鼠短暂前脑缺血/再灌注引起的海马区神经元迟发性死亡中的作用研究》一文中研究指出研究背景和目的:脑卒中已成为当今第叁大死亡原因及首位致残原因。据统计我国脑卒中发病率高达120/10万,致残率高达75%。缺血性脑卒中(脑梗死)占全部脑卒中的60%~80%。长时间的脑缺血将导致广泛的、非选择性的神经元坏死。而短暂的脑缺血事件后,虽然血供随之恢复,但在人类和一些动物模型都可以引起选择性的神经元死亡,主要影响海马CA1区的锥体神经元,这种死亡甚至可发生于再灌注28天后,称为神经元迟发性死亡(Delayed neuronal death,DND)。脑卒中致残的程度与DND密切相关,而DND的发生发展是一个复杂的,多种病理机制参与的过程,其机制尚未能完全阐明,因而缺乏理想的治疗手段。DND的发生机制虽未被充分了解,但研究发现神经凋亡在其中扮演了重要的角色。Pulsinelli建立的大鼠短暂性前脑缺血/再灌注模型是目前国际上研究缺血性脑损伤后继发性神经元死亡机制普遍采用的模型之一,先行通过手术阻断椎动脉,次日短暂夹闭颈动脉(15分钟)进行缺血/再灌注,由于通过Willis环的血供仍然保留,对脑干功能无明显影响。在这一模型中,再灌注后大鼠海马发生特异性病理学改变:CA1区锥体细胞发生迟发性神经元死亡(即脑缺血/再灌注2～3天后光镜下才见到CA1区锥体细胞的死亡),而CA3区的锥体细胞和齿状回颗粒细胞却几乎不受损害。而CA1区锥体细胞发生迟发性神经元死亡中,凋亡发挥了重要作用。ephrin(配体)-Eph(受体)系统属于受体酪氨酸激酶家族。Eph-ephrin系统的受体分为EphA与EphB两个亚族,相应的配体也分为ephrinA (A1～A5 )与ephrinB (B1～B3 )两个亚族。ephrinA配体具有一个胞外保守的受体结合区,通过糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)形式锚定于细胞膜。Eph受体胞外域含配体结合区、半胱氨酸富集区与两个纤连蛋白Ⅲ型区,胞内域包括酪氨酸激酶区、SAM及PDZ结合区。EphA受体优先结合ephrinA, EphB优先结合ephrinB,但EphA4除与ephrinA结合外也可与ephrinB1和ephrinB2相结合。Eph-ephrin信号传递依赖复合物的寡聚化,游离的单体不具有生理作用。该系统在神经系统发育以及突触可塑性调控中起重要的作用。近期研究发现它们可能也与缺血损伤有关。研究显示ephrinA3是成年海马区最为丰富的Eph配体,主要位于GFAP阳性的星形胶质细胞上, EphA4分布于海马神经元特别是CA1区的锥体神经元上。而在病理情况下,CA1、CA3区及DG的锥体细胞层均可表现出强烈的缺血诱导的ephrinA3的表达。在未成年的大鼠,缺血缺氧可使EphA4下降,也有研究发现慢性脑缺血时EphA4上调,但EphA4-ephrinA3在缺血损伤中的作用尚不明确,此外它是否参与神经元的凋亡及其信号通路亦不明确。ephrin配体活化Eph受体的信号传递包括MAPK,PI3激酶等多种下游信号通路。已有研究发现MAPKs,包括ERK1/2,JNK和p38 MAPK,广泛参与了神经元存活和凋亡调控过程,包括在缺血/再灌注损伤后神经元存活与死亡的调控。那么缺血/再灌注后通过EphA4-ephrinA3活化的MAPKs是否参与损伤后神经元凋亡亦不明确。除上述信号通路参与对细胞增殖及凋亡的调节外,细胞的容积变化也在细胞的增殖、凋亡过程发挥作用。参与容积调节的主要是离子通道包括K+通道,Cl-通道等。近年来的研究表明,容积调节性Cl-通道通过对细胞容积、膜电位的调节在细胞凋亡过程中发挥了重要作用。但氯离子通道活动的调控机制尚未完全阐明,有研究提示蛋白酪氨酸磷酸化信号参与了容积调节性氯通道的调节,应用氯通道阻断剂或酪氨酸激酶抑制剂可明显减少短暂脑缺血/再灌注后海马神经元的凋亡。由于EphA4-ephrinA3属于酪氨酸激酶家族,它们是否可以通过影响氯通道功能在缺血/再灌注损伤中发挥作用呢?综上所述,我们拟通过建立短暂前脑缺血/再灌注模型进行以下研究:1.通过检测缺血/再灌注诱导的凋亡及EphA4-ephrinA3在海马区的表达变化,观察EphA4-ephrinA3系统在缺血/再灌注后神经元凋亡过程发挥的作用; 2.通过记录氯通道电流及应用相应的激动剂、拮抗剂,观察EphA4-ephrinA3是否通过对海马CA1区氯通道的调控参与了神经元凋亡的过程;3.通过检测MAPKs信号通路中各途径(ERK,JNK、P38 MAPK)的表达,分析EphA4-ephrinA3参与缺血/再灌注损伤的信号转导通路。一、EphA4-ephrinA3在缺血/再灌注损伤后大鼠脑海马神经元迟发性死亡的作用观察目的:建立大鼠全脑短暂缺血/再灌注模型,观察大鼠海马组织CA1区神经元的损伤(凋亡)情况,以及在此过程EphA4-ephrinA3表达的变化。为进一步研究EphA4-ephrinA3对于缺血/再灌注后CA区神经元凋亡的作用,分别通过侧脑室给予EphA4受体激动剂ephrinA3-Fc,以及受体阻断剂EphA4-Fc,观察EphA4-ephrinA3系统在脑缺血/再灌注诱导的CA1区神经元凋亡过程的作用。方法:1选取成年雄性Wistar大鼠,随机分为以下各组:伪手术(sham)组(各时间点n=6),先行灼闭双侧椎动脉,次日打开颈部切口但不夹闭颈动脉;缺血/再灌注组(各时间点n=6),先行灼闭双侧椎动脉,次日夹闭双侧颈动脉15分钟后松开动脉夹实现再灌注,6、24、48小时取材检测;Vehicle+缺血/再灌注组(各时间点n=6),侧脑室给予无菌PBS10μl,于再灌注后6、24、48小时取材检测;ephrinA3-Fc+缺血/再灌注组(各时间点n=6),给予ephrinA3-Fc,再灌注后6、24、48小时取材检测;EphA4-Fc+缺血/再灌注组(各时间点n=6),给予EphA4-Fc,再灌注后6、24、48小时取材检测;2建立大鼠前脑短暂缺血/再灌注模型,药物干预组缺血前经侧脑室内给予可溶性融合蛋白ephrinA3-Fc以激活EphA4受体,或者给予可溶性融合蛋白EphA4-Fc阻断体内EphA4-ephrinA3相互作用。留取海马组织,通过克紫染色观察海马神经元损伤情况;分别采用原位末端标记法(TUNEL)、Caspase 3活性测定法检测大鼠海马组织中神经神经元凋亡的情况;以Western blot方法检测大鼠海马组织中EphA4与ephrinA3的表达水平变化。从而了解EphA4与ephrinA3在大鼠脑缺血/再灌注后神经元损伤过程中的表达变化。结果:1.短暂脑缺血/再灌注可以引起海马CA1区神经元迟发性死亡。在再灌注后不同时间点取海马组织进行尼氏染色,观察到进行性的CA1区神经元丢失。至缺血/再灌注后7天,CA1区细胞带消失,提示CA1区神经元大量死亡。Caspase 3活性在缺血/再灌注后6小时即有升高,随着时间推移在24小时及48小时继续升高。各时间点(OD值分别为2.3±0.19,2.2±0.28,1.9±0.015)与sham组(OD值为1.1±0.017)比较均具有显着性差异(P<0.05)。TUNEL染色的结果与Caspase3的结果类似,在叁个时间点TUNEL染色的阳性率分别为24.5±5.36,22.3±4.76,23.8±4.17),与sham组(5.33±3.33)比较均具有统计学意义(P<0.05)。上述结果提示,短暂脑缺血/再灌注可以引起海马CA1区神经元凋亡增加2.短暂脑缺血/再灌注后大鼠海马组织EphA4与ephrinA3蛋白表达均显着增加实验结果显示,与对照组相比,海马缺血/再灌注后6小时海马CA1区组织中ephrin A3的表达水平显着增高(IOD值为2.05±0.12 vs 0.78±0.02,P<0.05),随后明显减少,但在再灌注24 h与对照相比仍有显着差异,再灌注48 h逐渐回复至对照组水平。EphA4也出现了由缺血诱导的增高,再灌后6小时与对照组相比即有明显增高(2.21±0.12 vs 0.72±0.03, P<0.05 ),之后逐渐下降,再灌注后24小时与对照相比仍有明显差异,至48小时与对照组相比无明显差异。3.侧脑室内给予EphA4受体激动剂促进神经元的凋亡当侧脑室内给予激动剂ephrinA3-Fc后,Caspase 3的活性较单纯缺血/再灌注组有明显升高(6 h: 2.76±0.15 vs. 2.28±0.28,P<0.05;24 h:2.24±0.24 vs. 2.20±0.19,P<0.05;48 h:2.04±0.44 vs. 1.90±0.29,P<0.05),同时TUNEL染色阳性细胞亦有增加(6 h: 31.8±4.40% vs. 26.33±5.32%,P<0.05;24 h:25.50±4.03% vs. 23.8±5.56%,P<0.05;48 h:22.17±4.52% vs. 19.0±4.34%,P<0.05)。4.侧脑室给予EphA4受体阻断剂抑制神经元的凋亡当侧脑室内给予阻断剂EphA4-Fc后,Caspase 3的活性较单纯再灌注组降低(6 h:1.73±0.30 vs. 2.28±0.28;24 h:1.52±0.26 vs. 2.20±0.19;48 h:1.43±0.23 vs. 1.90±0.29,P<0.05),而TUNEL染色阳性细胞亦明显减少(6 h:17.5±4.97% vs. 26.33±5.32%;24 h:15.0±4.47% vs. 23.8±5.56%;48 h:12.0±3.46% vs. 19.0±4.34%,P<0.05),提示EphA4-ephrinA3系统的活化可能参与了再灌注后神经元凋亡的发生。小结:1.短暂缺血/再灌注可导致海马CA1区神经元的迟发性死亡;2.缺血/再灌注引起的神经元凋亡是导致海马CA1区神经元迟发性死亡的重要原因,而且神经元凋亡主要是Caspase依赖性的;3.短暂脑缺血/再灌注可诱导海马CA1区EphA4与ephrinA3的表达明显增高,其时间过程与Caspase增高的时间过程一致,提示EphA4与ephrinA3的表达增高在CA1区神经元损伤过程中发挥重要作用。4. EphA4与ephrinA3参与了缺血/再灌注后海马区神经元的凋亡过程,激活EphA4可导致神经元的凋亡增加,而阻断EphA4的作用可部分抑制再灌注后海马区神经元的凋亡。二、EphA4-ephrinA3系统通过调控外向整流氯离子通道在缺血/再灌注损伤中发挥作用目的:已有研究显示,在中枢神经系统,氯通道的活动与神经元损伤及凋亡有密切关系。海马CA1区锥体神经元缺血损伤后外向整流氯离子通道(ORCC)功能活动增强,可能通过改变细胞容积引起神经元的凋亡。而应用氯离子通道阻断剂可以抑制脑缺血后引起的迟发性神经元死亡。另有研究显示ORCC的活化可由酪氨酸激酶受体介导。EphA4为在海马区表达丰富的酪氨酸激酶受体,设想也可能对氯通道功能产生影响,从而参与神经元凋亡过程。本实验通过制备缺血/再灌注大鼠海马脑片,并对锥体神经元进行全细胞脑片膜片钳记录,利用具有相对完整神经元和胶质细胞网络的大脑切片中,分别给予EphA4受体阻断剂EphA4-Fc和激动剂ephrinA3-Fc,观察EphA4-ephrinA3系统通过对氯通道功能的影响在缺血/再灌注损伤中发挥的作用。方法:选择出生后21- 25天健康雄性Wistar大鼠。体重180 ~ 250 g。伪手术组(n=6),进行伪手术并制备脑片后正常人工脑脊液孵育并行电生理记录;缺血/再灌注6小时组(n=6),制备缺血/再灌注模型,并在再灌注后6小时制备脑片,进行电生理记录;缺血/再灌注24小时组(n=6),制备缺血/再灌注模型,并在再灌注后6小时制备脑片,进行电生理记录;EphA4-Fc组+伪手术组(n=6):伪手术后6小时制备脑片,在记录前给予EphA4-Fc孵育10分钟;EphA4-Fc组+再灌注组:再灌注后6小时制备脑片,在记录前给予EphA4-Fc孵育10分钟;ephrinA3-Fc组+伪手术组(n=6):伪手术后6小时制备脑片,在记录前给予ephrinA3-Fc孵育10分钟;ephrinA3-Fc组+再灌注组(n=6):再灌注后6小时制备脑片,在记录前给予ephrinA3-Fc孵育10分钟;ephrinA3-Fc及EphA4-Fc以PBS配制高浓度贮存液,使用时以人工脑脊液稀释使终浓度为10μg/ml。结果:1.短暂脑缺血后大鼠海马CA1区锥体神经元外向整流氯通道的功能增强,表现为氯电流增加。短暂脑缺血后大鼠海马CA1区锥体神经元外向整流氯通道电流持续增强。缺血后6小时和24小时的全细胞电流从正常的9.11±1.2pA/pF (-80mV)和64.2±6.9pA/pF (80mV)分别增强为15.80±1.70、17.70±1.93 pA/pF (-80mV)和120.16±12.3、129.82±11.83 pA/pF (+80 mV) (n=15,p <0.05 ),与对照组相比电流明显增强。2.EphA4受体激动剂ephrinA3-Fc增强外向整流氯通道电流在正常脑片上给予EphA4受体激动剂ephrinA3-Fc后,氯通道电流有轻微升高,但与正常对照相比,差异无显着性。但在缺血/再灌注后6小时的脑片上,激动剂ephrinA3-Fc可使大鼠海马CA1区锥体神经元外向整流氯通道的功能明显增强。以EphA4-Fc孵育脑片10分钟后进行全细胞膜片钳记录,与单纯缺血/再灌注时记录到的电流(15.80±1.70 pA/pF)相比有显着差异。结果显示,ephrinA3-Fc可使外向整流氯通道电流进一步增加,分别为16.980±1.9pA/pF (-80mV)和132.35±10.33 pA/pF (80mV),与缺血/再灌注组相比,差异具有显着性。。3.EphA4受体阻断剂EphA4-Fc抑制外向整流氯通道电流在正常脑片上给予EphA4受体阻断剂EphA4-Fc后,同样未观察到氯通道电流的显着变化。但在缺血/再灌注后6小时的脑片上,EphA4受体阻断剂EphA4-Fc可使外向整流氯通道电流下降。以EphA4-Fc孵育脑片10分钟后进行全细胞膜片钳记录,与单纯缺血/再灌注时记录到的电流(15.80±1.70 pA/pF)相比有显着差异。结果显示,EphA4-Fc可使外向整流氯通道电流下降,分别为13.30±1.3pA/pF (-80mV)和113.35±7.33 (80mV),与缺血/再灌注组相比,差异具有显着性。小结:1.脑缺血后大鼠海马CA1区锥体神经元外向整流氯通道功能活动持续性增强。2.给予EphA4受体激动剂和阻断剂可影响缺血/再灌注后外向整流氯通道的电流。激动剂使通道电流进一步增加,而阻断剂可部分抑制通道电流。提示EphA4-ephrinA3系统可通过对氯通道影响在缺血/再灌注损伤中发挥作用。叁、EphA4-ephrinA3系统在脑缺血再灌后神经元迟发性死亡过程中的信号通路-MAPKs通路研究目的:ephrin配体活化Eph受体的信号传递包括Rho GTPases,MAPK,Src激酶和PI3激酶等多种下游信号通路。其中MAPKs包括ERK1/2,JNK和p38 MAPK,在多种病理情况下参与了神经元存活和凋亡的调控过程。因此,我们拟通过建立短暂前脑缺血/再灌注模型并给予EphA4-Fc或ephrinA3-Fc,观察在大鼠脑海马缺血/再灌注损伤后MAPKs信号通路中P38、ERK1/2及JNK的变化,及其与EphA4-ephrinA3系统表达变化的关系,以分析MAPKs信号通路各途径在EphA4-ephrinA3系统中的作用。方法:1.选取成年雄性Wistar大鼠,分组同第二部分。2.建立大鼠全脑短暂缺血/再灌注模型,在缺血前侧脑室内给予可溶性融合蛋白ephrinA3-Fc以激活EphA4受体,或者给予可溶性融合蛋白EphA4-Fc阻断体内EphA4-ephrinA3相互作用,在再灌注后不同时间点留取海马组织,以Western blot方法检测大鼠海马组织中中P38、ERK1/2及JNK的表达变化,并分析其意义。结果:1.缺血/再灌注可引起p-P38在CA1区表达增高,再灌注6小时即与对照组有显着差异(0.83±0.18 vs 0.45±0.23,P<0.05)。给予ephrinA3-Fc后缺血/再灌注诱导的p-P38表达升高更为显着(分别为1.23±0.14,1.65±0.13,2.09±0.07),而EphA4-Fc对再灌注后p-P38的表达未产生明显改变。2缺血/再灌注可诱导海马CA1区ERK1/2的活化,在各检测的时间点表达逐渐增高,但侧脑室给予EphA4-Fc及ephrinA3-Fc均不影响缺血/再灌注所诱导的表达升高。3缺血/再灌注可诱导海马CA1区p-JNK的活化,在再灌注后6小时有明显升高,再灌注后48小时恢复正常水平,侧脑室给予EphA4-Fc及ephrinA3-Fc均不影响缺血/再灌注所诱导的表达升高。小结:1. EphA4-ephrinA3系统参与缺血/再灌注损伤的作用与与MAPK通路的活化密切相关,尤以P38途径的作用重要,但给予阻断剂EphA4-Fc未明显抑制P38的活化,其原因有待进一步研究;2. ERK1/2与JNK途径参与了缺血/再灌注损伤的过程(缺血/再灌注均可使其活化),但在EphA4-ephrinA3系统中可能不发挥作用。结论:1、短暂缺血/再灌注引起海马CA1区神经元的迟发性死亡,以Caspase依赖的神经元凋亡为主。2、在缺血/再灌注诱导的神经元凋亡过程EphA4-ephrinA3系统发挥了重要作用,该系统由此参与缺血/再灌注诱导的神经元损伤。3、在缺血/再灌注引起的神经损伤过程,EphA4-ephrinA3加强了外向整流氯通道的活动使氯通道电流增加,这可能是EphA4-ephrinA3引起神经元凋亡的重要因素之一。4、MAPKs通路介导了EphA4-ephrinA3在缺血/再灌注损伤中的作用,其中P38途径的作用尤为重要。(本文来源于《山西医科大学》期刊2011-03-25）
迟发性神经元死亡论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的本研究旨在探讨溶酶体酶抑制剂CA074对全脑缺血,复灌大鼠海马CA1区神经元死亡的影响。方法将280g-300g雄性SD大鼠随机分3组。除假手术组,模型组和CA074组各4个时间点,每时间点3只。分别为假手术组(n=6)、缺血/复灌模型组(n=15)、CA074组(n=15)。采用四血管法制作全脑缺血复灌损伤模型组,双侧椎动脉电凝24h后夹闭双侧颈总动脉,缺血20分钟后恢复灌注;假手术组除不夹闭双侧颈总动脉外其余操作同模型组;CA074组在缺血前侧脑室注射CA074 1ug,其余操作同模型组。假手术组、缺血,复灌
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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